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TMT-기반 정량
아이소배릭(isobaric) 태그를 이용한 고처리량 단백질체학
단백질체학 기술은 고감도, 정량적, 고처리량 접근법으로 발전하고 있으며 세포, 조직 또는 유기체 내에서 전체 단백질 역학을 분석하는데 사용되고 있습니다. 지난 10년 동안 전체 단백질체학 워크플로우(workflow) 전반에 걸쳐 중요한 발전이 이루어졌습니다. 특히 주목할 만한 것은 새로운 TMT10plex 아이소배릭(isobaric) 질량 태그 라벨링이 분석 질량분석법의 최첨단 기술과 결합하여 보다 정확한 고처리량 정량 단백질체학이 가능해졌다는 점입니다.
주요 TMT 복합 분석(multiplexing) 제품
TMT-기반 정량에 대한 개요
Click to enlarge — TMT-based quantitation overview workflow
아이소배릭(isobaric) 화학 태그는 생물학적 시료에서 단백질 정량을 위해 빠르고 편향되지 않은 높은 감도의 분석법입니다. 이 태그는 세포, 조직 및 생물학적 유체를 포함한 다양한 시료에 사용되며 질량분석법(MS)에 의한 여러 조건을 동시에 상대 정량할 수 있습니다.
TMT 시약은 최대 10개의 각기 다른 펩타이드 시료를 라벨링하는데 사용할 수 있습니다. 각각의 시료에 대해 MS/MS 스펙트럼의 저질량(low mass) 영역에 있는 고유의 리포터 질량(즉, TMT10126-131Da)을 사용하여 펩타이드 절편화 중 상대적인 단백질 발현 수준을 측정할 수 있습니다. 단백질 정량은 리포터 이온의 강도를 비교하여 수행됩니다.
관련 TMT 제품
- 탠덤 질량 태그(TMT) 시스템을 사용하면 한 번의 실행으로 최대 10개의 시료를 비교할 수 있습니다.
- TMT10plex 아이소배릭(Isobaric) 질량 태그 라벨링 키트의 도입으로 이러한 정량적 실험에 대한 잠재적인 복합 분석 가능성이 크게 증가했습니다.
참고문헌
TMT 워크플로우(workflow)
TMT-기반 정량을 위한 시료 전처리 워크플로우
TMT 태그는 여러 실험 조건에서 복잡한 단백질 시료의 상대적 변화를 확인하고 정량하는데 사용됩니다.
확대하려면 클릭하십시오.
세포 또는 조직으로부터 분리된 단백질 추출물이 밤새 환원, 알킬화 및 분해됩니다. 시료가 TMT 시약으로 라벨링된 다음 샘플 분리(fractionation) 및 세척 전에 혼합됩니다. 표지된 시료는 펩타이드를 식별하고 리포터 이온의 상대적인 양을 정량하기 위해 고분해능 Orbitrap LC-MS/MS로 분석됩니다.
전체 세포 단백질 추출물, 단백질 분해 및 펩타이드 라벨링을 포함하는 원형(intact) 단백질 및 펩타이드에 대한 단계별 TMT 라벨링 절차.
향상된 단백질체 깊이, 정량 및 처리량을 위한 시료 전처리 시약
이 웨비나는 아이소배릭(isobaric) 태그를 위한 최적화된 단백질체학 시료 전처리 워크플로우에 중점을 두고 분리(fractionation), 시료 처리량, 정확한 정량을 위한 새로운 도구를 알아봅니다.
84페이지 분량의 이 핸드북은 MS 분석에서 시료 전처리에 도움이 되는 힌트와 문제해결 팁을 제공합니다.
LC/MS 분석에 앞서, 존재비가 높은(abundant) 단백질의 소실 및 시료 전처리를 위한 단백질체학 시료 전처리의 단계별 절차가 요약되어 있습니다.
추가 리소스
TMT-기반 정량을 위한 질량분석
초고분해능 정밀 질량(UHRAM) 질량분석법(MS)과 결합된 TMT 기반 라벨링은 보다 큰 복합 분석 용량을 가능하게 하여 많은 수의 시료에서 정량 단백질체학 분석의 깊이를 증가시킵니다. Thermo Fisher Scientific은 TMT10plex 아이소배릭(Isobaric) 질량 태그 라벨링 키트의 도입으로 이러한 실험의 복합 분석 가능성을 크게 높여 한 번의 실행으로 최대 10개의 시료를 비교할 수 있게 되었습니다. TMT 기반 정량의 주요 이점은 단일 분석으로 모든 출처의 여러 시료를 정량할 수 있다는 것입니다.
향상된 정량 정확도 및 정밀도에 대한 내용을 보려면 최적화된 TMT 실험의 실행을 위한 구체적인 워크플로우를 다운로드하십시오.
새로운 TMT SPS MS3 워크플로우(workflow)
동적 범위가 큰 복합 혼합물의 가장 정확한 TMT 정량은 Orbitrap Fusion 및 Orbitrap Fusion Lumos 기기를 포함한 Thermo Scientific Tribrid 질량분석기 제품군에서 Synchronous Precursor Selection(SPS) MS3 분석법을 사용하여 수행할 수 있습니다. 4명의 주요 연구자가 Synchronous Precursor Selection(SPS) MS3에 의한 텐덤 질량 태그(TMT) 복합 분석의 사용 및 연구에서 획기적인 발견을 촉진하는 방법에 대해 설명합니다.
아이소배릭(isobaric) 태그를 이용한 고처리량 정량 단백질체학이라는 제목의 이 백서(whitepaper)는 생물학자들이 단백질체를 더 깊이 탐색하고, 단백질 위치 변화를 측정하며, 저 존재비 단백질의 미세한 변화를 정량할 수 있도록 하는 단백질체학 분석 분야의 혁명을 일으킨 중요한 발전에 대해 설명합니다.
선구적인 Tribrid 질량분석기 제품군에 새로 추가된 Orbitrap Fusion Lumos Tribrid MS는 정량 및 단백질 특성 분석의 한계를 뛰어 넘어 시스템 생물학 연구자의 연구 범위를 확장합니다.
추가 리소스
TMT 기반 정량을 위한 데이터 분석 워크플로우
Thermo Scientific Proteome Discoverer 2.1 소프트웨어는 광범위한 단백질체학 워크플로우를 단순화하며 TMT 기반 데이터의 정량 분석에 권장됩니다. 이 소프트웨어는 대규모 데이터 세트를 처리할 수 있는 향상된 데이터 처리 기능을 갖추고 있으며 연구 관리 도구와 함께(예: TMT 10-plex 데이터 세트 사용) 사용할 수 있습니다. 버전 2.1은 다음과 같은 새롭고 향상된 TMT 정량 워크플로우를 특징으로 합니다.
- 리포터 이온 동위원소 분포를 추가하기 위한 새로운 사용자 인터페이스
- TMT10plex 시약에 대한 리포터 이온 동위원소 불순물을 설명할 수 있는 능력
- S/N 값을 기반으로 한 TMT 정량 실행
- S/N 값의 합계를 기반으로 한 단백질 및 펩타이드 정량
- 펩타이드 및 단백질 존재량 값의 정규화를 위한 새로운 방법
Proteome Discoverer 소프트웨어 데모 버전이 무료로 제공됩니다. Proteome Discoverer 소프트웨어 버전 2.1의 무료 60일 시험판을 다운로드하려면 Thermo Scientific Proteomics Software Portal을 방문하십시오.
Proteome Discoverer 2.1의 재현성 및 단백질 포괄 범위 향상
이 프리젠테이션에서는 MS2 및 MS3 기반 정량 분석법을 사용하여 재현 가능한 단백질 정량 결과를 얻는 것과 관련된 TMT 기반 리포터 이온 정량 단계를 검토합니다.
추가 리소스
TMT-기반 정량을 위한 시료 전처리 워크플로우
TMT 태그는 여러 실험 조건에서 복잡한 단백질 시료의 상대적 변화를 확인하고 정량하는데 사용됩니다.
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세포 또는 조직으로부터 분리된 단백질 추출물이 밤새 환원, 알킬화 및 분해됩니다. 시료가 TMT 시약으로 라벨링된 다음 샘플 분리(fractionation) 및 세척 전에 혼합됩니다. 표지된 시료는 펩타이드를 식별하고 리포터 이온의 상대적인 양을 정량하기 위해 고분해능 Orbitrap LC-MS/MS로 분석됩니다.
전체 세포 단백질 추출물, 단백질 분해 및 펩타이드 라벨링을 포함하는 원형(intact) 단백질 및 펩타이드에 대한 단계별 TMT 라벨링 절차.
향상된 단백질체 깊이, 정량 및 처리량을 위한 시료 전처리 시약
이 웨비나는 아이소배릭(isobaric) 태그를 위한 최적화된 단백질체학 시료 전처리 워크플로우에 중점을 두고 분리(fractionation), 시료 처리량, 정확한 정량을 위한 새로운 도구를 알아봅니다.
84페이지 분량의 이 핸드북은 MS 분석에서 시료 전처리에 도움이 되는 힌트와 문제해결 팁을 제공합니다.
LC/MS 분석에 앞서, 존재비가 높은(abundant) 단백질의 소실 및 시료 전처리를 위한 단백질체학 시료 전처리의 단계별 절차가 요약되어 있습니다.
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TMT-기반 정량을 위한 질량분석
초고분해능 정밀 질량(UHRAM) 질량분석법(MS)과 결합된 TMT 기반 라벨링은 보다 큰 복합 분석 용량을 가능하게 하여 많은 수의 시료에서 정량 단백질체학 분석의 깊이를 증가시킵니다. Thermo Fisher Scientific은 TMT10plex 아이소배릭(Isobaric) 질량 태그 라벨링 키트의 도입으로 이러한 실험의 복합 분석 가능성을 크게 높여 한 번의 실행으로 최대 10개의 시료를 비교할 수 있게 되었습니다. TMT 기반 정량의 주요 이점은 단일 분석으로 모든 출처의 여러 시료를 정량할 수 있다는 것입니다.
향상된 정량 정확도 및 정밀도에 대한 내용을 보려면 최적화된 TMT 실험의 실행을 위한 구체적인 워크플로우를 다운로드하십시오.
새로운 TMT SPS MS3 워크플로우(workflow)
동적 범위가 큰 복합 혼합물의 가장 정확한 TMT 정량은 Orbitrap Fusion 및 Orbitrap Fusion Lumos 기기를 포함한 Thermo Scientific Tribrid 질량분석기 제품군에서 Synchronous Precursor Selection(SPS) MS3 분석법을 사용하여 수행할 수 있습니다. 4명의 주요 연구자가 Synchronous Precursor Selection(SPS) MS3에 의한 텐덤 질량 태그(TMT) 복합 분석의 사용 및 연구에서 획기적인 발견을 촉진하는 방법에 대해 설명합니다.
아이소배릭(isobaric) 태그를 이용한 고처리량 정량 단백질체학이라는 제목의 이 백서(whitepaper)는 생물학자들이 단백질체를 더 깊이 탐색하고, 단백질 위치 변화를 측정하며, 저 존재비 단백질의 미세한 변화를 정량할 수 있도록 하는 단백질체학 분석 분야의 혁명을 일으킨 중요한 발전에 대해 설명합니다.
선구적인 Tribrid 질량분석기 제품군에 새로 추가된 Orbitrap Fusion Lumos Tribrid MS는 정량 및 단백질 특성 분석의 한계를 뛰어 넘어 시스템 생물학 연구자의 연구 범위를 확장합니다.
추가 리소스
TMT 기반 정량을 위한 데이터 분석 워크플로우
Thermo Scientific Proteome Discoverer 2.1 소프트웨어는 광범위한 단백질체학 워크플로우를 단순화하며 TMT 기반 데이터의 정량 분석에 권장됩니다. 이 소프트웨어는 대규모 데이터 세트를 처리할 수 있는 향상된 데이터 처리 기능을 갖추고 있으며 연구 관리 도구와 함께(예: TMT 10-plex 데이터 세트 사용) 사용할 수 있습니다. 버전 2.1은 다음과 같은 새롭고 향상된 TMT 정량 워크플로우를 특징으로 합니다.
- 리포터 이온 동위원소 분포를 추가하기 위한 새로운 사용자 인터페이스
- TMT10plex 시약에 대한 리포터 이온 동위원소 불순물을 설명할 수 있는 능력
- S/N 값을 기반으로 한 TMT 정량 실행
- S/N 값의 합계를 기반으로 한 단백질 및 펩타이드 정량
- 펩타이드 및 단백질 존재량 값의 정규화를 위한 새로운 방법
Proteome Discoverer 소프트웨어 데모 버전이 무료로 제공됩니다. Proteome Discoverer 소프트웨어 버전 2.1의 무료 60일 시험판을 다운로드하려면 Thermo Scientific Proteomics Software Portal을 방문하십시오.
Proteome Discoverer 2.1의 재현성 및 단백질 포괄 범위 향상
이 프리젠테이션에서는 MS2 및 MS3 기반 정량 분석법을 사용하여 재현 가능한 단백질 정량 결과를 얻는 것과 관련된 TMT 기반 리포터 이온 정량 단계를 검토합니다.
추가 리소스
Planet Orbitrap
Tips, applications, product information, community, technical papers and other resources for Orbitrap-based mass spectrometers.
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