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PowerTrack SYBR Green Master Mix
Master mix de expressão gênica flexível e fácil de usar para PCR em tempo real
Os recursos do PowerTrack SYBR Green Master Mixes incluem:
- O sistema de corante de rastreamento de duas cores indica onde ocorreu a pipetagem
- A ampla compatibilidade de Tm e concentração de primer, permite flexibilidade na configuração da reação qPCR com mínima otimização
- A especificidade superior e a capacidade de reprodução precisa em valores de Ct em uma ampla faixa dinâmica melhoram a qualidade dos dados
- Compatível com a transcrição reversa da SuperScript IV VILO master mix para resultados rápidos e reproduzíveis
- Formulado com UNG/dUTP para evitar a contaminação por arraste de produtos de PCR
- Ampla compatibilidade de instrumentos
"É um produto maravilhoso e tão fácil de usar. Todos estavam animados no laboratório e sentem que isso facilitará a vida."
Tariq M. Haqqi, M.Phil., Ph.D., Professor
Department of Anatomy & Neurobiology
Northeast Ohio Medical University
O corante de rastreamento ajuda a reduzir os erros de pipetagem
Veja como funciona
O PowerTrack SYBR Green Master Mix inclui um sistema de rastreamento de corante de duas cores para indicar onde ocorreu a pipetagem. Quando a amostra amarela é pipetada no poço que contém a Master mix azul, o poço fica verde. Foram realizados testes exaustivos para verificar se o corante de rastreamento não afeta a qualidade dos dados.
Formulado para especificidade e reprodutibilidade superiores
PowerTrack SYBR Green Master Mix é uma master mix 2X pré-formulada, otimizada e universal para PCR em tempo real. Contém Taq DNA polimerase mediada por anticorpos com um mecanismo de hot-start que fornece controle rígido sobre a ativação enzimática da Taq e ajuda a evitar atividade precoce indesejável da polimerase em baixas temperaturas que podem levar a uma amplificação não específica. Com base em mais de 20 anos de inovação e excelência em produtos em qPCR, o PowerTrack SYBR Green Master Mix foi projetado para um desempenho excepcional em suas aplicações de PCR em tempo real mais desafiadoras.
Em uma avaliação de 24 diferentes conjuntos de primer usados com PowerTrack SYBR Green Master Mix, uma única curva de dissociação (melt curve) foi obtida em 100% das reações. Por outro lado, foi observada amplificação não específica para alguns dos mesmos alvos com vários master mix de outros fornecedores, conforme mostrado por múltiplos picos nas curvas de dissociação (Figura 1). A validação da especificidade do primer nas reações do SYBR Green é essencial para a qualidade e a validade dos dados [1]. A alta especificidade habilitado pelo PowerTrack SYBR Green Master Mix permite que você gaste menos tempo otimizando e redesenhando primers para obter dados de alta qualidade.
Figura 1. Especificidade do alvo. As análises das curvas de dissociação para os alvos PGK1 (phosphoglyerate kinase 1) , ARL1 (ADP-ribosylation factor-like protein 1) e SNF8 (vacuolar-sorting protein) foram executadas no QuantStudio 5 Flex Real-Time PCR System com nove diferentes master mix. As condições de ciclagem recomendadas de cada fabricante de master mix foram usadas com cada mix em uma diluição seriada de 6 logs de um cDNA de referência universal humano. O cDNA da UHR foi corrido com os ensaios PGK1, ARL1 e SNF8. As reações de 10 µL foram executadas em quadruplicata no instrumentos de PCR em tempo real QuantStudio de 5 com o bloco de 384 poços. Vários concorrentes mostram a amplificação de produtos não específicos atribuídos ao segundo pico na análise da curva de dissociação.
1º trimestre do concorrente: Qiagen QuantiNova SYBR® Green PCR Kit; concorrente B: Bio-Rad SsoAdvanced(Universal SYBR® Green Supermix; concorrente S: Kit BioLine (Meridian Bioscience) SensiFAST® SYBR® Lo-ROX; concorrente Q2: Qiagen QuantiFast SYBR Green PCR Kit; concorrente QB: Quanta Biosciences PerfeCTa® SYBR® Green FastMix® Low ROX Reaction Mix; concorrente K: Kits KAPA SYBR FAST qPCR, low ROX; concorrente T: Takara TB Green® Premix Ex Taq II; concorrente P: ProMega GoTaq® qPCR Master Mix.
O PowerTrack SYBR Green Master Mix supera alvos tradicionalmente difíceis
As curvas de amplificação foram obtidas para o gene PGK1 em uuma diluição seriada de 5 log de cDNA do UHR. O PowerTrack SYBR Green Master Mix fornece resultados precisos em uma ampla faixa dinâmica de concentrações, conforme mostrado por curvas estreitas entre réplicas e eficiência de PCR elevada. (Figura 2).
Figura 2. As reações foram executadas em quadruplicata no sistema de PCR em tempo real QuantStudio 5 com o bloco de 384 poços de acordo com o protocolo. As reações de 10 µL foram corridas em quadruplicata usando 60ºC de anelamento como Tm do primer. PGK1 = alta expressão; ARL1, IGF2 e TCF25 = média expressão.
Excelente reprodutibilidade
A reprodutibilidade é outra medida importante da qualidade dos dados em PCR em tempo real, e a reprodutibilidade geralmente diminui em baixas concentrações de modelos, onde os impactos da variabilidade são exacerbados. No entanto, o PowerTrack SYBR Green Master Mix demonstrou excelente reprodutibilidade em uma ampla faixa dinâmica com uma variedade de alvos e kits de RT testados (Figura 3). A maior reprodutibilidade permite maior significância estatística ao analisar transcrições de baixa expressão e menores alterações nas fold changes.
Figura 3. Reprodutibilidade dos dados. Seis ensaios (PGK1, ARL1, SNF8, DF, GAPDH, e Corf1 19) foram corridos em quadruplicata com cDNA de UHR gerado a partir de quatro diferentes kits de transcrição reversa (RT) (SuperScript IV VILO, High Capacity RNA to cDNA, iScript cDNA synthesis, and Quantitect RT kits) e corridos com a diluição seriada de 6 vezes na concentração de primer de 400nM no QuantStudio 5 Flex Real-Time PCR System de acordo com o protocolo recomendado pelo fabricante de cada master mix.
Ampla compatibilidade de instrumentos
O PowerTrack SYBR Green Master Mix pode ser usado na rampa de aquecimento Standard ou Fast e é compatível com todos os instrumentos de PCR em tempo real da Applied Biosystems. Também é compatível Bio-Rad CFX96, CFX384, e iQ5; Roche LightCycler 480; e Agilent Mx3005P systems. Para obter os melhores resultados, as concentrações de primers devem estar na faixa de 300 a 800 nM.
Corante ROX para melhor precisão dos dados
O ROX é um fluoróforo de referência passiva usado na RT-qPCR incluído em nossas master mix. É eficaz na normalização da fluorescência em todas as amostras. Remove variações de fluorescência, dos dados, como as causadas por bolhas. As master mix da Applied Biosystems contêm um fluoróforo ROX patenteado, formulado especificamente para uma vasta gama de instrumentos de PCR em tempo real e compatível com uma vasta gama de fontes de luz de instrumentos e conjuntos de filtros.
UNG para controle de contaminação por arraste
A contaminação em laboratórios que executam rotineiramente a PCR é uma grande preocupação para muitos pesquisadores e é a fonte da maioria dos falsos positivos. A inclusão DE UNG e dUTP no PowerTrack SYBR Green Master Mix permite que qualquer produto PCR anteriormente amplificado seja degradado e ajuda a evitar a contaminação de reações qPCR subsequentes. A utilização de uma enzima UNG termolábil permite um controle eficaz da contaminação.
Referência
1. Bustin SA, Benes V, Garson JA, Hellemans J, Huggett J, Kubista M, Mueller R, Nolan T, Pfaffl MW, Shipley GL, Vandesompele J, Wittwer CT. The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. Clin Chem 2009 55(4):611-22.
Para uso em pesquisas somente. Não para fins de diagnóstico.