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问:GeneArt 基因组切割检测试剂盒是否可用于代替测序?
问:GeneArt 基因组切割检测试剂盒或选择试剂盒是否可减少测序/筛选工作量?
问:为何同时使用 OFP 和 CD4?这两者当中是否有一个效果较好?
答:否,确定基因组修饰的真实百分比和性质的唯一可靠方法是通过测序验证
答 1:GeneArt 基因组切割检测试剂盒。是的,基因组切割测定 (GCD) 分析提供了可靠的基因组修饰效率估计值,针对分离和分析必需克隆数给予统计指导,以获得所需突变。此外,GCD 测定与 Sanger 测序和 Ion Personal Genome Machine (PGM) 测序兼容。
答 2:GeneArt 基因组切割选择试剂盒。是的,替代性报告载体包含富集功能,可通过基因修饰进行细胞富集。尽管 CD4 和橙色荧光蛋白 (OFP) 的表达并不能保证相应的基因组修饰,但其极大地增加了回收核酸酶修饰细胞的可能性。
答:正如 GCD 分析所证实的,我们已观察到细胞经基因修饰后富集了多达 30 倍。这可有效减少筛选所需的克隆数。
答:是的,可能会有背景干扰,因为存在内源性突变和假消化产物的可能性。不过,引物已经过专门设计,可提供特定的独特切割产物,从而能够准确检测所需产物。
答:与任何基于荧光或染色的细胞检测一样,自发荧光和背景染色是可能存在的背景干扰,且必须采用适当的对照品来解释和消除这种潜在的背景干扰。正因如此,载体的设计和产品要求均旨在使阳性荧光读数可以与任何背景明显区分开来。
答:OFP 和 CD4 功能被添加到载体中,从而为客户提供使用所需富集方法的灵活性。通常而言,微珠富集比细胞分选更温和且成本更低,但分选通常可满足更严格的富集要求。此外,单个细胞系在荧光蛋白和膜蛋白表达方面差异显著。这两种功能提供了多功能性。