CRISPR/Cas9システムによるゲノム編集のオールインワンベクターを構築します。お客様のターゲットに対するgRNAデザインからベクター構築、プラスミド調製のほか、オプションで培養細胞を用いた活性評価サービスを提供します。

ご提供いただくもの

 

基本作業・期間

配列デザイン/オリゴDNA合成ご提供いただいた配列情報を用いて最適なターゲット配列をデザインし、オリゴDNAを合成します。3週間
オリゴアニーリング/CRISPR Nuclease Vector への挿入オリゴをアニーリングして二本鎖を形成させ、ご希望のCRISPR Nuclease Vectorにライゲーション反応で挿入します。
大腸菌の形質転換/ミニプレップ反応液で大腸菌を形質転換し、得られたコロニーからプラスミドをミニプレップにより抽出します（トランスフェクショングレード）。
インサート配列確認シーケンス解析により目的配列が挿入されたことを確認します。

 

参考価格

コンストラクト数価格
1コンストラクト¥75,000 / vector （計 ¥75,000）
2コンストラクト¥70,000 / vector （計 ¥140,000）
3コンストラクト¥49,500 / vector （計 ¥148,500）
プラスミド精製（オプション）¥30,000～ / vector  (50ug～) 納期2週間～
活性評価サービス（オプション）¥220,000 （3コンストラクトまで） 納期3週間

 

注意事項

  • より切断活性の高いCRISPR/Cas9ベクターを下流の実験に用いていただくため、1ターゲット遺伝子に対し少なくとも3つのgRNAを設計することを推奨します。
  • ご提供配列によってはご希望の数はgRNAをデザインできないこともございます。その場合は改めてご相談させていただきます。
  • オフターゲット検索対象の生物種はヒト、マウスのみになります。
  • ゲノムDNA編集は、gRNAの配列だけではなく、遺伝子導入効率、発現効率、変異の有無、標的配列へのアクセス、メチル化、ヘテロクロマチン化など様々な要因によって左右されます。そのためお客様ご利用予定の生物で、ゲノムDNA編集が可能なことを必ずしも保証している訳ではないことを予めご理解ください。
  • GeneArt® Genomic Cleavage Detectionキットによる切断効率の評価では、電気泳動画像をGel Image analyzerで解析します。弊社側でいずれのコンストラクトも標的配列の切断が全く確認されなかった場合には、切断効率の評価サービスの価格を50%に減額いたします。判断の基準は、電気泳動画像解析において切断されたバンドが全く検出されないか、バンドが存在するか、のどちらかです。ある一定以上の切断効率を保証しているサービスではございません。
  • プラスミドDNAについては、大腸菌グリセロールストックでの納品は対応しておりません
  • プラスミド収量、精製度、指定レベル以下のエンドトキシンについては保証しておりません
  • お客様の目的がノックイン実験の場合には、必要となるドナーベクターのデザインはお客様にて実施頂きます

 

GeneArt® CRISPR Nuclease Vector

CRISPR/Cas9システムによるゲノム編集のオールインワンベクターです。標的配列に相補的なgRNAを設計 し、ベクターへクローニングして細胞へ導入して使用します。このベクターにはレポーター遺伝子のCD4遺伝子かOrange Fluorescent Protein（OFP）遺伝子が含まれています。これらの細胞での発現を目印に、トランスフェクション効率の確認や、抗CD4抗体が結合した磁気ビーズやセルソーターでCRISPR/Cas9を発現した細胞を濃縮し、目的細胞をスピーディにクローニングできます。製品のより詳しい情報はこちらから

 

GeneArt® Genomic Cleavage Detection Kit

ゲノム編集の標的箇所付近のDNAをPCRで増幅し、再度アニールすると、塩基の挿入/欠失が起こった箇所ではヘテロ二本鎖ミスマッチが形成されます。このミスマッチを特異的に認識して切断する特別な酵素で処理し、その断片をゲル電気泳動して確認します。GeneArt®Genomic Cleavage Detection Kitは、ゲノムDNAやPCR産物の精製を省くことで、標的遺伝子の変異が簡単に検出できる特長をもったキットです。製品のより詳しい情報はこちらから