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GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System | GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis PLUS System | |
1 site/plasmid | ✓ | ✓ |
3 sites/plasmid | ✓ | |
Mutagenesis Efficiency | >90% for 1 site | >90% for 1, 2, or 3 sites |
# of Mutations | Up to 25 nt mutations in 1 site/plasmid |
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Time-to-Results | Typically less than 3 hours for 3 kb plasmid | Typically ~3 hours for 10 kb plasmid or smaller |
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Figura 1. Descripción general del flujo de trabajo para la mutagénesis de sitio dirigido GeneArt. El sistema depende de las propiedades inherentes de ADN metilasa, ADN polimerasa de alta fidelidad, enzimas de recombinación y endonucleasa McrBC.
La mutagénesis de base múltiple es común y hemos probado una sustitución, inserción y eliminación de 12 bases mediante un plásmido pUC19. Se llevó a cabo una sustitución de 12 bases aleatorias en un solo primer mutado. Alternativamente, se insertó un oligonucleótido aleatorio de 12 bases que contenía un codón de terminación en el plásmido pUC19 de tipo salvaje, seguido de la eliminación de las 12 bases exactas para restablecer el plásmido de tipo salvaje.
La eficacia de la mutagénesis para una sustitución, inserción o eliminación de 12 bases fue superior al 90 %. El rendimiento del kit de mutagénesis de sitio dirigido GeneArt era comparable a la última generación de kits de la competencia 'Q'.
Tome el control de sus experimentos de mutagénesis hoy mismo.
La figura indica la eficacia de la mutagénesis dirigida multisitio de 3 sitios de 1 o 3 pb cada uno en plásmidos de 5, 10 y 14 kb. En todos los casos, los sitios mutados (de 1 o 3 pb cada uno) incluyeron una inserción, una eliminación y una sustitución cada uno. El rendimiento del sistema PLUS de mutagénesis de sitio dirigido GeneArt era comparable a la última generación de kits de mutagénesis dirigida multisitio de la competencia. |
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