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FastDigest 제한 효소(Restriction Enzyme)—Thermo Scientific
단일 완충액에 176가지 효소를 포함하여 간편한 사용성.
Thermo Scientific FastDigest 제한 효소(Restriction Enzyme)는 다음과 같은 특징을 가진 고급 효소 제품입니다.
- 5-15분 이내 완전 분해
- 다운스트림 애플리케이션에서 100% 완충액(buffer) 호환성
- Gel에 직접 로딩
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40년 이상 경험의 산물
FastDigest 컬렉션은 업계에서 가장 광범위한 제한 효소 컬렉션 중 하나입니다. 효소학 분야에서 수십년간 습득한 전문 지식, 광범위한 동일전달제한효소(isoschizomer) 선택 옵션, 당사의 첨단 제조 시설의 고순도 효소 제조 능력 등을 통해 범용 완충액을 사용한 최초의 단순화된 제한 효소 시스템 생산이 가능하게 되었습니다.
FastDigest 제한 효소의 장점
| FastDigest 제한 효소 | 기존 제한 효소 | |
|---|---|---|
| 완충액 시스템 | 단일 범용 완충액 | 최대 20가지 완충액 |
| 이중/다중 제한 분해 | 제한 없음 – 모든 176가지 효소가 단일 완충액에서 100% 활성 상태 | 완충액 호환성에 따라 제한됨 |
| 반응 시간 | 5–15분 | 1시간–하룻밤 이상 |
| Gel에 직접 로딩 | 예 | 아니오 |
| 다운스트림 애플리케이션 | 100% 완충액 호환성 | 부분 호환성 |
| Star 활성 | 아니오 | 예 |
| 활성 정의 | FastDigest 완충액에서 1µL의 FastDigest 효소가 5 ~ 15분 이내에 1µg의 DNA 기질을 분해합니다. | 효소에 대한 최적 완충액에서 1unit의 효소가 60분 이내에 1µg의 lamda DNA를 가수분해합니다. |
단일 완충액에서 100% 활성
FastDigest Green Buffer 및 Thermo Scientific FastDigest Buffer는 당사가 독점권을 가진 분해용 완충액으로 모든 FastDigest 제한 효소의 100% 활성을 지원합니다. 이 시스템은 어떠한 효소 조합에서도 이중 및 다중 분해가 가능합니다. 순차적 분해 또는 완충액 변경이 필요하지 않습니다.
FastDigest Green Buffer를 통한 5분 내의 단일, 이중 및 삼중 분해
5분 내의 플라스미드 DNA 분해:
- M열: Thermo Scientific GeneRuler Express Ladder(카탈로그 번호 SM1553)
- 1열: 대조군, 미분해 플라스미드 DNA
- 2열: FastDigest EcoRI
- 3열: FastDigest EcoRI 및 FastDigest KpnI
- 4열: FastDigest EcoRI, FastDigest KpnI 및 FastDigest SmaI
다운스트림 애플리케이션에서 100% 완충액 호환성
리가아제, 포스파타아제, 키나아제 및 중온성 DNA 중합효소와 같은 DNA/RNA 변형 효소는 FastDigest 및 FastDigest Green Buffer에서 100% 활성을 나타냅니다. 따라서 다운스트림 애플리케이션에 사용되는 효소를 FastDigest 반응 믹스에 직접 추가할 수 있습니다. 완충액 변경이나 정제 단계가 필요하지 않습니다.
| DNA/RNA 변형 효소 | FastDigest Green Buffer/FastDigest Buffer에서의 활성 |
|---|---|
| DNA 중합효소 I, E. coli | 100% |
| Klenow 절편 | 100% |
| Klenow 절편, exo- | 100% |
| T4 DNA 중합효소 | 100% |
| T7 DNA 중합효소 | 100% |
| T4 DNA 리가아제* | 75–100% |
| FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase | 100% |
| T4 폴리뉴클레오티드 키나아제 | 100% |
* T4 DNA 리가아제 활성을 위해 0.5mM ATP가 필요합니다.
5-15분 이내 완전 분해
단일 완충액에서 5-15분 이내의 이중 및 다중 분해:
- 시간과 노력 절감 및 처리량 증가
- 모든 유형의 DNA 템플릿(플라스미드 DNA, PCR 산물, 게놈 DNA)에 대해 분해 시간 제공
- 어떤 템플릿에 대해서도 하룻밤을 넘기는 장시간 분해가 필요하지 않음
- 짧은 반응 시간으로 Star 활성이 제거됨
| 기존 제한 효소 순차적 분해 | FastDigest 제한 효소 단일 반응 혼합물 | ||
|---|---|---|---|
| Apal 반응 설정 | ~2분 | FastDigest ApaI 및 XhoI 반응 설정 | ~2분 |
| 인큐베이션 | 60분 | 인큐베이션 | 5분 |
| Xhol 반응 설정 | ~2분 | — | — |
| 인큐베이션 | 60분 | — | — |
| 총 소요 시간 | >2시간 | 총 소요 시간 | 7분 |
무색 FastDigest Buffer와 성능은 동일하지만 반응 혼합물을 겔에 직접 로드할 수 있도록 개발된 FastDigest Green Buffer는 추가적인 편리함을 제공합니다. 10X FastDigest Green Buffer는 밀도 시약과 함께 직접 로딩을 위한 2가지의 추적 염료를 포함합니다. 청색 염료는 1% 아가로스 겔에서 3–5kb DNA 절편과 함께 이염되며 424nm의 최대 여기파장이 나타납니다. 황색 염료는 1% 아가로스 겔에서 10bp DNA 절편보다 더 빠르게 이염되며 최대 여기파장은 615nm입니다.
FastDigest Green Buffer
FastDigest Green Buffer가 포함된 반응 혼합물:
- 1열: 전기영동 수행 전 gel에 로딩한 상태
- 2열: 전기영동 수행 후 분리된 상태
Star 활성이 제거된 짧은 프로토콜 시간
FastDigest (Green) Buffer와 함께 조합하여 사용되는 FastDigest 효소는 Star 활성을 제거하도록 설계되었습니다.
- 짧은 인큐베이션 시간(5–15분), 장시간 분해 불필요
- 모든 효소에 대해 최적 pH와 염 농도를 가진 범용 완충액 사용
- 최적의 효소 및 글리세롤 농도
기존 제한 효소는 장시간의 인큐베이션, 높은 효소 및/또는 글리세롤 농도, 높은 pH 값 또는 낮은 이온 강도로 인해 Star 또는 “이완” 활성이 나타날 수 있습니다. FastDigest 효소는 어떠한 Star 활성도 나타나지 않으면서 5분 이내 단일 및 이중 분해뿐만 아니라 삼중 분해도 가능하여 이러한 모든 문제를 해결해 줍니다.
Star 활성 없이 5분 이내 플라스미드 DNA의 단일 및 이중 분해
5분 내의 플라스미드 DNA 분해:
- 1열: FastDigest SmaI
- 2열: FastDigest EcoRI
- 3열: FastDigest SmaI 및 FastDigest EcoRI 이중 분해
- M열: GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder(카탈로그 번호 SM1333)
- C열: 대조군, 미분해 플라스미드 DNA
참고문헌
리소스
지원
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.