食品和相关样品中沙门氏菌的检测

以下为 ISO6579 第 1 部分的摘要：在食品（包括牛奶和奶制品）、动物饲料、动物粪便和初级生产阶段的环境样品中检测沙门氏菌属。

ISO 6579:2017 第 1 部分工作流程概述

25 g + 225 mL缓冲蛋白胨水 (BPW)
1 份拭子样品 + 10 mL BPW
1 份海绵涂抹样品 + 100 mL BPW
1 份擦拭样品 + 225 mL BPW

于 36±2°C 下培养 18±2 小时

根据 ISO 16140-第 2 部分:2016 方法验证的 SureTect 沙门氏菌属 PCR 检测工作流程概述

环境样品     • 25 g + 225 mL BPW • 1 份拭子样品 + 10 mL BPW • 1 份海绵涂抹样品 + 100 mL BPW • 1 份擦拭样品 + 225 mL BPW 于 37±1°C 下培养 20-24 小时	可可和巧克力产品   • 符合 ISO 6887-4:2017 标准的富集肉汤 于 36±2°C 下培养 20-28 小时   • 预热 BPW 于 36±2°C 下培养 22-30 小时	生牛肉     25 g + 225 mL 预热 BPW 于 41.5±1°C 下培养 9-24 小时	多种食物 *     • 25 g + 225 mL BPW + 12 mg/L 新生霉素 于 37±1°C 下培养 20-24 小时   • 25 g + 225 mL ONE 肉汤（沙门氏菌） + 12 mg/L 新生霉素 于 37±1°C 下培养 20-24 小时   * 包括肉类、鱼类、乳制品、海鲜、水果和蔬菜	婴儿奶粉 (10g)   25 g + 225 mL BPW 于 37±1°C 下培养 16-20 小时	奶粉产品   最多 375 g，用 BPW + 6 mg/L 万古霉素按照 1:10 进行稀释 于 37±1°C 下培养 18-22 小时

第 1 天

  将 10 μL SureTect 蛋白酶 K 加入到每个所需的 SureTect 裂解管（已预先装有 裂解试剂 1）中。
  向 SureTect 裂解管中加入 10 μL 富集样品。对于 7500 Fast，向 SureTect 裂解管中加入 10 μL 无菌不含核酸酶水作为阴性对照。   将 SureTect 裂解管在 Applied Biosystems SimpliAmp 热循环仪 中于 37±1°C 下孵育 10 分钟，然后于 95±1°C 下孵育 5 分钟，之后于 10±1°C 下孵育 2 分钟。   用 BPW 对可可和巧克力产品的裂解物按照 1:5 进行稀释以避免 PCR 抑制，并将 20 μL 裂解物转移到 SureTect PCR 管中。

将 SureTect PCR 管加载到 Applied Biosystems 7500 Fast 或 Applied Biosystems QuantStudio 5 PCR 仪上。开始运行 PCR 并在运行结束时审查结果。

（报告阴性结果）

第 2 天

对于可可或巧克力产品样品，将 10 μL 富集肉汤涂布到 Brilliance™ 沙门氏菌琼脂 或 XLD 上，用以确认 PCR 阳性结果。 对于具有高背景微生物群的样品，首先在 RVS 肉汤中传代培养（于 41.5°C±1°C 下培养 24h±3h）。   采用 Oxoid™ 沙门氏菌乳胶试剂盒、 MicroBact™GNB24E 或 ISO 6579-1:2017 方法中说明的确证性检测或经 ISO 16140-part 6:2019 验证的确证性检测来确认推测性阳性菌落。

根据 ISO16140-part2:2016 标准验证的 RapidFinder 沙门氏菌属和沙门氏菌血清型（鼠伤寒和肠炎）的多重 PCR 检测工作流程概述。

生猪肉和即食猪肉和家禽样品： 在室温下向 225 ml 添加有 12mg/L 新生霉素的 BPW（ISO-肉蛋白胨）中加入 25g 样品。 于 41.5±1°C 下培养 16±2 小时	生产环境样品： 向 225 ml BPW（ISO-肉蛋白胨）中加入 25g 生产环境样品。将 1 份拭子样品加入 10 ml BPW（ISO-肉蛋白胨）中。将 1 份海绵涂抹样品加入 100 ml BPW（ISO-肉蛋白胨）中。将 1 次擦拭样品加入 225 ml BPW（ISO-肉蛋白胨）中。 于 41.5±1°C 下培养 16±2 小时

将约 1.5mL 富集物转移至无菌密封管中。

首先，将 10 μL 蛋白酶 K 加入到所需的每支裂解管中。

其次，向裂解管中加入 10 μL 富集物。

将 SureTect 裂解管在 Applied Biosystems SimpliAmp 热循环仪 中于 37±1°C 下孵育 10 分钟，然后于 95±1°C 下孵育 5 分钟，之后于 10±1°C 下孵育 2 分钟。

将 20 μL 转移至 RapidFinder PCR 管。

7500 Fast PCR 仪		QuantStudio 5 PCR 仪
将样品加载到 AppliedBiosystems 7500 快速食品安全 PCR 仪上，加入含有无核酸酶无菌水的阴性对照管（预装裂解试剂 1）并开始运行 PCR，在运行结束时审查结果（约 45 分钟）	或	加载到 Applied Biosystems QuantStudio 5 食品安全 PCR 仪上并开始运行 PCR，在运行结束时审查结果（约 50 分钟）

报告 PCR 阴性结果，并在 Brilliance™ 沙门氏菌琼脂上培养以确认 PCR 阳性结果。 

采用 ISO6579-1:2017 中说明的生化和血清学程序或经 ISO16140-part6:2019 验证的确证性检测来确认在 Brilliance 沙门氏菌琼脂上生长的菌落。

根据 ISO 16140-part 2:2016 标准验证的 Thermo Scientific RapidFinder 沙门氏菌属和沙门氏菌血清型（鼠伤寒和肠炎）的多重 PCR 检测工作流程概述

初级生产样品 (PPS)：
向 225 mL 添加了碘碘化物的连四硫酸盐 (Hajna) 肉汤（TT 肉汤）中加入 25 g 样品

于 37±1°C 下培养 18±2 小时

将 1 mL 富集样品转移至 9 mL BPW 中

于 37±1°C 下培养 5±1 小时

将 500 μL 二次富集物加载到 KingFisher Flex 仪器上，

使裂解物在室温下冷却至少 2 分钟，然后转移 20 μL 至 RapidFinder 沙门氏菌 PCR 管中

7500 Fast PCR 仪	或	QuantStudio 5 PCR 仪
将 PCR 管加载到 Applied Biosystems 7500 快速食品安全仪上，加入含有无核酸酶无菌水的阴性对照管并开始运行 PCR，在运行结束时审查结果（约 45 分钟）		将 PCR 管加载到 Applied Biosystems QuantStudio 5 食品安全 PCR 仪上并开始运行 PCR，在运行结束时审查结果（约 50 分钟）

报告 PCR 阴性结果，并在 Brilliance™ 沙门氏菌琼脂上培养以确认 PCR 阳性结果。

采用 Oxoid 沙门氏菌乳胶试验（沙门氏菌属）或者 ISO 6579-1:2017 中说明的生化和血清学程序（肠炎沙门氏菌和伤寒沙门氏菌）或经 ISO 16140-part 6:2019 验证的确证性检测来确认在 Brilliance沙门氏菌琼脂上生长的菌落。

根据 AFNOR 认证的 NF 验证的 Thermo Scientific 沙门氏菌 Precis 方法的工作流程概述

接种到 Brilliance 沙门氏菌琼脂上

于 37±1 °C 下培养 24±2 小时

用 Oxoid 沙门氏菌乳胶试验确认典型菌落是否为沙门氏菌

或

ISO 6579-1:2017 确证性检测或经 ISO 16140-part 6:2019 验证的确证性检测。

* 含或不含益生菌