Luminex® Assays

Luminex® Assays
Luminex® assays는 실제로 모든 실험실 각각의 필요에 맞는 형태로 만들어졌습니다. 활용성은 Luminex® xMAP® multiplex platform; 의 많은 장점 중 하나입니다. 이러한 장점은 cytokine 선별, 경로 분석, 간단한 프로파일링에 사용할 수 있도록 premixed Luminex® 분석 패널의 대규모 선택에도 이용된 바 있습니다. 또한, Life Technologies에서는 스스로 분석 패널을 만들거나 더 큰 패널을 만들기 위해 pre-mixed Luminex® assays에 추가할 수 있는 단일 표적 Luminex® bead kits도 제공하고 있습니다. 마지막으로, 고객의 관심대상 표적을 위한 맞춤 Luminex® 분석패널도 생산할 수 있습니다.

Luminex® assays 는 ELISA와 매우 유사한 절차를 사용하며 설정과 실행이 쉽습니다(Figure 1). Life Technologies에는 Luminex® xMAP® 기술 또는 Luminex® 를 처음 사용하는 경우, 도움을 드릴 수 있는 전담 FAS(Field Application Scientist) 팀이 있습니다. FAS가 직접 여러분의 실험실을 방문하여 Luminex® 분석을 실행하고, Luminex®장비 및 소프트웨어 설정 방법을 안내해드립니다. 또한 FAS팀에서는 실제로 제기될 수 있는 모든 문제들에 대한 해답을 찾는데 도움을 드릴 수 있습니다. Luminex® 개인적인 지원을 요청하세요.

Tables 1, 2, and 3은 Novex® multiplex Luminex® assays와 단백질표준(assay에 포함)의 우월성을 나타낸 것입니다. 다른 분석과 달리, 각 Luminex® assay에 최대 수의 beads가 사용되므로, 적어도 100 건/bead 영역/표적의 데이터가 수집됩니다. 일부 제조원에서 권장되는 50건과 비교하여 100건 이상을 계수함으로써, %CV가 낮아지고 보다 정밀한 분석이 가능합니다. Luminex® assays는 출하 전 엄격한 품질관리와 밸리데이션을 거쳤습니다. 대상 표적에 대한 특이도를 보장하기 위해 교차반응성에 대한 검사 역시 광범위하게 실시되었습니다. 또한, 제공해드리는 단백질 표준은 표준물질의 일관성을 극대화하기 위해 정밀하게 교정되었습니다.

(click to enlarge)

Figure 1. 빠르고 쉬운 Novex® multiplex Luminex® assay 프로토콜. 규정된 스펙트럼 속성을 갖는 beads를 단백질 특이 포획 항체에 접합시켜 샘플(농도를 아는 단백질 표준, 대조 샘플, 시험 샘플)과 함께 filter-bottom microplate 벽에 가합니다. 표적 단백질이 2시간의 배양과정에서 포획 항체에 결합합니다. Beads 세척 후, 단백질 특이적 비오틴화 검출항체를 가하고 1시간 동안 beads와 함께 배양합니다. 다음으로, 과량의 비오틴화 검출 항체를 제거하고, streptavidin-접합 형광단백질 R-Phycoerythrin (SAV-RPE)를 가해 30분 동안 배양합니다. SAV-RPE는 비오틴화 검출항체에 결합하여 4가지 성분의 고체상 샌드위치를 형성합니다. 세척하여 미결합 SAV-RPE 제거한 후, beads를 Luminex® 검출시스템으로 분석합니다. Beads의 스펙트럼 속성과 관련 R-Phycoerythrin (RPE) 형광량을 모니터링하여, 하나 이상의 단백질 농도를 측정할 수 있습니다. 연구용으로만 사용할 수 있습니다.  동물이나 사람의 치료 또는 진단용으로 사용할 수 없습니다.

Novex® multiplex Luminex® assays는 표적 당 100개의 beads로부터 데이터를 수집할 수 있도록 설정되었습니다. 일부 제공자로부터의 Luminex® assay 프로토콜은 50 events/region/target 만으로부터의 데이터 수집을 필요로 할 수 있습니다(다시 말하면, 검출시스템으로 각 표적 당 50 개 beads만을 판독하는 것을 요구할 수 있습니다.) 이러한 데이터는 beads 50개에서만 데이터를 수집하는 것과 비교하여 전체 100 개로부터 자료를 수집함으로써 %CV와 분석의 정밀도가 향상됨을 나타내는 것입니다.

Novex® mulitplex Luminex® assays는 이용가능한 경우 NIBSC 표준 (국제 표준품 집합)에 대해, 또는 측정의 적절성을 보장하기 위해 인산단백질 활성에 대한 출판된 세포 내 세포 모델에 대해 교정되었습니다. 단백질 표준은 표준의 완전성 및 성능에서의 일관성을 위해, 단일 및 multiplexed assay에서 동결건조 전후 검사됩니다.

Novex® multiplex Luminex® assays에서의 사용을 위해 선택된 항체가 목표 표적에 매우 특이적인지를 확인하기 위해 수십개의 유사 표적단백질로부터의 분석 반응을 측정했습니다. 경쟁사의 분석에 사용된 항체들은 엄격한 검사를 거치지 않아 비특이적인 분석결과가 나타날 수도 있습니다. 이 표에는 Novex® multiplex Luminex® 분석 또는 다른 제조원으로부터의 분석을 사용하여 유사한 표적단백질의 결과(나타난 형광 단위)가 비교되어 있습니다. Luminex® 분석에서는 유사한 비표적단백질로부터의 유의한 신호가 전혀 나타나지 않은데 비해, 다른 공급사로부터의 여러 분석에서는 비표적 단백질과의 유의한 교차반응성이 나타났습니다.