PCR digital

La PCR digital es un nuevo enfoque para la detección y cuantificación de ácidos nucleicos que ofrece un método alternativo a la PCR cuantitativa en tiempo real convencional para la cuantificación absoluta y la detección de alelos raros. La PCR digital funciona mediante la partición de una muestra de ADN o ADNc en muchas reacciones de PCR individuales en paralelo; algunas de estas reacciones contienen la molécula objetivo (positivo), mientras que otras no (negativo). Una sola molécula se puede amplificar un millón de veces o más. Durante la amplificación, se utiliza la química TaqMan® con sondas etiquetadas con tintes para detectar objetivos específicos de secuencia. Cuando no hay ninguna secuencia de destino presente, no se acumula ninguna señal. Tras el análisis de PCR, la fracción de reacciones negativas se usa para generar un recuento absoluto del número de moléculas de la muestra, sin necesidad de estándares ni controles endógenos.

El uso de un chip nanofluídico proporciona un mecanismo cómodo y sencillo para ejecutar miles de reacciones de PCR en paralelo. Cada uno de los pocillos está cargado con una mezcla de muestra, mezcla maestra y reactivos de ensayo TaqMan®, y se analiza individualmente para detectar la presencia (positivo) o ausencia (negativo) de una señal de criterio de valoración. Para representar los pocillos que pueden haber recibido más de una molécula de la secuencia objetivo, se aplica un factor de corrección mediante el modelo de Poisson.  

• No es necesario depender de referencias o estándares.
• Capacidad para aumentar la precisión mediante más repeticiones de PCR.
• Alta tolerancia a los inhibidores.
• Capacidad para analizar mezclas complejas.
• Detección lineal de pequeños cambios de plegado.

Los instrumentos y reactivos de la PCR digital mejoran el rendimiento de los ensayos TaqMan® actuales, lo que permite a las aplicaciones beneficiarse de mayores sensibilidad, precisión y cuantificación absoluta.