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La PCR digital es un nuevo enfoque para la detección y cuantificación de ácidos nucleicos que ofrece un método alternativo a la PCR cuantitativa en tiempo real convencional, haciendo foco en cuantificación absoluta y detección de alelos raros. La PCR digital funciona mediante la división de una muestra de ADN o ADNc en muchas reacciones de PCR individuales en paralelo; algunas de estas reacciones contendrán la moléculatarget (positivo), mientras que otras no (negativo). Una sola molécula puede amplificarse un millón de veces o más; durante la amplificación se utiliza la química TaqMan® con sondas específicas marcadas con diferentes fluoróforos. En aquellos casos en los que no haya ninguna molécula target presente, no se generará ninguna señal. Tras el análisis de PCR, la fracción de reacciones negativas se usa para generar un recuento absoluto del número de moléculas de la muestra, sin necesidad de estándares ni controles endógenos.
El uso de un chip nanofluídico proporciona un mecanismo cómodo y sencillo para ejecutar miles de reacciones de PCR en paralelo. Cada uno de los pocillos está cargado con muestra, mezcla maestra y reactivos de ensayo TaqMan®, y se analiza individualmente para detectar la presencia (positivo) o ausencia (negativo) de una señal de amplificación. Para representar los pocillos que pueden haber recibido más de una molécula de la secuencia objetivo, se aplica un factor de corrección mediante el modelo de Poisson.
Both digital PCR (dPCR) and real-time PCR (qPCR) can be used to detect and quantify nucleic acids. While these technologies share similarities, key differences in quantification methods confer each tool with application-dependent benefits or limitations.
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.