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L-glutamina é um suplemento de aminoácido comumente adicionado ao meio de cultura de células de mamíferos. A L-glutamina serve como fonte de energia auxiliar, especialmente quando as células se dividem rapidamente e também pode ser usada por células como fonte de nitrogênio para a síntese de proteínas, ácidos nucleicos, etc.
Em soluções aquosas, como meios de cultura celular, a L-glutamina se decompõe em amônia, que é tóxica às células. Para minimizar os efeitos disso, os pesquisadores podem adotar uma estratégia de alimentação continua baixos níveis de L-glutamina na cultura ou podem usar uma formulação alternativa de L-glutamina, como o suplemento Gibco GlutaMAX, projetado para ser mais estável em solução.
A L-glutamina é um nutriente essencial em culturas celulares para a produção de energia, bem como para a síntese de proteínas e ácidos nucleicos. Oferecemos este aminoácidos para suplementar meios de cultura tanto em formas líquidas como em pó. A glutamina em pó é fornecida como um produto químico de grau USP (United States Pharmacopeia), e as formulações líquidas são fornecidas como uma solução de estoque de 200 mm pronta para uso.
Embora a L-glutamina seja um nutriente essencial em culturas celulares, ela degrada espontaneamente em meios de cultura celular gerando amônia e Ácido Pirrolidonocarboxílico como subprodutos. O suplemento Gibco GlutaMAX é um suplemento para cultura de células melhorado que pode ser usado como um substituto direto para o L-glutamina em seu meio de cultura celular.
O suplemento glutaMAX é um dipeptídeo, L-alanina-L-glutamina, que é mais estável em soluções aquosas e não se degrada espontaneamente.
Oferecemos muitas formulações nas quais o dipeptídeo glutaMAX substitui a L-glutamina. As opções incluem DMEM, MEM, RPMI, Opti-MEM e outros meios basais.
Use o suplemento GlutaMAX na solução de 200 mm como substituto direto da L-glutamina em concentrações equimolares em sua formulação atual de meios de cultura celular. Use a solução de 200 mm suplemento GlutaMAX como substituto direto da L-glutamina em concentrações equimolares em sua formulação atual de meios de cultura celular. O suplemento GlutaMAX é estável em temperatura ambiente, o que significa que os ciclos de congelamento e descongelamento podem ser evitados, reduzindo o risco de contaminação por cultura devido a frequentes etapas de manuseio de líquidos.
Gibco GlutaMAX suplemento de meio de cultura e Gibco GlutaMAX meio de cultura são adequados para culturas de células de mamíferos aderentes e suspensas, com pouca ou nenhuma adaptação necessária.
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OBSERVAÇÃO: Este suplemento é adequado para culturas de células de mamíferos. Não é recomendado para culturas de células de insetos.
O mecanismo de utilização do dipeptídeo envolve a liberação gradual da peptídase durante a cultura para permitir a hidrólise gradual do dipeptídeo no meio (Figura 1). Isto pode ser comparado com a estratégia de alimentação gradual de uma cultura celular em que a L-glutamina é continuamente acrescentada na cultura, mas mantida em baixa concentração. O resultado é um metabolismo de energia eficiente e um alto rendimento de crescimento.
Figura 1. Aplicação controlada de L-glutamina de meios a células em cultura.
Quando as células são cultivadas em meios que contêm suplemento GlutaMAX, as células liberam gradualmente aminopeptidases que hidrolisam o dipeptídeo, liberando lentamente L-alanina e L-glutamina no meio de cultura. A L-glutamina e a L-alanina podem então ser utilizadas pelas células e para a produção de proteínas ou no ciclo TCA. Isto pode ser comparado com a estratégia de alimentação gradual de uma cultura celular em que a L-glutamina é continuamente acrescentada na cultura, mas mantida em baixa concentração. O resultado é um metabolismo de energia eficiente e um alto rendimento de crescimento sem excesso de amônia.
Figura 2. Células tronco mesenquimais humanas cultivadas com meios GlutaMAX e coradas com corante nuclear DAPI e anticorpo CD105 primário ligado a um anticorpo Invitrogen Alexa Fluor 488 secundário.
Figura 3. Células tronco mesenquimais humanas cultivadas com meios GlutaMAX sob condições adipogênicas diferenciadoras e coradas com marcador nuclear Hoechst 33342, Invitrogen LipidTOX™ Green Neutral Lipid Stain e Invitrogen MitoTracker Red.
Os resultados podem variar dependendo da linhagem celular usada. Em um exemplo específico da aplicação, as Figuras 4 e 5 mostram uma curva de crescimento de células AE-1 e uma produção de IgG 1 recombinante. O suplemento para cultura de células GlutaMAX demonstra melhor número de células e produtividade.
A Figura 6 compara as células MDBK cultivadas em D-MEM com 10% de FBS e L-glutamina ou suplemento glutaMAX. As células cultivadas em suplemento de GlutaMAX atingem a densidade de pico dois dias mais tarde e a viabilidade diminui menos rapidamente do que a observada em culturas com suplementação de L-glutamina. O pequeno aumento na fase de crescimento exponencial é atribuído ao tempo necessário para liberar a peptidase e dipeptídeo.
Isso permite um aumento gradual na disponibilidade de L-glutamina para as células. (Appl Biocem Biotecnol 30:29 (1991)).
Figura 4. Crescimento celular. As células do mieloma de camundongo AE-1 foram semeadas a 1 x 105 células/mL. As amostras foram coletadas diariamente após três dias e avaliadas em triplicado para densidade celular. A viabilidade celular foi determinada pela exclusão de azul de tripan. A densidade celular continuou a aumentar em amostras contendo o suplemento GlutaMAX além do ponto em que L-glutamina contendo amostras diminuiu na densidade celular.
Figura 5. Produção de IgG1. As amostras da Figura 4 também foram examinadas por ELISA para a produção de IgG1. Suplemento glutaMAX – contendo amostras que não foram realizadas com L-glutamina.
Figura 6. As células MDBK foram semeadas a aproximadamente 1 x 105 células/frasco em D-MEM com 10% de FBS e L-glutamina ou suplemento glutaMAX em frascos T de 25 cm 2.
L-glutamina é um aminoácido essencial exigido em formulações de meios de cultura celular. A L-glutamina participa da formação de nucleotídeos de purina e pirimidina, aminoácidos, glutationa, L-glutamato e outros aminoácidos, bem como na síntese proteica e produção de glicose. Diferentemente da maioria dos outros aminoácidos, a L-glutamina não é estável na solução. A taxa na qual a degradação prossegue é uma função de tempo, temperatura e pH. Oferecemos o suplemento Gibco GlutaMAX como uma alternativa mais estável à L-glutamina.
Quando a L-glutamina está em uma solução de estoque concentrado, ela precipita facilmente quando resfriada. Aquecer a solução por breves instantes num banho de água a 37 oC com um redemoinho suave dissolverá o precipitado. Não use o produto a menos que o precipitado esteja totalmente dissolvido.
24 meses a partir da data de fabricação
A Gibco L-glutamina é fornecida como uma solução de estoque de 200 mm pronta para uso que atua como um suplemento de cultura celular. A concentração ideal depende do tipo de célula e do meio utilizado para a cultura das células, mas geralmente cai na faixa de 2 a 6 mm.
A L-glutamina é um nutriente essencial em culturas celulares para a produção de energia, bem como para a síntese de proteínas e ácidos nucleicos. Entretanto, a L-glutamina em meio de cultura celular degrada espontaneamente, gerando amônia e Ácido Pirrolidonocarboxílico como subprodutos.
O suplemento glutaMAX é um dipeptídeo, L-alanina-L-glutamina, que é mais estável em soluções aquosas e não se degrada espontaneamente. Os meios e meios de comunicação Gibco GluutaMAX complementados com o suplemento GlutaMAX são adequados para culturas de células de mamíferos aderentes e suspensas, com pouca ou nenhuma adaptação necessária.
O mecanismo de utilização do dipeptídeo envolve a liberação gradual da peptídase durante a cultura para permitir a hidrólise gradual do dipeptídeo no meio (Figura 1). Isto pode ser comparado com a estratégia de alimentação gradual de uma cultura celular em que a L-glutamina é continuamente acrescentada na cultura, mas mantida em baixa concentração. O resultado é um metabolismo de energia eficiente e um alto rendimento de crescimento.
Figura 1. Aplicação controlada de L-glutamina de meios a células em cultura.
Quando as células são cultivadas em meios que contêm suplemento GlutaMAX, as células liberam gradualmente aminopeptidases que hidrolisam o dipeptídeo, liberando lentamente L-alanina e L-glutamina no meio de cultura. A L-glutamina e a L-alanina podem então ser utilizadas pelas células e para a produção de proteínas ou no ciclo TCA. Isto pode ser comparado com a estratégia de alimentação gradual de uma cultura celular em que a L-glutamina é continuamente acrescentada na cultura, mas mantida em baixa concentração. O resultado é um metabolismo de energia eficiente e um alto rendimento de crescimento sem excesso de amônia.
Figura 2. Células tronco mesenquimais humanas cultivadas com meios GlutaMAX e coradas com corante nuclear DAPI e anticorpo CD105 primário ligado a um anticorpo Invitrogen Alexa Fluor 488 secundário.
Figura 3. Células tronco mesenquimais humanas cultivadas com meios GlutaMAX sob condições adipogênicas diferenciadoras e coradas com marcador nuclear Hoechst 33342, Invitrogen LipidTOX™ Green Neutral Lipid Stain e Invitrogen MitoTracker Red.
Os resultados podem variar dependendo da linhagem celular usada. Em um exemplo específico da aplicação, as Figuras 4 e 5 mostram uma curva de crescimento de células AE-1 e uma produção de IgG 1 recombinante. O suplemento para cultura de células GlutaMAX demonstra melhor número de células e produtividade.
A Figura 6 compara as células MDBK cultivadas em D-MEM com 10% de FBS e L-glutamina ou suplemento glutaMAX. As células cultivadas em suplemento de GlutaMAX atingem a densidade de pico dois dias mais tarde e a viabilidade diminui menos rapidamente do que a observada em culturas com suplementação de L-glutamina. O pequeno aumento na fase de crescimento exponencial é atribuído ao tempo necessário para liberar a peptidase e dipeptídeo.
Isso permite um aumento gradual na disponibilidade de L-glutamina para as células. (Appl Biocem Biotecnol 30:29 (1991)).
Figura 4. Crescimento celular. As células do mieloma de camundongo AE-1 foram semeadas a 1 x 105 células/mL. As amostras foram coletadas diariamente após três dias e avaliadas em triplicado para densidade celular. A viabilidade celular foi determinada pela exclusão de azul de tripan. A densidade celular continuou a aumentar em amostras contendo o suplemento GlutaMAX além do ponto em que L-glutamina contendo amostras diminuiu na densidade celular.
Figura 5. Produção de IgG1. As amostras da Figura 4 também foram examinadas por ELISA para a produção de IgG1. Suplemento glutaMAX – contendo amostras que não foram realizadas com L-glutamina.
Figura 6. As células MDBK foram semeadas a aproximadamente 1 x 105 células/frasco em D-MEM com 10% de FBS e L-glutamina ou suplemento glutaMAX em frascos T de 25 cm 2.
L-glutamina é um aminoácido essencial exigido em formulações de meios de cultura celular. A L-glutamina participa da formação de nucleotídeos de purina e pirimidina, aminoácidos, glutationa, L-glutamato e outros aminoácidos, bem como na síntese proteica e produção de glicose. Diferentemente da maioria dos outros aminoácidos, a L-glutamina não é estável na solução. A taxa na qual a degradação prossegue é uma função de tempo, temperatura e pH. Oferecemos o suplemento Gibco GlutaMAX como uma alternativa mais estável à L-glutamina.
Quando a L-glutamina está em uma solução de estoque concentrado, ela precipita facilmente quando resfriada. Aquecer a solução por breves instantes num banho de água a 37 oC com um redemoinho suave dissolverá o precipitado. Não use o produto a menos que o precipitado esteja totalmente dissolvido.
24 meses a partir da data de fabricação
A Gibco L-glutamina é fornecida como uma solução de estoque de 200 mm pronta para uso que atua como um suplemento de cultura celular. A concentração ideal depende do tipo de célula e do meio utilizado para a cultura das células, mas geralmente cai na faixa de 2 a 6 mm.
A L-glutamina é um nutriente essencial em culturas celulares para a produção de energia, bem como para a síntese de proteínas e ácidos nucleicos. Entretanto, a L-glutamina em meio de cultura celular degrada espontaneamente, gerando amônia e Ácido Pirrolidonocarboxílico como subprodutos.
O suplemento glutaMAX é um dipeptídeo, L-alanina-L-glutamina, que é mais estável em soluções aquosas e não se degrada espontaneamente. Os meios e meios de comunicação Gibco GluutaMAX complementados com o suplemento GlutaMAX são adequados para culturas de células de mamíferos aderentes e suspensas, com pouca ou nenhuma adaptação necessária.
Gibco cell culture products are manufactured in facilities that are compliant with current good manufacturing practices (GMP) for medical devices and adheres to a robust quality management system.
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