HPAE-PAD离子色谱法分析碳水化合物

糖类化合物分析

碳水化合物是细胞生长和产品合成所必需的碳源，通常在食品和饮料以及生物制药 / 制药行业中进行分析。快速，准确地测定碳水化合物对于食品和饮料质量控制，营养标签以及可能的掺假至关重要。在生物制药行业中，糖蛋白表征通常涉及碳水化合物分析，而蛋白糖基化的变化通常在癌症研究中进行研究，以确定潜在的生物标记物。目前市场上已有 30 多种经批准的基于糖蛋白的生物药物，而且这一数量正在迅速增加。

美国 FDA 和欧洲药品管理局增加了对生物制药生产商的压力，以展示对基于糖蛋白的药物中的糖基化的理解，测量和控制的令人满意的方案。由于碳水化合物具有高极性，结构特性相似以及不存在合适的发色团，糖类化合物难以进行分析。通过使用 HPAE-PAD ，制造商可以轻松高效地分离和定量非衍生化碳水化合物。

什么是HPAE-PAD？

Block diagram of a Reagent-Free HPAE-PAD system with electrochemical detection

带电化学检测的免试剂 HPAE-PAD 系统的结构图。

HPAE-PAD —高效阴离子交换色谱法和脉冲电流型检测—是一种专门为碳水化合物分离和检测而开发的技术。与其他碳水化合物分析技术不同， HPAE-PAD 可对非衍生碳水化合物进行高选择性分离和定量。

高性能阴离子交换 (HPAE-PAD) 色谱分析用于在高 pH 条件下分离电离的分析物，例如碳水化合物 (pKas 通常介于 12-13 之间)。这是通过氢氧化物淋洗液和强阴离子交换固定相实现的。这些色谱柱的无孔树脂具有携带阴离子交换官能团的小型阴离子交换微珠。这些小阴离子交换微珠以静电方式连接到较大的阳离子交换树脂颗粒上。树脂的无孔特性可尽可能减少条带展宽，并可高效分离包括分支低聚糖在内的各种碳水化合物。

脉冲电流型检测 (PAD) 系统允许检测未衍生化的分析物。一系列被称为波形的电位会导致电极表面的氧化和还原条件。这导致工作电极表面发生氧化分析物，该电极自动清洁并准备电极进行检测。检测对电活性物质具有灵敏度和高度选择性，因为脉冲安培检测仅检测包含在所用检测电压下氧化的官能团的化合物。使用优化的脉冲设置， PAD 可以制备成对碳水化合物具有高度特异性。许多潜在干扰物质无法氧化或还原，因此不会被检测到。此外，基质中的中性或阳离子样品组分在色谱柱的空体积中或接近洗脱。因此，即使中性或阳离子样品组分氧化，目标碳水化合物组分也不会受到影响。