Mueva las esferas, no los líquidos, para garantizar la pureza y la integridad de las muestras

Muchos sistemas automatizados de manipulación de líquidos e instrumentos de purificación mueven los reactivos hacia adentro y hacia fuera de los pocillos para realizar los diferentes pasos del aislamiento de ácidos nucleicos. Por el contrario, los sistemas de purificación de muestras KingFisher de Thermo Scientific utilizan varillas magnéticas permanentes con peines de punta desechables para recoger las esferas de la solución y, a continuación, liberarlos en pocillos sucesivos, cada uno de los cuales contiene reactivos para el siguiente paso de aislamiento. Gracias a este método altamente eficaz de recogida y transferencia de esferas, se obtienen extracciones limpias, resultados eficaces y se conserva la muestra. Mediante un proceso sencillo (unión, lavado, elución), los instrumentos KingFisher pueden automatizar la extracción de cualquier analito de interés que pueda unirse a una esfera, incluso a partir de muestras complejas.

Mover las esferas en lugar de los líquidos aporta mayor pureza, puesto que no se transfiere entre los pocillos materia orgánica ni contaminantes de reactivos líquidos que no sean dianas. También permite reducir al mínimo la pérdida de muestras y ofrece un mayor volumen procesado, ya que puede optimizar su protocolo para que en la solución no queden esferas, con los ácidos nucleicos de sus dianas unidos.

 

La preparación manual de muestras y la pérdida de muestras pueden introducir incoherencias en las muestras, lo cual se observa en los datos como valores atípicos y barras de error más amplias. Las aplicaciones posteriores de alto rendimiento, como qPCR, NGS, PCR digital y espectrometría de masas, pueden ser muy sensibles a estas inconsistencias. Los instrumentos KingFisher reducen los errores de procesamiento de usuarios a la vez que aumentan la reproducibilidad de sus resultados. Nuestros datos muestran que las muestras procesadas con instrumentos KingFisher arrojan resultados uniformes en diferentes carrera y diferentes usuarios.

Más velocidad, menos trabajo manual

Los instrumentos KingFisher le ayudan a ahorrar un tiempo valioso al eliminar los pasos manuales y reducir el tiempo de procesamiento global en comparación con la preparación manual o incluso con otros instrumentos de preparación de muestras. Esto no solo mejora la eficacia del flujo de trabajo, sino que también reduce la exposición a muestras potencialmente infecciosas.

 

Con la automatización KingFisher, cada paso de su flujo de trabajo, como reactivo, anticuerpo, captura de dianas, lavados y elución, está representado por una sola placa en el carrusel del instrumento (o, en el caso de KingFisher Duo Prime, en las filas de pocillos en la placa). Una vez las placas están preparadas y cargadas, simplemente pulse Start (Empezar) y el instrumento ejecutará el protocolo programado automáticamente. A medida que se completa cada paso, el carrusel gira para llevar la siguiente placa debajo del cabezal magnético y los peines con puntas.

 

Un sistema KingFisher Flex puede aislar el ARN vírico de una placa de 96 pocillos en solo 25 minutos. Un laboratorio habitual que utiliza 1-4 instrumentos Flex puede procesar fácilmente entre 1000 y 4000 muestras en una jornada de 8 horas. Si se utilizan los instrumentos altamente automatizados KingFisher Presto puede procesarse el mismo número de muestras, pero el personal del laboratorio necesita prestar mucha menos atención. 

Versátil para una gran variedad de aplicaciones

Los sistemas KingFisher pueden aislar y purificar de forma suave y eficaz ácidos nucleicos, proteínas y células de una amplia variedad de tipos de muestras para muchas y distintas aplicaciones posteriores.

 

Las diferentes químicas permiten gestionar muchos tipos de muestras. Los sistemas KingFisher ofrecen la flexibilidad de procesar incluso muestras complejas como la sangre, la saliva, mucosidades, agua marina, tierra, heces, escamas de pescado y otros tipos de muestras. Los sistemas KingFisher pueden gestionar la preparación de muestras para una enorme variedad de aplicaciones.

 

Los diferentes tipos de muestras y aplicaciones requieren diferentes químicas para extraer el analito. Para simplificar la selección y la facilidad de uso, hemos desarrollado kits y soluciones que contienen esferas, tampones y protocolos optimizados para aumentar al máximo la pureza y el rendimiento de cada aplicación y tipo de muestra. La sección Kits, Reagents, and Protocols (Kits, reactivos y protocolos) contiene información detallada sobre estas aplicaciones y kits, pero estos son algunos de los aspectos destacados:

 

Kits MagMAX para una extracción optimizada de ácidos nucleicos. Para la extracción automatizada de ADN y ARN mediante sistemas KingFisher, los reactivos de elección son los kits MagMAX de Applied Biosystems. Por ejemplo, los kits de aislamiento de ácido nucleico MagMAX Viral/Pathogen se pueden utilizar para extraer y purificar ARN de hisopados u otros tipos de muestras. Otros kits populares de MagMAX le ayudan a extraer ADN genómico (ADNg) de una gran variedad de muestras; ADN extracelular circulantes para biopsias líquidas; ADN y ARN de muestras de ADN y ARN incluidas en parafina y fijadas en formol (FFPE) para la investigación clínica del cáncer, y ARN y miARN total para la investigación de expresión génica.

 

Reactivos Dynabeads y SMART Digest para otras dianas. Los instrumentos KingFisher pueden utilizar esferas magnéticas Invitrogen Dynabeads o kits SMART Digest de Thermo Scientific para capturar y aislar otros ácidos nucleicos, proteínas y estructuras celulares. Por ejemplo, podría utilizar un kit SMART Digest para automatizar la digestión de proteínas de un anticuerpo monoclonal como ipilimumab o rituximab (Rituxan®) para la caracterización y el mapeo de péptidos en profundidad. Puede combinar un instrumento KingFisher con esferas magnéticas Dynabeads para capturar exosomas tumorales CD9+ y realizar análisis posteriores mediante citometría de flujo o inmunoelectrotransferencia.

 

Todos los kits y muchos reactivos incluyen protocolos modificables optimizados para instrumentos KingFisher. Para buscar kits y reactivos para su aplicación, explore el contenido de la ficha Kits, Reagents and Protocols (Kits, reactivos y protocolos) o utilice nuestra Selection Guide (Guía de selección). Si necesita ayuda para personalizar reactivos o desarrollar protocolos para sus necesidades de aplicación en particular, nuestros especialistas en aplicaciones de campo y especialistas en ventas técnicas le ayudarán con mucho gusto.

Sistema completo y optimizado basado en Dynabeads

Los instrumentos de preparación de muestras KingFisher están optimizados para su uso con kits de purificación de ácidos nucleicos MagMAX, reactivos Dynabeads y placas y plásticos KingFisher. Estos productos se han diseñado y fabricado conforme a exigentes normas y los protocolos que se han desarrollado para ellos se han probado, perfeccionado y validado. Cuando utilice estos productos y protocolos de forma conjunta, puede confiar en el funcionamiento de su instrumento y en la pureza, el rendimiento y la integridad de las muestras de sus resultados.

Los sistemas KingFisher están optimizados para funcionar con kits MagMAX, reactivos Dynabeads y placas y plásticos KingFisher.

 

La optimización de los reactivos de esferas magnéticas Dynabeads (que también se incluyen en los kits de purificación MagMAX) es fundamental para lograr una unión uniforme y unos resultados fiables. Dynabeads son partículas superparamagnéticas, lo que significa que muestran propiedades magnéticas cuando se colocan en un campo magnético sin magnetismo residual una vez que se eliminan del campo magnético. Son suaves en células y moléculas, y capturan dianas directamente de muestras biológicas en tubos o placas, sin columnas ni centrifugación.

Vea nuestro vídeo de edición legal para saber por qué las microesferas magnéticas Dynabeads de tamaño micro son mejores para estudiar los procesos celulares naturales que las “microesferas” magnéticas de tamaño nano. (7:21)

Los procesos de fabricación controlados estrechamente de Dynabeads producen esferas magnéticas con uniformidad de forma esférica, tamaño y suavidad. Con la misma superficie que se ofrece para cada experimento, puede obtener resultados más fiables y reproducibles.

 

 

Las esferas magnéticas Dynabeads tienen una superficie definida para realizar la unión necesaria, sin ninguna superficie interior para atrapar proteínas no deseadas. A. Los productos Dynabeads son las esferas superparamagnéticas monodispersas más uniformes, fabricadas con calidad de producto altamente controlada para garantizar el mayor grado de reproducibilidad posible. B, C, D. Las partículas magnéticas de otros proveedores tienen formas y tamaños variables que atrapan las impurezas, lo que da lugar a una menor reproducibilidad y a una mayor unión inespecífica.

 

Dentro de esta optimización, los sistemas KingFisher son flexibles, con lo que tiene la libertad de modificar y personalizar el flujo de trabajo según los requisitos de su experimento o proceso. Los instrumentos ofrecen:

  • Distintos niveles de rendimiento: procese de 6 a 96 muestras por carrera, en función del modelo
  • Formatos intercambiables: elija placas estándar de 24 o 96 pocillos o de pocillos profundos para procesar volúmenes de entrada de 20 a 1000 µl
  • Cabezales magnéticos intercambiables: para adaptarse de forma óptima al formato de placa que elija
  • Personalización de protocolos: edite, modifique o cree fácilmente nuevos protocolos con el software BindIt

Protocolos descargables y personalizables

Para garantizar que los sistemas KingFisher se adapten a sus necesidades cambiantes de investigación, el software BindIt BindIx de Thermo Scientific se incluye de forma gratuita con todos los instrumentos KingFisher.

 

El software le permite crear, modificar y almacenar sus propios protocolos en su PC, transferirlos a su instrumento KingFisher y realizar un seguimiento de su ejecución en la pantalla del instrumento durante el transcurso de la carrera. También le permite definir y editar pasos y parámetros en cada parte de su protocolo —unión, lavado y elución—, así como definir placas y reactivos KingFisher en el diseño de la placa. Si ya ha desarrollado un protocolo manual, puede convertirlo en un protocolo automatizado en cuestión de minutos.

 

Los protocolos están disponibles para los kits de aislamiento de ácidos nucleicos MagMAX y Dynabeads, así como para los productos de purificación de proteínas Dynabeads y SMART Digest. Una vez cargados en el instrumento, puede modificar los protocolos y almacenarlos para su posterior reutilización.

Los protocolos simplificados para las pruebas de detección de SARS-CoV-2 a partir de muestras nasofaríngeas obtenidas con hisopo fueron tan eficaces para aislar cuatro dianas de ARN vírico como el protocolo estándar.

Fácil de aprender, fácil de usar

Los sistemas KingFisher están diseñados para ser fáciles de instalar, de aprender y de usar. En la mayoría de los casos, estará listo para funcionar en 10 minutos o menos. Los instrumentos también se pueden personalizar según los requisitos de su laboratorio.

 

Los flujos de trabajo también son sencillos. Una vez configurado, solo tiene que desplazarse al protocolo que desea ejecutar en la pantalla del instrumento y seguir las instrucciones paso a paso acerca de cómo preparar y cargar cada placa. A continuación, pulse Start (Empezar) y vea el proceso. (O deje que el instrumento siga el protocolo automáticamente mientras usted se dedica a otras tareas). Si lo desea, puede personalizar el protocolo, como la duración de los pasos o el número de mezclas, directamente en la pantalla.

 

La mejor manera de entender la simplicidad de la preparación de muestras de KingFisher es verla en acción. Le recomendamos que programe una demostración en directo en su laboratorio con sus propias muestras o una demostración virtual que podamos personalizar para su laboratorio. Para disfrutar de lo que experimentará, vea nuestro vídeo de demostración.

Las demostraciones en directo o virtuales, como se muestra en este vídeo, muestran la simplicidad de la preparación de muestras de KingFisher. (27:28)

Después de ver una demostración de KingFisher en su laboratorio, la mayoría de los clientes compran el instrumento para una aplicación en particular. Pero una vez que lo instalan en su laboratorio y ven lo verdaderamente fácil que es, a menudo encuentran otros usos para el instrumento y se convierte en una verdadera herramienta indispensable para el laboratorio.

Valores de Ct para muestras nasofaríngeas artificiales obtenidas con hisopo positivas para SARS-CoV-2 con diferentes flujos de trabajo de preparación de muestras. Las muestras nasofaríngeas obtenidas con hisopo se enriquecieron con 250 copias/ml (izquierda) o 750 copias/ml (derecha) de ARN vírico del SARS-CoV-2 (1 o 3 veces el límite de detección, respectivamente), y el ARN se extrajo de 200 μl o 400 μl de la muestra enriquecida por triplicado con el kit MagMAX Viral/Pathogen con (+) o sin (–) lavado 3. Tras la elución en 50 μl, las muestras se analizaron mediante qRT-PCR para cuatro dianas de ARN (símbolos en color) por triplicado. Los valores de Ct para cada diana fueron muy consistentes (los símbolos se agrupaban estrechamente) y prácticamente idénticos entre los volúmenes de muestra y las condiciones de lavado. Todas las muestras negativas tenían valores de Ct de “Undetected” (No detectado) (no se muestran los datos).