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Hibridación in situ (ISH)
La hibridación in situ (ISH) es una potente técnica para localizar objetivos de ácidos nucleicos específicos en células y tejidos fijados, lo que permite obtener información espacial y temporal sobre la expresión génica y los loci genéticos. El flujo de trabajo básico de la ISH es similar al de las hibridaciones blot: la sonda de ácidos nucleicos se sintetiza, etiqueta, purifica y recuece con el objetivo específico. La diferencia reside en la mayor cantidad de información que se obtiene mediante la visualización de los resultados en el tejido.
En la actualidad existen dos formas básicas de visualizar los objetivos de ARN y ADN in situ: detección cromogénica (CISH) y fluorescencia (FISH). Las características inherentes a cada método de detección (consulte la siguiente tabla) permiten que FISH y CISH sean útiles para aplicaciones muy distintas. Aunque ambos utilizan una sonda específica de objetivo etiquetada que se hibrida con la muestra, los instrumentos utilizados para visualizar las muestras son distintos en cada método. A continuación se destacan las diferencias y las ventajas de cada método.
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Características de los métodos de hibridación in situ
| Técnica | Método de visualización/instrumentos | Ventaja principal | Aplicación principal |
|---|---|---|---|
| CISH | Microscopía de campo claro | Capacidad para visualizar la señal de CISH y la morfología del tejido simultáneamente | Diagnóstico de anatomía patológica molecular |
| FISH de ADN | Microscopía de fluorescencia | Para multiplexing: visualice varios objetivos en la misma muestra | Presencia de genes, ubicación y número de copias, análisis de mutación |
| FISH de ARN | Microscopía de fluorescencia, HCS y citometría de flujo | Para multiplexing: visualice varios objetivos en la misma muestra | Expresión génica, ubicación espacial y temporal del ARN |
Hibridación cromogénica in situ (CISH)
La hibridación cromogénica in situ (CISH) permite obtener información genética de la morfología del tejido mediante métodos presentes en los laboratorios de histología. Ofrecemos sondas de ADN para CISH y reactivos clave para el análisis de CISH.
Hibridación in situ fluorescente (FISH)
La hibridación in situ fluorescente (FISH) con multiplexing permite analizar distintos objetivos simultáneamente y visualizar la colocalización de una única muestra. Este método utiliza etiquetas de fluoróforos de distintos espectros para cada sonda de hibridación y proporciona la potencia necesaria para resolver distintos elementos genéticos o múltiples patrones de expresión génica en una única muestra, con visualización multicolor.
FISH de ARN mediante amplificación de la señal de ADN ramificado
Invitrogen™ ViewRNA™ y PrimeFlow™ assays son un método de ISH de ARN de fluorescencia directa que utiliza la amplificación de la señal de ADN ramificado (ADNr) para la detección de la señal específica. El multiplexing de objetivos de ARN es posible mediante el uso de sistemas de amplificación de la señal independientes y compatibles. El ensayo de hibridación in situ fluorescente del ARN consta de cuatro pasos principales: preparación de la muestra, hibridación del objetivo, amplificación de la señal y detección. Esta metodología se traduce en una mayor especificidad, un fondo más bajo y una mayor relación señal-ruido.
- Descripción general del ensayo y la tecnología ViewRNA (para microscopía de fluorescencia y detección de alto contenido [HCS])
- Ensayo de ARN PrimeFlow (para citometría de flujo)
Áreas de aplicación relacionadas
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.