Artistic rendering of Phusion Plus Polymerase synthesizing DNA

높은 성공률, 간편해진 설정, 신뢰할 수 있는 PCR 효소

Thermo Scientific Phusion Plus DNA Polymerase는 최근에 새로 나왔으며 높은 정확도를 가진 중합효소 제품군으로 수천 건의 연구 문헌에서 인용되었습니다. Phusion Plus DNA 중합효소는 Hot-Start 기능과 매우 높은 염기서열 정확성, 감도 및 특이성으로 PCR을 할 수 있습니다. 또한 범용 어닐링 온도를 사용하여 프라이머 어닐링 테스트 단계를 단순화 하거나, 온도 계산 단계를 생략할 수 있습니다.

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주요 특징

  • 높은 염기서열 정확성—> Taq 보다 100배 높은 Fidelity를 갖고 있습니다.
  • 간편한 실험 설정—자사만의 완충액 조성으로 프라이머 어닐링 온도를 더 이상 계산할 필요가 없습니다.
  • 향상된 특이성 및 온도 안정성—변형 Hot-start 기능은 PCR 특이성 및 실온 안정성을 향상시킵니다.
  • 강력한 PCR—GC-rich 염기서열 및 inhibitor에도  DNA를 효율적으로 증폭이 가능하며, 15–30sec/kb로 빠른 속도를 자랑합니다.
  • 피펫팅 단계 감소—직접적인 겔 로딩 염료 유무와 상관없이 마스터 믹스 형태 사용 가능


PCR의 편의성과 성공을 위해 향상되었습니다.

동영상: 높은 성공률, 더 간편한 성공, 신뢰할 수 있는 효소를 이용한 PCR

Phusion Plus DNA 중합효소의 이전 모델에 비해 개선된 5가지 장점에 대한 동영상 시청하기

Phusion Plus DNA 중합효소를 위한 데이터 지원

PCR 염기서열 정확도

매우 높은 Fidelity와 교정 효소인 Phusion Plus DNA 중합효소는 앰플리콘 생성 시 오류가 매우 적기 때문에 PCR 염기서열 정확도가 보장됩니다.

Bar graph of fidelity values of high-fidelity PCR enzymes

그림 1. Taq DNA 중합효소에 비해 Fidelity가 매우 높은 중합효소 오류율은 분자 바코드를 사용하는 차세대 염기서열 분석에 의해 결정되었으며 그런 다음 Taq DNA 중합효소의 오류율로 정규화되었습니다.

기술 노트: Phusion Plus DNA 중합효소의 Fidelity 측정

범용 프라이머 어닐링의 편의성

Phusion Plus DNA 중합효소는 고유한 완충액 조성으로 정확한 어닐링 온도를 위한 프라이머 온도(Tm ) 계산이 더 이상 필요하지 않습니다. 계산된 프라이머 Tm에 상관없이 60°C의 범용 어닐링 온도를 사용하여 모든 타깃을 증폭할 수 있습니다. 이 효소는 또한 원래의 Phusion 프로토콜에 따른 계산된 어닐링 온도로도 작동합니다.

PCR gel images of a universal annealing temperature vs. calculated annealing temperatures

그림 2. 두 가지 어닐링 조건에서 PCR 실험 다양한 계산 어닐링 온도(각 레인 위에 표시)를 가진 12개의 타깃은 60°C(왼쪽)의 범용 어닐링 온도 또는 Tm 계산기(오른쪽)로 계산된 어닐링 온도에서 50ng의 인간 유전체 DNA(gDNA)로부터 증폭되었습니다. 분자량 마커는 Thermo Scientific ZipRuler Express Ladder DNA 2입니다.

Phusion Plus DNA 중합효소의 범용 어닐링 기능은 또한 범용 순환 프로토콜을 가능하게 하여 PCR을 여러 번 실행할 필요가 없어 시간을 절약할 수 있도록 합니다. 하나의 어닐링 온도(60°C) 및 가장 긴 앰플리콘을 기반으로 한 하나의 확장 시간을 다른 길이의 타깃, 즉 동일한 장비에서 PCR 실험이 함께 가능하며, 다른 타깃에 대한 PCR 수율과 특이성을 저하시키지 않고 사용할 수 있습니다.

PCR comparing co-cycling vs. individual cycling of different targets

그림 3. Phusion Plus DNA 중합효소를 사용하여 다른 PCR 타깃을 동시에 PCR 할 수 있습니다. 서로 다른 길이의 5개 타깃이 가장 긴 앰플리콘의 확장 시간(7.5kb에 대해 3분 45초)(왼쪽)을 가진 모든 표적(최대 7.5kb)용 범용 순환 프로토콜을 사용하여, 또는 각 타깃에 대해 계산된 확장 시간이 서로 다른(0.3kb의 경우 9초, 0.7kb의 경우 21초, 2kb의 경우 60초, 3.9kb의 경우 2분, 7.5kb의 경우 3분 45초)(오른쪽) 개별 순환 프로토콜에 따라 인간 gDNA로부터 증폭되었습니다. 분자량 마커는 ZipRuler Express DNA Ladder 2입니다.

PCR 앰플리콘의 수율 및 특이성

Phusion Plus DNA 중합효소는 Affibody 분자 매개 Hot-Start 변형이 반응 설정 중 효소 활성 및 프라이머 분해를 방지하기 때문에 PCR 특이성 및 수율을 향상시킵니다.

PCR gel images of 0.3 to 7.5 kb amplicons using different DNA polymerases
그림 4. Phusion Plus DNA 중합효소를 사용한 높은 수율 및 특이성 0.3–7.5kb DNA 타깃은 제조업체의 권장 사항에 따라 다양한 DNA 중합효소를 사용하여 100ng 의 인간 gDNA로부터 증폭되었습니다. 분자량 마커는 Thermo Scientific GeneRuler 1kb Plus DNA Ladder입니다.
구성된 반응의 안정성

Phusion Plus DNA 중합효소는 엄격한 Hot-Start 변형으로 인해 최대 24시간 동안 실온에서 조립된 반응의 안정성을 제공하여 로봇 또는 액체 처리 시스템으로 고처리량의 PCR을 가능하게 합니다.

그림 5. Phusion Plus DNA 중합효소의 안정성 0.5kb 타깃은 제조업체의 권장 사항에 따라 다양한 고온 개시 DNA 중합효소를 사용하여 50ng의 인간 gDNA로부터 증폭되었습니다. 구성된 PCR 반응은 순환(24시간) 전에 즉시 열순환기에 로딩하거나(0시간) 24시간 동안 실온으로 설정되었습니다. 분자량 마커는 GeneRuler 1kb Plus DNA Ladder입니다.
타깃 검출 시 감도

Phusion Plus DNA 중합효소는 0.08ng만큼 적은 양의 인간 유전체 gDNA 타깃을 검출할 수 있습니다.

Gel images showing PCR sensitivity using different DNA polymerases
그림 6. Phusion Plus DNA 중합효소의 높은 감도 0.5kb 타깃은 제조업체의 권장 사항에 따라 다양한 DNA 중합효소를 사용하여 서로 다른 양의 인간 gDNA로부터 증폭되었습니다. 분자량 마커는 GeneRuler 1kb Plus DNA Ladder입니다.
PCR inhibitor에 대한 내성

융합 단백질 기술과 완충액 재조합 기술을 통해 Phusion Plus DNA 중합효소는 PCR inhibitor인 식물(예: 자일란), 토양(예: 휴민산) 및 혈액(예: 헤민)에 더 잘 견딜 수 있습니다.

Gel images showing enzyme inhibitor tolerance using different DNA polymerases
그림 7. Phusion Plus DNA 중합효소의 높은 inhibitor 내성 2kb 타깃은 제조업체의 권장 사항에 따라 다양한 DNA 중합효소를 사용하여 50ng의 인간 gDNA로부터 증폭되었습니다. 최종 농도에 포함된 반응 혼합물: 1—inhibitor 없음, 2—휴민산(0.5µg/mL), 3—헤민(2.5µM) 또는 4—자일란(250µg/mL) 분자량 마커는 GeneRuler 1kb Plus DNA Ladder입니다.
GC-rich 염기서열의 증폭

Phusion Plus DNA 중합효소는 >65% GC 함량을 가진 염기서열의 더 효율적인 증폭을 위해 패키지에 Phusion GC 증폭자를 포함합니다.

PCR gel images of five GC-rich targets

그림 8. Phusion Plus DNA 중합효소의 효율적인 GC-rich 증폭 GC-rich PCR을 위해 제조업체 권장 사항에 따라 다양한 DNA 중합효소를 사용하여 높은 GC 함량으로 5개 타깃(0.78kb, 0.74kb, 0.72kb, 0.66kb 및 0.55kb)이 50ng의 인간 gDNA로부터 증폭되었습니다. 분자량 마커는 ZipRuler Express Ladder DNA 2입니다.

앰플리콘 길이 범위

Phusion Plus DNA NA 중합효소의 높은 진행도로 긴 DNA 단편을 인간 gDNA에서 최대 10kb 그리고 Lambda DNA에서 20kb까지 증폭할 수 있습니다. 15–30sec/kb의 빠른 확장 속도로 인해 PCR 실험 시간이 상당히 짧습니다.

PCR gel images of 9 kb and 18 kb targets

그림 9. Phusion Plus DNA 중합효소의 증폭 범위 Phusion Plus DNA 중합효소를 사용하여 9.1kb의 인간 gDNA 타깃(왼쪽)과 18kb의 Lambda DNA 타깃(오른쪽)이 두 개의 템플릿 양으로부터 성공적으로 증폭되었습니다. 분자량 마커는 GeneRuler 1kb Plus DNA Ladder입니다.

Phusion Plus, Phusion 및 Phusion Hot-start II DNA 중합효소의 비교

다음 표는 Phusion Plus DNA 중합효소와 그 이전 모델의 기술적 특징을 비교합니다. 향상된 기능은 파란색으로 음영 처리되었습니다.

 Phusion Plus DNA PolymerasePhusion High-Fidelity DNA PolymerasePhusion Hot-Start II DNA Polymerase

염기서열 정확도를 위한 Fidelity

(vs. Taq 효소)

>100x52x52x
Tm 계산기 사용필요 없음필수필수
특이성을 위한 Hot-Start 변형예아니오예
PCR 감도+++++++

증폭 길이

(인간 gDNA/Lambda DNA)

최대 10kb/20kb최대 7.5kb/20kb최대 7.5kb/20kb

GC-rich 증폭

+++++++
Inhibitor 내성+++++++
독립형 효소
마스터 믹스

*에는 PCR 제품의 직접적인 겔 로딩을 위한 녹색 추적 염료 및 밀도 시약이 포함되어 있습니다.
Phusion Plus 및 Phusion DNA 중합효소의 성능 비교

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Phusion Plus DNA 중합효소 주문 정보

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리소스

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