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Reagentes de Western Blot quimioluminescentes
Assim como com outros componentes em um sistema de Western Blot, há muitas opções disponíveis de substrato de Western Blot quimioluminescente. A seleção apropriada de um substrato depende do nível de detecção (sensibilidade) necessário, da abundância da proteína alvo, da abundância da amostra e da disponibilidade de anticorpos. Use as tabelas abaixo para encontrar o substrato correto de peroxidase de rábano (HRP) ou fosfatase alcalina (AP) para suas necessidades experimentais.
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Substratos quimioluminescentes recomendados
 |  |  | |
| SuperSignal West Atto | SuperSignal West Pico PLUS | SuperSignal West Dura | |
|---|---|---|---|
| Escolha quando... | O alvo é muito pouco-abundante, a amostra é limitada, ou anticorpos são limitados | Aplicações diárias; oferece maior sensibilidade em relação ao nível básico ECL | É necessária a execução de análises quantitativas Western Blotting ou a duração máxima do sinal |
| Características | Sensibilidade mais alta | A gama dinâmica mais ampla | Duração e linearidade mais longas |
| Sensibilidade | Femtocograma baixo para atograma alto | Picograma baixo para femtocograma | Femtocograma médio |
| Duração | 6 horas | Até 24 horas | 24 horas |
| Diluições de anticorpos recomendadas (1 mg/ml de caldo) | 1°: 1:5.000 2°: 1:100.000-1:250.000 | 1°: 1:1.000 2°: 01:20.000-1:100.000 | 1°: 1:5.000 2°: 01:50.000-1:250.000 |
| Cat. do cat. | A38554 (20 mL) A38555 (100 mL) A38556 (200 mL) | 34579 (20 mL) 34577 (200 mL) 34580 (500 mL) 34578 (1 L) | 37071 (20 mL) 34075 (100 mL) 34076 (200 mL) |
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Produtos adicionais para substratos HRP
Substratos quimioluminescentes de peroxidase de rábano (HRP)
A HRP (40 kDa) tornou-se a enzima padrão para a detecção de western blot quimioluminescente. Sua popularidade cresceu devido à sua estabilidade e tamanho menor, o que permite mais moléculas conjugadas por IgG, proporcionando maior sensibilidade. Além disso, o avanço e as melhorias em substratos quimioluminescentes para HRP permitiram uma sensibilidade ainda maior em substratos de AP para Western Blot. A escolha do substrato quimioluminescente HRP usado deve ser baseada na abundância de sua proteína alvo de interesse, na abundância da amostra contendo a proteína alvo, na qualidade dos anticorpos e no nível de sensibilidade e no tipo de instrumentação disponível para detecção.
Webinar em destaque
Webinar: Detectando proteínas de baixa abundância em um western blot
Neste webinar, discutimos métodos específicos desde a preparação de amostras até a imunodetecção que podem ajudar a superar desafios e melhorar o sinal para o ruído de proteínas de baixa abundância para uma detecção de western blot mais bem-sucedida.
Substratos de AP
Substrato quimioluminescente Novex AP
| Longa duração do sinal | |
|---|---|
| Sensibilidade | Picograma baixo |
| Duração | Mais de 24 horas |
| Diluições de anticorpos recomendadas (1 mg/ml de caldo) | 1°: 1:500-5.000 2°: 1:2.000-1:10.000 |
| Quando usar | Substrato independente usado para membranas de PVDF Add Nitro Block II (vendido separadamente) ao substrato para uso com membranas de nitrocelulose |
Produtos adicionais para substratos de AP
| Produto da Thermo Fisher Scientific | Descrição | Cat. do cat. |
|---|---|---|
| Aprimorador de substrato quimioluminescente Novex AP (Nitro Block II) | Solução 20X de Nitro-Block-II destinada a ser utilizada em conjunto com o substrato quimiluminescente Novex AP para aumentar a intensidade dos sinais quimioluminescentes ao sondar blots em membranas de nitrocelulose | WP20003 |
| Kit cromogênico WesternBreeze, anticoelho | Kit completo para detecção de proteínas transferidas para membranas de nitrocelulose ou PVDF usando anticorpos primários de camundongo. | WB7104 |
| Kit WesternBreezeQuimioluminescente, anticoelho | Kit completo para detecção de proteínas transferidas para membranas de nitrocelulose ou PVDF usando anticorpos primários de coelho | WB7106 |
| Kit Quimioluminescente WesternBreeze, anticabra | Kit completo para detecção de proteínas transferidas para membranas de nitrocelulose ou PVDF usando anticorpos primários de cabra | WB7108 |
Substratos quimioluminescentes da fosfatase alcalina (AP)
Para detecção de western blot baseada na fosfatase alcalina (AP), 86 kDa, oferecemos nosso substrato CDP-Star, que foi projetado para fornecer sensibilidade de nível de picograma e é compatível com filme de raios X tradicional e imagens baseadas em CCD. O CDP-Star é desfosforilado por AP para produzir um intermediário de ânion fenolato de dioxetano meta-estável que se decompõe e emite luz com intensidade máxima em um comprimento de onda de 475 nm. A emissão de luz ocorre somente durante a reação enzima-substrato; portanto, uma vez que o substrato próximo à enzima é esgotado, a saída do sinal é interrompida. A luz emitida permanece estável por até 24-96 horas, permitindo várias exposições.
Escolha entre um substrato independente, substrato quimioluminescente Novex AP ou os kits de imunodetecção quimioluminescente WesternBreeze que contêm todas as soluções necessárias para sua aplicação, incluindo soluções de bloqueio, diluente de anticorpo primário, solução de anticorpo secundário pronta para uso, substrato quimioluminescente pronto para uso, soluções de lavagem, bandejas de incubação, papéis de filtro pré-cortados, folha de poliéster para desenvolvimento uniforme do substrato na membrana. O substrato quimioluminescente Novex AP deve ser combinado com o Nitro Block II para uso com membranas de nitrocelulose.
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Figura 1. Mecanismo de emissão de luz para substrato CDP-Star.
As membranas de nitrocelulose proporcionam um ambiente ineficiente para quimioluminescência de substratos de 1,2 dioxetanos, resultando em intensidade de sinal muito baixa. O intensificador de membrana Nitro-Block-II aumenta a intensidade do sinal tanto na nitrocelulose como nas membranas PVDF. Os potenciadores Nitro-Block-II geram um ambiente hidrofóbico na superfície da membrana que aumenta a intensidade da quimioluminescência. São mostrados os efeitos do tratamento do NitroBlock Enhancer nas membranas de nitrocelulose e PVDF. Sem o Nitro-Block Enhancer, o sinal nas membranas de nitrocelulose é fraco, tornando a detecção impossível ou exigindo tempos de exposição extremamente longos. Com o Nitro-Block Enhancer, exposições curtas de 10 a 45 minutos são obtidas. Embora as membranas PVDF não exijam o uso do Nitro-Block Enhancer, os tempos de exposição são dez vezes mais rápidos com o Nitro-Block Enhancer. Isso permite tempos de exposição muito curtos em PVDF, variando de 15 segundos a 15 minutos para análises Western Blot.
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Figura 2. Realce do sinal quimioluminescente em membranas de nitrocelulose e PVDF com Nitro-Block Enhancer usando um curto tempo de exposição.
Manuais do produto
Notas de aplicação e folhetos
Comece com nossos kits combinados
Kit combinado de substrato SupermSignal West
| Opção A |
|---|
Pico PLUS (500mL) + Trial size Atto (20mL) Este kit combinado inclui:
|
| Opção B |
|---|
Femto (100 mL) + Trial size Atto (20 mL) Este kit combinado inclui:
|
| Opção C |
|---|
Atto (100 mL) + Trial size Pico PLUS (20 m) Este kit combinado inclui:
|
| Opção D |
|---|
Pico PLUS (20 mL) e ATTO (20 mL) Este kit combinado inclui:
|
Captura e análise de imagens para western blot quimioluminescentes
O sinal de Western Blot quimioluminescente pode ser capturado com filmes de raios X, instrumentos de imagem digital baseados em câmera CCD (Charge-Coupled Device, dispositivo de carga acoplada)e fosforimagers que detetam a quimioluminescência. O filme de raios X fornece dados qualitativos e semiquantitativos e é útil para confirmar a presença de proteínas alvo, os instrumentos de imagem baseados em câmera CCD oferecem as vantagens da análise qualitativa, captura e análise instantâneas de imagens, maior sensibilidade, maior resolução e um intervalo dinâmico maior do que o filme.
iBright Imaging Systems
Capture e analise imagens com qualidade para publicação a partir de análises de western blot quimioluminescentes com o iBright Imaging Systems Esses instrumentos de alto desempenho aprimoram a experiência de geração de imagens por meio de hardware potente, tecnologias automatizadas avançadas e uma interface fácil de usar para pesquisadores de todos os níveis de experiência.
Filme de raios X.
Thermo Scientific CL-XPosure Film é um excelente filme fotográfico para uso com substratos de quimioluminescência (ECL) aprimorados para peroxidase de rábano (HRP) ou fosfatase alcalina (AP).
Substratos quimioluminescentes recomendados
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| SuperSignal West Atto | SuperSignal West Pico PLUS | SuperSignal West Dura | |
|---|---|---|---|
| Escolha quando... | O alvo é muito pouco-abundante, a amostra é limitada, ou anticorpos são limitados | Aplicações diárias; oferece maior sensibilidade em relação ao nível básico ECL | É necessária a execução de análises quantitativas Western Blotting ou a duração máxima do sinal |
| Características | Sensibilidade mais alta | A gama dinâmica mais ampla | Duração e linearidade mais longas |
| Sensibilidade | Femtocograma baixo para atograma alto | Picograma baixo para femtocograma | Femtocograma médio |
| Duração | 6 horas | Até 24 horas | 24 horas |
| Diluições de anticorpos recomendadas (1 mg/ml de caldo) | 1°: 1:5.000 2°: 1:100.000-1:250.000 | 1°: 1:1.000 2°: 01:20.000-1:100.000 | 1°: 1:5.000 2°: 01:50.000-1:250.000 |
| Cat. do cat. | A38554 (20 mL) A38555 (100 mL) A38556 (200 mL) | 34579 (20 mL) 34577 (200 mL) 34580 (500 mL) 34578 (1 L) | 37071 (20 mL) 34075 (100 mL) 34076 (200 mL) |
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Produtos adicionais para substratos HRP
Substratos quimioluminescentes de peroxidase de rábano (HRP)
A HRP (40 kDa) tornou-se a enzima padrão para a detecção de western blot quimioluminescente. Sua popularidade cresceu devido à sua estabilidade e tamanho menor, o que permite mais moléculas conjugadas por IgG, proporcionando maior sensibilidade. Além disso, o avanço e as melhorias em substratos quimioluminescentes para HRP permitiram uma sensibilidade ainda maior em substratos de AP para Western Blot. A escolha do substrato quimioluminescente HRP usado deve ser baseada na abundância de sua proteína alvo de interesse, na abundância da amostra contendo a proteína alvo, na qualidade dos anticorpos e no nível de sensibilidade e no tipo de instrumentação disponível para detecção.
Webinar em destaque
Webinar: Detectando proteínas de baixa abundância em um western blot
Neste webinar, discutimos métodos específicos desde a preparação de amostras até a imunodetecção que podem ajudar a superar desafios e melhorar o sinal para o ruído de proteínas de baixa abundância para uma detecção de western blot mais bem-sucedida.
Substratos de AP
Substrato quimioluminescente Novex AP
| Longa duração do sinal | |
|---|---|
| Sensibilidade | Picograma baixo |
| Duração | Mais de 24 horas |
| Diluições de anticorpos recomendadas (1 mg/ml de caldo) | 1°: 1:500-5.000 2°: 1:2.000-1:10.000 |
| Quando usar | Substrato independente usado para membranas de PVDF Add Nitro Block II (vendido separadamente) ao substrato para uso com membranas de nitrocelulose |
Produtos adicionais para substratos de AP
| Produto da Thermo Fisher Scientific | Descrição | Cat. do cat. |
|---|---|---|
| Aprimorador de substrato quimioluminescente Novex AP (Nitro Block II) | Solução 20X de Nitro-Block-II destinada a ser utilizada em conjunto com o substrato quimiluminescente Novex AP para aumentar a intensidade dos sinais quimioluminescentes ao sondar blots em membranas de nitrocelulose | WP20003 |
| Kit cromogênico WesternBreeze, anticoelho | Kit completo para detecção de proteínas transferidas para membranas de nitrocelulose ou PVDF usando anticorpos primários de camundongo. | WB7104 |
| Kit WesternBreezeQuimioluminescente, anticoelho | Kit completo para detecção de proteínas transferidas para membranas de nitrocelulose ou PVDF usando anticorpos primários de coelho | WB7106 |
| Kit Quimioluminescente WesternBreeze, anticabra | Kit completo para detecção de proteínas transferidas para membranas de nitrocelulose ou PVDF usando anticorpos primários de cabra | WB7108 |
Substratos quimioluminescentes da fosfatase alcalina (AP)
Para detecção de western blot baseada na fosfatase alcalina (AP), 86 kDa, oferecemos nosso substrato CDP-Star, que foi projetado para fornecer sensibilidade de nível de picograma e é compatível com filme de raios X tradicional e imagens baseadas em CCD. O CDP-Star é desfosforilado por AP para produzir um intermediário de ânion fenolato de dioxetano meta-estável que se decompõe e emite luz com intensidade máxima em um comprimento de onda de 475 nm. A emissão de luz ocorre somente durante a reação enzima-substrato; portanto, uma vez que o substrato próximo à enzima é esgotado, a saída do sinal é interrompida. A luz emitida permanece estável por até 24-96 horas, permitindo várias exposições.
Escolha entre um substrato independente, substrato quimioluminescente Novex AP ou os kits de imunodetecção quimioluminescente WesternBreeze que contêm todas as soluções necessárias para sua aplicação, incluindo soluções de bloqueio, diluente de anticorpo primário, solução de anticorpo secundário pronta para uso, substrato quimioluminescente pronto para uso, soluções de lavagem, bandejas de incubação, papéis de filtro pré-cortados, folha de poliéster para desenvolvimento uniforme do substrato na membrana. O substrato quimioluminescente Novex AP deve ser combinado com o Nitro Block II para uso com membranas de nitrocelulose.
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Figura 1. Mecanismo de emissão de luz para substrato CDP-Star.
As membranas de nitrocelulose proporcionam um ambiente ineficiente para quimioluminescência de substratos de 1,2 dioxetanos, resultando em intensidade de sinal muito baixa. O intensificador de membrana Nitro-Block-II aumenta a intensidade do sinal tanto na nitrocelulose como nas membranas PVDF. Os potenciadores Nitro-Block-II geram um ambiente hidrofóbico na superfície da membrana que aumenta a intensidade da quimioluminescência. São mostrados os efeitos do tratamento do NitroBlock Enhancer nas membranas de nitrocelulose e PVDF. Sem o Nitro-Block Enhancer, o sinal nas membranas de nitrocelulose é fraco, tornando a detecção impossível ou exigindo tempos de exposição extremamente longos. Com o Nitro-Block Enhancer, exposições curtas de 10 a 45 minutos são obtidas. Embora as membranas PVDF não exijam o uso do Nitro-Block Enhancer, os tempos de exposição são dez vezes mais rápidos com o Nitro-Block Enhancer. Isso permite tempos de exposição muito curtos em PVDF, variando de 15 segundos a 15 minutos para análises Western Blot.
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Figura 2. Realce do sinal quimioluminescente em membranas de nitrocelulose e PVDF com Nitro-Block Enhancer usando um curto tempo de exposição.
Manuais do produto
Notas de aplicação e folhetos
Comece com nossos kits combinados
Kit combinado de substrato SupermSignal West
| Opção A |
|---|
Pico PLUS (500mL) + Trial size Atto (20mL) Este kit combinado inclui:
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| Opção B |
|---|
Femto (100 mL) + Trial size Atto (20 mL) Este kit combinado inclui:
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| Opção C |
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Atto (100 mL) + Trial size Pico PLUS (20 m) Este kit combinado inclui:
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| Opção D |
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Pico PLUS (20 mL) e ATTO (20 mL) Este kit combinado inclui:
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Captura e análise de imagens para western blot quimioluminescentes
O sinal de Western Blot quimioluminescente pode ser capturado com filmes de raios X, instrumentos de imagem digital baseados em câmera CCD (Charge-Coupled Device, dispositivo de carga acoplada)e fosforimagers que detetam a quimioluminescência. O filme de raios X fornece dados qualitativos e semiquantitativos e é útil para confirmar a presença de proteínas alvo, os instrumentos de imagem baseados em câmera CCD oferecem as vantagens da análise qualitativa, captura e análise instantâneas de imagens, maior sensibilidade, maior resolução e um intervalo dinâmico maior do que o filme.
iBright Imaging Systems
Capture e analise imagens com qualidade para publicação a partir de análises de western blot quimioluminescentes com o iBright Imaging Systems Esses instrumentos de alto desempenho aprimoram a experiência de geração de imagens por meio de hardware potente, tecnologias automatizadas avançadas e uma interface fácil de usar para pesquisadores de todos os níveis de experiência.
Filme de raios X.
Thermo Scientific CL-XPosure Film é um excelente filme fotográfico para uso com substratos de quimioluminescência (ECL) aprimorados para peroxidase de rábano (HRP) ou fosfatase alcalina (AP).
Detecção de quimiluminescência
A detecção quimioluminescente ocorre quando a energia de uma reação química é liberada na forma de luz. Os dois repórteres enzimáticos mais comuns que catalisam reações quimioluminescentes necessárias para gerar um sinal gravável são a peroxidase (HRP) e a fosfatase alcalina (AP).
| Substratos HRP (peroxidase Horseradish) | Substratos AP (fosfatase alcalina) | |
|---|---|---|
| Sensibilidade |
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| Geração de sinal | Imediato | Aumenta gradualmente com o sinal máximo em cerca de 30-60 minutos |
| Duração do sinal | Até 24 horas | 24 a 96 horas |
| Considerações | Compatível com tampões comuns, como TBS e PBS | Não compatível com tampões fosfatados |
| Quando usar | Anticorpos ou sondas conjugados com HRP | Anticorpos ou sondas conjugados com AP |
Encontre anticorpos secundários vinculados HRP para detecção de Western Blot quimioluminescente >
Encontre anticorpos secundários conjugados AP para detecção de Western Blot quimioluminescente >
Recursos
Explore: Escadas de proteína Western Blot
Explore: Imagem e análise Western Blot
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.