Phusion Plus DNA 聚合酶

成功率更高,设置更简单,值得信赖的PCR酶

Thermo Scientific Phusion Plus DNA聚合酶是Phusion高保真DNA聚合酶家族的最新成员,该系列产品久负盛名,在成千上万篇文献中被引用。作为一个热启动,具有校正功能的PCR酶,Phusion Plus DNA聚合酶使得PCR扩增具有高序列准确性、灵敏性和特异性。此外,其专门配制的反应缓冲液使您无需计算引物退火温度即可进行PCR扩增,从而帮助节省时间并避免PCR运行中的错误。

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产品优势

  • 高序列准确度 —>100×Taq 聚合酶高保真度
  • 设置方便—由于独特的缓冲液配方,对不同引物均可使用60°C通用退火温度,无需计算Tm
  • 更高的特异性和室温稳定性— 通过热启动修饰减少非特异性扩增和引物降解,配制好的反应体系可在室温下稳定24小时,适用于自动化和高通量应用
  • 强劲PCR扩增 —高效扩增高GC含量序列和包含抑制剂的DNA模板 ;快速延伸速度15–30 sec/kb
  • 更少的加样步骤—提供包含或不包含上样染料的预混液形式


设置更方便,PCR成功率更高

视频:成功率更高,设置更简单,值得信赖的PCR酶

观看视频,了解Phusion Plus DNA聚合酶的5大升级优势

Phusion Plus DNA聚合酶的支持数据

作为具有校正功能的超高保真度的聚合酶,使用Phusion Plus DNA聚合酶产生的扩增子错误率非常低,让您对PCR序列准确性充满信心。

高保真 PCR 酶保真度值柱状图

图 1.不同品牌高保真酶相对于Taq DNA聚合酶的保真度。通过二代测序分子标签法确定错误率,随后均一化为相对于Taq DNA聚合酶的保真度倍数。

由于其反应缓冲液的独特配方,使用Phusion Plus DNA聚合酶无需通过退火温度(Tm)计算器来确定退火温度。无需考虑引物的Tm值,所有的靶标都可以使用60℃的通用退火温度来进行扩增。此外,如果您希望沿用原本的Phusion方案,这种酶也可以在计算的退火温度下使用。

通用退火温度与计算退火温度的 PCR 凝胶图像对比

图 2.在两种退火温度条件下进行PCR扩增。从50ng人类基因组DNA(gDNA)中扩增12个不同退火温度(在每一列上方已标示)的靶标。采用60°C通用退火温度(左图)或使用Tm计算器计算的退火温度(右图)。分子量标准为Thermo Scientific ZipRuler Express Ladder DNA 2

Phusion Plus DNA聚合酶的通用退火功能允许使用通用循环方案, 帮助您同时扩增不同长度的PCR靶标并节省时间。不同长度的靶标均使用同一退火温度(60°C)和基于最长扩增子的延伸时间——即在同一模块中同时扩增多个靶标,而不会影响PCR产量和特异性。

PCR 比较不同目标的共循环与单独循环

图 3.使用Phusion Plus DNA聚合酶可同时扩增多个PCR靶标。从人类基因组DNA中扩增5个不同长度的靶标,对所有靶标采用基于最长扩增子的延伸时间(最长7.5kb ,需3分45秒)的通用循环方案(左图),或针对不同靶标采用不同的延伸时间方案(0.3 kb 9秒,0.7 kb 21秒,2 kb 60秒,3.9 kb 2分钟,7.5 kb 3分45秒)进行扩增(右图)。分子量标准为ZipRuler Express DNA Ladder 2

使用Phusion Plus DNA聚合酶可获得更高的PCR特异性和产量。 该酶采用亲体分子热启动修饰,有助于抑制在PCR体系配制时酶的活性,防止非特异性扩增和引物降解。

使用不同 DNA 聚合酶的 0.3 至 7.5 kb 扩增子的 PCR 凝胶图像
图 4.使用Phusion Plus DNA聚合酶的高产量和特异性。使用不同品牌的DNA聚合酶,按照厂家推荐方案从100 ng人类gDNA中扩增 0.3-7.5 kb DNA靶标。分子量标准为Thermo Scientific GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder

Phusion Plus DNA聚合酶可以检测低至0.08 ng的人基因组DNA。

凝胶图像显示使用不同 DNA 聚合酶进行 PCR 的灵敏度
图6.Phusion Plus DNA聚合酶的高灵敏性。 使用不同品牌的DNA聚合酶, 按照厂商推荐的方案从不同含量的人类基因组DNA中扩增0.5kb的靶标。分子量标准为 GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder

由于其融合蛋白技术和独特的缓冲液配方,Phusion Plus DNA聚合酶对来自植物(如木聚糖)、土壤(如腐植酸)和血液(如血红素)的抑制剂表现出更高的耐受性。

显示不同 DNA 聚合酶对酶抑制剂耐受性的凝胶图像
图7.Phusion Plus DNA聚合酶的高抑制剂耐受力。使用不同的DNA聚合酶,按照厂商推荐方案从50 ng 人gDNA中扩增2 kb靶标。反应组分包括:1-无抑制剂;2-腐植酸(0.5 μg/mL);3-血红素(2.5 μM);4-木聚糖(250 μg/mL)。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder

Phusion Plus DNA聚合酶包装中配有Phuson GC Enhancer,以更高效的扩增GC含量>65%的序列。

五个富含GC靶标的PCR凝胶图像

图8.使用Phusion Plus DNA聚合酶高效扩增高GC含量模板。使用不同的DNA聚合酶,按照厂商推荐方案从50 ng 人类gDNA中扩增5个高GC含量(含量如图示)的靶标(0.78 kb,0.74 kb,0.72 kb,0.66 kb和0.55 kb)。分子量标准为 ZipRuler Express Ladder DNA 2

Phusion Plus DNA聚合酶具有高持续合成能力,可扩增长片段DNA——最大10kb的人类gDNA和20 kb的lambda DNA。 延伸速度为15-30 秒/kb, 扩增时间非常短。

9kb和18k靶标的PCR凝胶图像

图 9.Phusion Plus DNA聚合酶的扩增范围。使用Phusion Plus DNA聚合酶成功扩增2个 不同浓度的靶标:9.1 kb的人类gDNA靶标(左图)和18kb的lambda DNA靶标(右图)。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder

比较Phusion Plus,Phusion和Phusion热启动II DNA聚合酶

以下表格为Phusion Plus DNA聚合酶和其前一代产品的技术参数比较,其提升的性能用蓝色背景表示。

 Phusion Plus 高保真DNA 聚合酶Phusion高保真DNA聚合酶Phusion 热启动II DNA聚合酶

序列保真度

(vs. Taq酶)

>100x52x52x
使用Tm计算器不需要需要需要
热启动修饰,特异性高
PCR灵敏性+++++++

扩增子长度

(人类gDNA/lambda DNA)

长达10 kb / 20 kb长达7.5 kb / 20 kb长达7.5 kb / 20 kb

高GC含量模板扩增

+++++++
抑制剂耐受性+++++++
单酶
预混液

*包含绿色示踪染料和密度试剂, PCR产物可直接凝胶上样
Phusion Plus和Phusion DNA聚合酶的性能比较

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