Search Thermo Fisher Scientific
作为具有校正功能的超高保真度的聚合酶,使用Phusion Plus DNA聚合酶产生的扩增子错误率非常低,让您对PCR序列准确性充满信心。
图 1.不同品牌高保真酶相对于Taq DNA聚合酶的保真度。通过二代测序分子标签法确定错误率,随后均一化为相对于Taq DNA聚合酶的保真度倍数。
由于其反应缓冲液的独特配方,使用Phusion Plus DNA聚合酶无需通过退火温度(Tm)计算器来确定退火温度。无需考虑引物的Tm值,所有的靶标都可以使用60℃的通用退火温度来进行扩增。此外,如果您希望沿用原本的Phusion方案,这种酶也可以在计算的退火温度下使用。
图 2.在两种退火温度条件下进行PCR扩增。从50ng人类基因组DNA(gDNA)中扩增12个不同退火温度(在每一列上方已标示)的靶标。采用60°C通用退火温度(左图)或使用Tm计算器计算的退火温度(右图)。分子量标准为Thermo Scientific ZipRuler Express Ladder DNA 2。
Phusion Plus DNA聚合酶的通用退火功能允许使用通用循环方案, 帮助您同时扩增不同长度的PCR靶标并节省时间。不同长度的靶标均使用同一退火温度(60°C)和基于最长扩增子的延伸时间——即在同一模块中同时扩增多个靶标,而不会影响PCR产量和特异性。
图 3.使用Phusion Plus DNA聚合酶可同时扩增多个PCR靶标。从人类基因组DNA中扩增5个不同长度的靶标,对所有靶标采用基于最长扩增子的延伸时间(最长7.5kb ,需3分45秒)的通用循环方案(左图),或针对不同靶标采用不同的延伸时间方案(0.3 kb 9秒,0.7 kb 21秒,2 kb 60秒,3.9 kb 2分钟,7.5 kb 3分45秒)进行扩增(右图)。分子量标准为ZipRuler Express DNA Ladder 2。
使用Phusion Plus DNA聚合酶可获得更高的PCR特异性和产量。 该酶采用亲体分子热启动修饰,有助于抑制在PCR体系配制时酶的活性,防止非特异性扩增和引物降解。
Phusion Plus DNA聚合酶通过严格的热启动修饰技术抑制其在室温下的活性,可在室温下提供长达24小时的反应体系的稳定性,适用于高通量自动化或移液系统
图5.Phusion Plus DNA聚合酶的室温稳定性。 使用不同品牌的热启动DNA聚合酶,按照厂家推荐方案从50ng 人类基因组DNA中扩增0.5kb靶标。 。配制好的PCR反应体系立即(0小时)放入PCR仪,或在室温放置24小时后再放PCR仪运行(24 hr)。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
Phusion Plus DNA聚合酶可以检测低至0.08 ng的人基因组DNA。
由于其融合蛋白技术和独特的缓冲液配方,Phusion Plus DNA聚合酶对来自植物(如木聚糖)、土壤(如腐植酸)和血液(如血红素)的抑制剂表现出更高的耐受性。
Phusion Plus DNA聚合酶包装中配有Phuson GC Enhancer,以更高效的扩增GC含量>65%的序列。
图8.使用Phusion Plus DNA聚合酶高效扩增高GC含量模板。使用不同的DNA聚合酶,按照厂商推荐方案从50 ng 人类gDNA中扩增5个高GC含量(含量如图示)的靶标(0.78 kb,0.74 kb,0.72 kb,0.66 kb和0.55 kb)。分子量标准为 ZipRuler Express Ladder DNA 2。
Phusion Plus DNA聚合酶具有高持续合成能力,可扩增长片段DNA——最大10kb的人类gDNA和20 kb的lambda DNA。 延伸速度为15-30 秒/kb, 扩增时间非常短。
图 9.Phusion Plus DNA聚合酶的扩增范围。使用Phusion Plus DNA聚合酶成功扩增2个 不同浓度的靶标:9.1 kb的人类gDNA靶标(左图)和18kb的lambda DNA靶标(右图)。分子量标准为GeneRuler 1 kb Plus DNA Ladder。
以下表格为Phusion Plus DNA聚合酶和其前一代产品的技术参数比较,其提升的性能用蓝色背景表示。
Phusion Plus 高保真DNA 聚合酶 | Phusion高保真DNA聚合酶 | Phusion 热启动II DNA聚合酶 | |
---|---|---|---|
序列保真度 (vs. Taq酶) | >100x | 52x | 52x |
使用Tm计算器 | 不需要 | 需要 | 需要 |
热启动修饰,特异性高 | 是 | 否 | 是 |
PCR灵敏性 | +++ | ++ | ++ |
扩增子长度 (人类gDNA/lambda DNA) | 长达10 kb / 20 kb | 长达7.5 kb / 20 kb | 长达7.5 kb / 20 kb |
高GC含量模板扩增 | +++ | ++ | ++ |
抑制剂耐受性 | +++ | ++ | ++ |
单酶 | |||
预混液 |
*包含绿色示踪染料和密度试剂, PCR产物可直接凝胶上样
Phusion Plus和Phusion DNA聚合酶的性能比较
想了解更多的Phusion产品形式,请访问选择表格
订购原Phusion酶和相关产品,请访问订购表格
仅供科研使用,不可用于诊断目的。