Qubit RNA IQ 어세이

RNA의 무결성과 품질을 신속하게 평가할 수 있습니다

Qubit RNA IQ 어세이는 RNA 시료의 무결성 및 품질(IQ)을 신속히 평가하기 위해 개발되었습니다. 여기에는 두 가지 염료가 사용되는데, 하나는 크고 변형되지 않았거나 구조화된 RNA에 결합하고, 다른 하나는 작고 손상된 RAN에 결합합니다.

RNA 품질 어세이

제품	어세이 수	카탈로그 번호
Qubit RNA IQ Assay Kit	75	Q33221
Qubit RNA IQ Assay Kit	275	Q33222
Qubit RNA IQ Standards	1 세트	Q33235

간단한 프로토콜

Qubit RNA IQ 어세이를 사용하려면 RNA IQ 작업 용액에 1µL의 시료(0.5–1.5µg RNA 포함)만을 추가하고 Qubit 4 또는 Qubit Flex 형광측정기에서 측정하기만 하면 됩니다. 특별한 취급, 지루한 시료 준비 또는 결과를 위해 오래 기다릴 필요가 없습니다. 시료의 IQ 점수(1에서 10 사이의 숫자)는 시료에서 작은 RNA 분자에 대한 큰 RNA 분자의 퍼센트를 나타냅니다.

Qubit RNA IQ 어세이 결과

RNA IQ 점수는 다른 RNA 품질 점수와 마찬가지로 1-10 사이의 값입니다. 특허받은 알고리즘을 기반으로 하여 시료에서 소형 RNA에 대한 대형 및/또는 구조화된 RNA의 비율을 나타냅니다. 낮은 점수 (A)는 시료가 주로 소형 RNA로 이루어져 있음을 나타내고, 높은 점수 (B)는 시료가 주로 대형 및/또는 구조화된 RNA로 이루어져 있음을 나타냅니다.

표에 나와 있는 것처럼 Qubit RNA IQ 어세이는 Agilent™ Bioanalyzer™ 시스템과 같은 다른 방법에 비해 훨씬 간단하고 빠르게 사용할 수 있습니다. 또한 Qubit RNA IQ 점수는 샘플 데이터 페이지에서 입증된 것처럼 Bioanalyzer RNA integrity number(RNA)보다 RT-qPCR에 의한 RNA 품질 측정에 더욱 일치합니다.

Qubit RNA IQ 어세이와 Agilent Bioanalyzer를 사용하여 RNA 시료 품질을 측정하는 프로토콜

기기 및 분석	Qubit 4 형광측정기 및 RNA IQ 어세이	Agilent 2100 Bioanalyzer™ 기기 및 RNA 나노 칩*
어세이에 필요한 장비 및 시약 *	Qubit 4 형광측정기	Agilent 2100 Bioanalyzer 기기
	Qubit RNA IQ 어세이 키트	RNA 6000 나노 어세이 키트
	파이펫터	파이펫터
	Qubit 어세이 튜브	마이크로원심분리 튜브
		칩 프라이밍 스테이션
		IKA 볼텍서
		마이크로원심분리기
		컴퓨터
		가열 블록 또는 수조
		RNase-free water
장비 셋업	Qubit 4 형광측정기를 켭니다.	칩 프라이밍 스테이션의 시린지를 각각의 새 DNA 키트로 교체합니다.
		칩 프라이밍 스테이션의 베이스 플레이트를 조정합니다.
		칩 프라이밍 스테이션에서 시린지 클립을 조정합니다.
		바이오분석기 칩 선택기를 조정합니다.
		볼텍스 믹서를 셋업합니다.
		칩을 로드하기 전에 소프트웨어를 시작합니다.
시료 전처리 시간	약 5분	약 30-45분
시료 전처리	1. RNA IQ 버퍼에 RNA IQ 염료를 추가하여 Qubit RNA IQ 작업 용액을 준비합니다.	1. RNA 래더를 준비합니다.
	2. Qubit RNA IQ 작업 용액에 시료[1-20uL(0.5–1.5ug)] 및 표준물질을 추가합니다.	2. 젤을 준비합니다(10분 원심분리 포함).
		3. 젤 염료 혼합물을 준비합니다(10분 원심분리 포함).
		4. 칩에 젤 염료 혼합물을 넣습니다.
		5. 칩에 마커를 로딩합니다.
		6. RNA 래더 및 시료를 로딩합니다(1분 IKA 볼텍서 포함).
시료 안정성	약 1시간	5분 이내에 칩을 사용해야 함
분석 실행 시간	시료당 <4초	칩당 30분
정기적인 정비	없음	매달 씰 테스트를 실시하여 칩 프라이밍 스테이션의 성능을 확인합니다.
		전기영동 분석용: 전극 세척제를 사용하여 매일 전극을 세척합니다.
		칫솔과 증류수를 사용하여 매달 전극을 깨끗하게 세척합니다.
		이소프로판올(isopropanol)을 사용하여 한 달에 한 번(또는 액체를 흘린 후) 초점 렌즈를 세척합니다.
유지관리에 필요한 제품	없음	RNaseZAP(전극 세척)
* Agilent G2938-90037 및 G2946-90003 사용자 설명서 및 Thermo Fisher Scientific MAN0017210 빠른 참조 카드를 토대로 작성하였습니다.

샘플 데이터

이 데이터 예에서는 Qubit RNA IQ 어세이의 두 시약이 각각 대형 및 소형 RNA에 대해 특이도가 높음을 보여주며, 대형 RNA의 비율이 증가함에 따라 RNA IQ 점수가 적절히 증가한다는 것을 보여줍니다.

대형 및 소형 RNA용 RNA IQ 어세이 시약의 선택성

100ng/mL rRNA(E. coli) 및 다양한 siRNA 양(0–50ng/µL)을 함유한 세 개 시료를 Qubit 4 형광측정기에서 Qubit RNA IQ 어세이를 사용해 분석하였습니다. 그래프는 이들 시료의 (A) 상대적인 형광 단위(RFU) 및 (B) IQ 점수를 보여줍니다. 이 데이터는 염료가 대형(예: rRNA) 및 소형(예: siRNA) RNA에 각각 특이적이며 IQ 점수가 시료 내 대형 RNA의 비율과 큰 상관관계가 있음을 보여줍니다.

이 데이터 예에서는 RNase A에 노출된 상태에서 RNA 시료가 시간이 지남에 따라 분해되고 RNA IQ 점수가 낮아진다는 것을 보여줍니다. 예상처럼, 더 많은 양의 RNase A를 사용하면 분해가 더 빨라집니다.

Qubit RNA IQ 어세이로 측정되는 RNase A에 의한 rRNA 분해

3개의 100ng/mL rRNA 용액 시료를 멀티플렉스 염료와 검사 버퍼가 포함된 최종 검사 용액에서 다른 양의 RNase A와 함께 인큐베이션 했습니다. (A) RNA IQ 점수에 반영된 것처럼 60분에 걸쳐, 더 많은 양의 RNase A는 RNA를 더 빠르게 분해합니다. (B) 10 fM RNase A에 노출 시, 시간 경과에 따라 대형 RNA 형광이 점진적으로 감소하고 소형 RNA 형광이 증가했습니다. (C) 100 fM RNase A에 노출 시, 변화가 더욱 빠르게 발생하였습니다.

더 많은 RNA 품질 샘플 데이터 보기

RNA IQ 애플리케이션 노트 다운로드

무료 BioProbes 기사 보기: 업데이트된 Qubit 탁상용 형광측정기를 사용한 RNA 품질 분석

Qubit 형광법과 NanoDrop UV 형광을 결합하여 RNA 양, 품질 및 순도 측정

RNA 분석의 신뢰성 및 재현성은 이미 알려진 양, 품질 및 순도의 RNA로 시작해야 합니다. Qubit 4 또는 Flex 형광측정기 상에서의 Qubit RNA IQ 어세이와 NanoDrop 분광광도계를 사용한 UV 흡광도 측정의 결합은 RNA 시료의 양, 품질 및 순도를 평가하는 가장 빠르고 쉬운 방법 중 하나를 제공합니다.

NanoDrop 분광광도계는 단지 1µL의 시료를 필요로 합니다. 간단한 세 가지 측정을 통해, 핵산의 총량(260nm), 단백질 오염(280nm) 및 시료에 존재하는 모든 페놀 또는 기타 용매 오염물질(230nm)을 알아낼 수 있습니다.

Qubit RNA XR(extended range), BR(broad range) 및 HS(high sensitivity) 어세이를 RNA 정량에 사용할 수 있습니다. 이 어세이는 원형(intact) RNA에만 선택적으로 결합하는 염료를 포함하므로 260nm에서 흡수하는 DNA가 포함된 시료 뿐만 아니라 순수 RNA 시료에도 사용할 수 있습니다.

Qubit 4 형광측정기/NanoDrop One 분광광도계 번들을 살펴보십시오.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

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