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黄曲霉毒素作为一种霉菌毒素,是粮食在未能及时晒干及储藏不当时产生霉菌的代谢产物,广泛存在。因其具有很强的毒性和致癌性,在国家食品标准、饲料标准中都对此设置了严格的规定。黄曲霉毒素M1属于真菌毒素,是黄曲霉素B1在动物体内羟基化代谢产物,具有剧毒性和强致癌性,由于其可能诱发肝癌,早在1993年就被世界卫生组织癌症研究机构列为一类致癌物。由于黄曲霉毒素具有含量低、结构相似的特点,这就要求检测方法灵敏度高,特异性强,集分离与检测为一体,方可达到这样的要求。本文采用高效液相色谱法对黄曲霉毒素进行分析,克服了黄曲霉毒素含量低的问题,得到了高灵敏度的结果。

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样品前处理

称取奶粉 5g,置 100mL 量瓶中,加 50℃温水 20mL 使溶解,振荡 30S;加入氯化钠 2g,振荡使溶解;继续加入 50mL 乙腈,振荡 30S,混匀后加乙腈至刻度,涡旋振荡使混匀。过滤,取滤液 40mL, 40℃氮气流下挥至近干。残留物加入 20mL10%乙腈使溶解,过免疫亲和柱,待样品完全通过免疫亲和柱之后,加 10mL 水清洗亲和柱。最后用乙腈 2mL洗脱,收集洗脱液 1.5mL,氮气吹干。加入 200uL 正己烷和 200uL 三氟乙酸,振荡混匀,在 40℃下反应 10min,取出,氮气流下挥干,加 10%乙腈 0.5mL,振荡 10 s。

实验条件

仪器型号:

Dionex Ultimate 3000 系列

泵: LPG-3400SD

自动进样器: WPS-3000SL

柱温箱: TCC-3000RS

检测器: FLD

色谱软件: Chromeleon Chromatography Data System

检测器类型、工作参数及 S/N 号:

荧光检测器, FLD-3400

ResponseTime = 1

FLD_FlowCell.Temperature.Nominal = 35.00 [℃]

FLD_FlowCell.ReadyTempDelta = 1.00 [℃]

BaselineBehavior = Append

Data_Collection_Rate.Nominal = 10.00 [Hz]

Emission_1.ExWavelength = 365.0 [nm]

Emission_1.EmWavelength = 435.0 [nm]

Emission_1.Sensitivity = 6

Emission_1.PMT =Auto

Emission_1.FilterWheel = Auto

色谱条件:

色谱柱: Thermo Scientific Hypersil GOLD C18,5μm,100×2.1mm   货号  25005-102130

流动相: 

进样量: 20μL

流速: 800μL/min

柱温: 25℃

实验谱图


图1样品测定色谱图(上: 1ppb 加标色谱图;下:空白样品色谱图)

结论

本文使用Thermo Scientific Hypersil GOLD C18,5μm,100×2.1mm色谱柱,采取柱 前衍生法与荧光检测器结合,对芝麻中黄曲霉毒素 B1, B2, G1, G2, M1进行分析,得到了良好的峰型和分离,以及高灵敏度的检测结果。

(文中部分图片来自网络)