디지털 PCR을 이용한 세포 및 유전자 치료제 제조

세포 및 유전자 치료제를 위한 바이러스 벡터 및 플라스미드 개발

세포 및 유전자 치료제에 대한 수요가 계속 증가함에 따라 바이러스 벡터 및 플라스미드 DNA 개발에 대한 수요 역시 증가하고 있습니다. 유전자 및 세포 치료제는 유전자 전달을 위해 아데노 관련 바이러스(AAV), 렌티바이러스, 레트로바이러스, 헤르페스바이러스, 아데노바이러스 등을 포함한 다양한 바이러스 벡터를 활용합니다. 이 중 AAV 매개 유전자 치료제는 벡터에 의한 감염이 병원성을 나타내지 않고 AAV가 스스로 복제할 수 없기 때문에 안전성 측면에서 가장 주목받고 있습니다. AAV 바이러스 벡터와 플라스미드 DNA 주형에서 생성된 메신저 RNA는 키메라 항원 수용체(CAR)를 생성하고 CAR-T 요법을 가능하게 하는 T 세포로 운반하는 중요한 중간체입니다.

유전자 치료제에서 정확한 바이러스 역가 측정

바이러스 입자가 살아있는 세포에서 생성된 다음 정제되기 때문에 잠재적 치료제의 농도를 제어하기는 쉽지 않습니다. 또한, 바이러스 벡터를 생성하고 정제하는 과정은 숙주 세포 DNA, 마이코플라스마 및 기타 오염 물질로 인한 오염에 취약합니다. 바이러스 역가는 정확한 제형을 보장하기 위해 정확하고 일관되게 측정되어야 합니다. 유해한 외래성 인자(바이러스, 세균, 진균) 및 오염 DNA를 최고의 민감도로 검출하고 선별하여 제품의 품질과 안전성을 확보해야 합니다.

Real-Time PCR은 여전히 세포 및 유전자 치료제에 사용되는 AAV 등의 치료 바이러스 벡터의 정량화를 위한 표준 도구로 여겨지고 있지만, 디지털 PCR(dPCR)은 바이러스 벡터 생산 및 특성화에 필요한 다양한 분석 어세이에서 표적 DNA 분자의 정량화에 상당한 이점을 제공합니다.

Real-Time PCR과 달리 dPCR은 핵산의 절대 수를 제공하여 AAV 벡터, 박테리아 오염 물질 및 잔류 숙주 세포 DNA의 정확한 정량화를 가능하게 합니다. 참조 표준이 필요하지 않으므로 정밀도가 더욱 높고 편차의 원인이 차단됩니다. Real-Time PCR에 사용되는 표준 곡선의 변동성은 부분적으로 관련 DNA 종의 서로 다른 구조(원형, 초나선형, 선형 DNA 또는 바이러스 입자)에 기인하는 경우가 많습니다. 또한, dPCR은 AAV 매개 유전자 요법의 개발 중에 사용되는 용액에 존재하는 것을 포함하여 증폭에 영향을 미치는 오염 물질에 덜 민감합니다.

Absolute Q Viral Titer dPCR 어세이

Applied Biosystems Absolute Q Viral Titer dPCR 어세이는 바이러스 벡터를 간단한 방식으로 정확하게 정량화할 수 있도록 해줍니다. 이러한 어세이는 개별적으로 실행하거나 연구 대상 유전자가 포함된 맞춤형 어세이를 통해 다중화 방식으로 농도를 측정하고 생물약제 및 유전자 요법 연구를 위한 품질 평가를 지원합니다.

Absolute Q dPCR 어세이의 특징:

간편한 사용—디지털 PCR 기기와 간편하게 조합할 수 있는 간소화된 워크플로우
신속함—QuantStudio Absolute Q Digital PCR 시스템과 함께 사용하면 90분 내로 실제 작업 시간이 최소화됩니다.
신뢰성—성능 보증이 지원되는 검증된 어세이를 사용하여 데이터를 확실하게 분석할 수 있습니다.*

당사는 모든 사전 설계형 Absolute Q dPCR 어세이의 품질을 보장합니다

당사는 dPCR 실험을 위한 모든 사전 설계형 Absolute Q 어세이의 성능을 보장합니다. 당사의 응용 분야별 어세이 포트폴리오는 최상의 품질과 성능을 제공합니다. 이러한 어세이는 최신 주석 및 최고 표준 Applied Biosystems TaqMan 화학 제품을 활용하여 설계되고 검증되었습니다.

Absolute Q Digital PCR 어세이가 적합성 명시 문서 내용대로 작동하지 않는 경우, 당사는 제품을 무료로 교체하거나 타 제품을 구매할 수 있도록 고객에게 크레딧을 제공합니다.*

Absolute Q dPCR 어세이 보증에 대해 자세히 알아보기 ›

그림 1. QuantStudio Absolute Q dPCR 시스템을 사용한 AAV 및 CMV 바이러스 벡터 희석 시리즈의 정량화.

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그림 2. Absolute Q(TM) AAV 및 Absolute Q(TM) CMV dPCR 어세이 제품을 사용하여 다양한 디지털 PCR 플랫폼에서의 AAV 및 CMV 바이러스 벡터 희석 시리즈 정량화.

Poster: Fully-integrated digital PCR system for robust and consistent viral titer quantification

Unlike other dPCR methods that rely on stochastic processes to generate micro-reactions by droplet formation, microfluidic array plate (MAP) technology facilitates automated sample distribution consistently into over 20,000 microchambers and utilizes >99% of the bulk reaction to minimize sample loss. Here we demonstrate how the increased robustness and consistency possible with MAP technology improves AAV viral titer quantification by performing comparison experiments using the Applied Biosystems™ QuantStudio™ Absolute Q™ Digital PCR system, as well as a comparison performed using a droplet digital PCR instrument.

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Characterization of AAV Genomic Titer on the Applied Biosystems™ QuantStudio™ Absolute Q™ dPCR System

Quantification of genomic copies (GC/mL) is important for characterizing rAAV. While quantitative PCR (qPCR) is considered the gold standard method for determining the genomic titer, this approach requires the use of standard curves and is thus more susceptible to variation from run to run. dPCR provides significant advantages for analytical assays necessary for viral vector production and characterization without the need for a standard curve. dPCR is also less sensitive to contaminants that affect amplification, including those present in solutions used during the development of AAV-mediated gene therapies.

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맞춤 설계 어세이

원하는 어세이 제품을 찾지 못했습니까? 당사에 문의하면 연구 성공을 위해 당사의 전문가가 연구 대상 표적 서열을 기반으로 하는 공식화된 디지털 PCR 어세이를 설계하는 데 도움을 드릴 수 있습니다. 또는, 자체적으로 설계한 프라이머/프로브 시퀀스를 전달해주십시오.

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보완 마스터 믹스

Absolute Q DNA Digital PCR Master Mix(5X)는 최소한의 처리 단계로 간단한 워크플로우에서 QuantStudio Absolute Q Digital PCR 시스템 및 Absolute Q Digital PCR 어세이와 함께 사용하도록 최적화되었습니다. 5X 제형은 더 많은 샘플을 분석할 수 있으며 표준 곡선을 사용하지 않고도 DNA 표적을 정확하게 정량화할 수 있습니다.

제품 주요 특징: