化药 

基因毒性杂质

2020 年版《中国药典》四部通则增修订内容（第四批）中新增《遗传毒性杂质控制指导原则审核稿》，对药物遗传毒性杂质的危害评估、分类、定性和限值制定进行了指导。

近年来，一系列基因毒性杂质风波事件加之国内外各大法规的严格要求，将此类杂质的风险评估和分析检测提到了紧迫的位置。

如何应对新版药典及分析挑战？


药物基因毒性杂质解决方案

以缬沙坦及雷尼替丁事件的罪魁祸首--N- 亚硝基二甲胺（NDMA）为例，有以下方案推荐。

一、Q Exactive™ 高分辨质谱方法

本方案充分利用Q Exactive 静电场轨道阱高分辨质谱保持高 分辨的情况下不损失定量灵敏度的特点，运用PRM( 平行反 应监测) 及SIM（选择离子监测）同时扫描来实现基因毒性 杂质的定量；再根据Q Exactive 系列质谱能够实现快速正负 切换的特点，方法采用正负切换进行扫描，从而达到一针同 时分析6 个基因毒性杂质。定量时分辨率均在35000 以上， 从而使方法的专属性极强，能够 有效排除基质或背景的干扰。 色谱柱：Hypersil Gold Phenyl 4.6 mm×100 mm，3.0 μm （P/N：25903-104630）

方法灵敏度如下所示：

 

混标样品特征图谱如下图所示：

从上图中可以看出建立的方法灵敏、快速和稳定，色谱峰形良好，同时具备优异的重现性，可以满足药品中日常分析N- 亚硝基类基因毒性杂质的检测要求。

二、TSQ Fortis LC-MS 方法

三重四极杆质谱TSQ Fortis 针对基因毒性物质10 个N- 亚硝基化合物建立稳定 灵敏的分析方法。该方法在电喷雾离子化(ESI) 条件下即可进行有效检测分析， 试验结果优异，该方法稳定、快速、满足日常微量基因毒性物质N- 亚硝胺类化 合物的分析要求。

色谱柱：Hypersil Gold AQ 2.1 mm ×100 mm，1.9 μm（P/N：25002-102130）

方法灵敏度如下所示：

混标样品特征图谱如下图所示：

三、ISQ 7000 GC-MS+TriPlus 500 方法

采用ISQ 7000 气质联用仪，结合新一代TriPlus 500 顶空自 动进样器，进行测试。连续6 针进样0.050 μg/mL 标准样品 的结果，NDMA 和NDEA 的RSD 分别为2.38% 和2.14%； 远优于一般方法学要求的5% 的要求。

色谱柱：TG-WaxMS 30 m*0.2 5 mm*0.25 μm （P/N：26088-1420）

四、TSQ 9000 GC-MS/MS 方法

该方法具有液体进样法的高灵敏度，而且GCMSMS 的SRM 模式能有效排除复杂基质 的干扰，特别适用于原料药、成品药等复杂基质。

灵敏度测试溶液（5ng/mL）的色谱质谱图

灵敏度测试溶液（5ng/mL）的色谱质谱图

LOQ 为: NDMA 5 ppb NDMA 1.6 ppb（药品中）
线性：0.2-100 ppb NDMA > 99.9% NDEA > 99.9%
重复性：5 ppb 6 针 NDMA 2.74% NDEA 2.83%
回收率（5 ppb 加标）：80.3% - 110%

离子色谱

离子色谱法自2010 年进入中国药典附录以来，在离子型药物和杂质的检测中发挥了越来越大的作用。仿制药一致性评价，离 子色谱法成为制剂中阴、阳离子组成及含量测定最便捷的方法；药物基因毒性杂质分析，离子色谱法在不易被LC 和GC 测定 的难挥发离子型物质分析中展现了突出的优势。

随着《中国药典》2020 年版编制工作的即将收官，近期大量新的通则和药品标准的增修订内容在国家药典委员会网站上公示， 其中也不乏离子色谱法的使用。

2020 版药典中的离子色谱新方法

实例一：甲硝唑注射液中亚硝酸根的测定

亚硝胺类化合物的来源与原料药的生产工艺密切相关。仲胺类化合物与亚硝酸盐在酸性环境中可生成亚硝胺类化合物（如图）。 因此，亚硝酸根的存在成为药物亚硝胺污染的潜在风险之一。 药典委员会公布的涉及亚硝酸根检测的品种有：甲硝唑氯化钠注射液、甲硝唑注射液、甲硝唑葡萄糖氯化钠注射液等三种。含 氯注射液中氯离子的含量高达9000 μg/mL，氯离子与亚硝酸根在色谱柱上的保留相近，分离难度较大。 我们推荐采用高容量AS18 IC 色谱柱和Aquion RFIC 的方案。

实例二：乳糖玉米淀粉共处理物- 有关物质测定

乳糖玉米淀粉共处理物是一种新型辅料，系由乳糖与玉米淀粉在水中共混，经喷雾干燥制得的共处理物。有关物质为除乳糖外的低聚糖，如蔗糖、葡萄糖、半乳糖等。CarboPac PA20 色谱柱对于单糖、二糖、低聚糖等糖类化合物有良好的分离度。使用金电极和安培检测器进行检测，可得到高灵敏度和良好的重现性，保证实验结果的准确可靠。

实例三：羧甲淀粉钠中氯乙酸的测定

羧甲淀粉钠是一种常用的药用辅料，为淀粉在碱性条件下与氯乙酸作用生成的淀粉羧甲基醚的钠盐。氯乙酸作为卤代乙酸的一种，具有潜在的致癌性，在食品、环境、药品等行业中被广泛关注。离子色谱法可分析痕量的氯乙酸，IonPac AS11-HC 色谱柱对于样品中的氯乙酸和氯离子有良好的分离。

辅料及包材

《中国药典》2020 版四部总则针对药用辅料及药包材有以下要求：完善药用辅料和药包材标准体系，加强药用辅料、药包材通用性要求和指导原则的制定；建议以保障制剂终产品质量为目标的药用辅料、药包材质量控制技术要求和质量控制体系，配合做好药用辅料、药包材与药品关联审评审批制度改革的技术支撑和保障工作。增加常用药用辅料和关键药包材标准的收载，推进成熟的新型药用辅料和药包材标准的收载，促进药用辅料和药包材品种的更新升级。进一步加强对药用辅料和药包材安全性的控制，并与国际相关要求保持一致。

赛默飞色谱质谱及痕量元素分析产品，以其完整的产品线和多样的检测手段，可为药用辅料及药包材的分析检测创造出全新的可能性。

辅料分析

药用辅料类别及赛默飞分析检测解决方案

通用型药用辅料分析检测解决方案——液相色谱+ 电雾式检测器联用

因为结构特殊性，大量的药用辅料无法使用常规紫外进行检测，而示差折光（RI）及蒸发光检测（ELSD）等通用型的检测器 受限于灵敏度及线性范围等问题，给药用辅料带来大量的前处理操作及含量分析问题。 赛默飞电雾式检测器（CAD）使用独特的通用型检测技术，为辅料研究提供高灵敏度、宽线性范围、一致性响应及兼容梯度分 析的解决方案。

举例：蛋黄卵磷脂的测定

色谱柱：Hypersil Silica 3 μm, 3.0 × 150 mm（P/N：25103-153030）
与2015 版药典ELSD 检测方法比较优势：（1）进样量更小，灵敏度更高；（2）方法重现性更好

可提取物& 可浸出物解决方案

赛默飞针对药包材可提取物和可浸出物来源种类广泛及不确定的特点提供了全方位全流程的分析检测解决方案。通过分析平台与多样化的样品前处理的优化组合全面覆盖了对应多样复杂的药包材的分析检测方法，综合起来可以归结为“高效”、“可靠”、“易用”。
● 药品包装材料       ● 制药一次性使用系统       ● 特异添加物

色谱柱选择

基因毒性杂质

基因毒性杂质

2020 年版《中国药典》四部通则增修订内容（第四批）中新增《遗传毒性杂质控制指导原则审核稿》，对药物遗传毒性杂质的危害评估、分类、定性和限值制定进行了指导。

近年来，一系列基因毒性杂质风波事件加之国内外各大法规的严格要求，将此类杂质的风险评估和分析检测提到了紧迫的位置。

如何应对新版药典及分析挑战？


药物基因毒性杂质解决方案

以缬沙坦及雷尼替丁事件的罪魁祸首--N- 亚硝基二甲胺（NDMA）为例，有以下方案推荐。

一、Q Exactive™ 高分辨质谱方法

本方案充分利用Q Exactive 静电场轨道阱高分辨质谱保持高 分辨的情况下不损失定量灵敏度的特点，运用PRM( 平行反 应监测) 及SIM（选择离子监测）同时扫描来实现基因毒性 杂质的定量；再根据Q Exactive 系列质谱能够实现快速正负 切换的特点，方法采用正负切换进行扫描，从而达到一针同 时分析6 个基因毒性杂质。定量时分辨率均在35000 以上， 从而使方法的专属性极强，能够 有效排除基质或背景的干扰。 色谱柱：Hypersil Gold Phenyl 4.6 mm×100 mm，3.0 μm （P/N：25903-104630）

方法灵敏度如下所示：

 

混标样品特征图谱如下图所示：

从上图中可以看出建立的方法灵敏、快速和稳定，色谱峰形良好，同时具备优异的重现性，可以满足药品中日常分析N- 亚硝基类基因毒性杂质的检测要求。

二、TSQ Fortis LC-MS 方法

三重四极杆质谱TSQ Fortis 针对基因毒性物质10 个N- 亚硝基化合物建立稳定 灵敏的分析方法。该方法在电喷雾离子化(ESI) 条件下即可进行有效检测分析， 试验结果优异，该方法稳定、快速、满足日常微量基因毒性物质N- 亚硝胺类化 合物的分析要求。

色谱柱：Hypersil Gold AQ 2.1 mm ×100 mm，1.9 μm（P/N：25002-102130）

方法灵敏度如下所示：

混标样品特征图谱如下图所示：

三、ISQ 7000 GC-MS+TriPlus 500 方法

采用ISQ 7000 气质联用仪，结合新一代TriPlus 500 顶空自 动进样器，进行测试。连续6 针进样0.050 μg/mL 标准样品 的结果，NDMA 和NDEA 的RSD 分别为2.38% 和2.14%； 远优于一般方法学要求的5% 的要求。

色谱柱：TG-WaxMS 30 m*0.2 5 mm*0.25 μm （P/N：26088-1420）

四、TSQ 9000 GC-MS/MS 方法

该方法具有液体进样法的高灵敏度，而且GCMSMS 的SRM 模式能有效排除复杂基质 的干扰，特别适用于原料药、成品药等复杂基质。

灵敏度测试溶液（5ng/mL）的色谱质谱图

灵敏度测试溶液（5ng/mL）的色谱质谱图

LOQ 为: NDMA 5 ppb NDMA 1.6 ppb（药品中）
线性：0.2-100 ppb NDMA > 99.9% NDEA > 99.9%
重复性：5 ppb 6 针 NDMA 2.74% NDEA 2.83%
回收率（5 ppb 加标）：80.3% - 110%

离子色谱

离子色谱

离子色谱法自2010 年进入中国药典附录以来，在离子型药物和杂质的检测中发挥了越来越大的作用。仿制药一致性评价，离 子色谱法成为制剂中阴、阳离子组成及含量测定最便捷的方法；药物基因毒性杂质分析，离子色谱法在不易被LC 和GC 测定 的难挥发离子型物质分析中展现了突出的优势。

随着《中国药典》2020 年版编制工作的即将收官，近期大量新的通则和药品标准的增修订内容在国家药典委员会网站上公示， 其中也不乏离子色谱法的使用。

2020 版药典中的离子色谱新方法

实例一：甲硝唑注射液中亚硝酸根的测定

亚硝胺类化合物的来源与原料药的生产工艺密切相关。仲胺类化合物与亚硝酸盐在酸性环境中可生成亚硝胺类化合物（如图）。 因此，亚硝酸根的存在成为药物亚硝胺污染的潜在风险之一。 药典委员会公布的涉及亚硝酸根检测的品种有：甲硝唑氯化钠注射液、甲硝唑注射液、甲硝唑葡萄糖氯化钠注射液等三种。含 氯注射液中氯离子的含量高达9000 μg/mL，氯离子与亚硝酸根在色谱柱上的保留相近，分离难度较大。 我们推荐采用高容量AS18 IC 色谱柱和Aquion RFIC 的方案。

实例二：乳糖玉米淀粉共处理物- 有关物质测定

乳糖玉米淀粉共处理物是一种新型辅料，系由乳糖与玉米淀粉在水中共混，经喷雾干燥制得的共处理物。有关物质为除乳糖外的低聚糖，如蔗糖、葡萄糖、半乳糖等。CarboPac PA20 色谱柱对于单糖、二糖、低聚糖等糖类化合物有良好的分离度。使用金电极和安培检测器进行检测，可得到高灵敏度和良好的重现性，保证实验结果的准确可靠。

实例三：羧甲淀粉钠中氯乙酸的测定

羧甲淀粉钠是一种常用的药用辅料，为淀粉在碱性条件下与氯乙酸作用生成的淀粉羧甲基醚的钠盐。氯乙酸作为卤代乙酸的一种，具有潜在的致癌性，在食品、环境、药品等行业中被广泛关注。离子色谱法可分析痕量的氯乙酸，IonPac AS11-HC 色谱柱对于样品中的氯乙酸和氯离子有良好的分离。

辅料及包材

辅料及包材

《中国药典》2020 版四部总则针对药用辅料及药包材有以下要求：完善药用辅料和药包材标准体系，加强药用辅料、药包材通用性要求和指导原则的制定；建议以保障制剂终产品质量为目标的药用辅料、药包材质量控制技术要求和质量控制体系，配合做好药用辅料、药包材与药品关联审评审批制度改革的技术支撑和保障工作。增加常用药用辅料和关键药包材标准的收载，推进成熟的新型药用辅料和药包材标准的收载，促进药用辅料和药包材品种的更新升级。进一步加强对药用辅料和药包材安全性的控制，并与国际相关要求保持一致。

赛默飞色谱质谱及痕量元素分析产品，以其完整的产品线和多样的检测手段，可为药用辅料及药包材的分析检测创造出全新的可能性。

辅料分析

药用辅料类别及赛默飞分析检测解决方案

通用型药用辅料分析检测解决方案——液相色谱+ 电雾式检测器联用

因为结构特殊性，大量的药用辅料无法使用常规紫外进行检测，而示差折光（RI）及蒸发光检测（ELSD）等通用型的检测器 受限于灵敏度及线性范围等问题，给药用辅料带来大量的前处理操作及含量分析问题。 赛默飞电雾式检测器（CAD）使用独特的通用型检测技术，为辅料研究提供高灵敏度、宽线性范围、一致性响应及兼容梯度分 析的解决方案。

举例：蛋黄卵磷脂的测定

色谱柱：Hypersil Silica 3 μm, 3.0 × 150 mm（P/N：25103-153030）
与2015 版药典ELSD 检测方法比较优势：（1）进样量更小，灵敏度更高；（2）方法重现性更好

可提取物& 可浸出物解决方案

赛默飞针对药包材可提取物和可浸出物来源种类广泛及不确定的特点提供了全方位全流程的分析检测解决方案。通过分析平台与多样化的样品前处理的优化组合全面覆盖了对应多样复杂的药包材的分析检测方法，综合起来可以归结为“高效”、“可靠”、“易用”。
● 药品包装材料       ● 制药一次性使用系统       ● 特异添加物

色谱柱选择