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还记得活跃在“Ask TaqMan”系列视频里热情洋溢的专家Doug吗？更炫酷、更全面的实时荧光定量PCR系列视频现全新上线！干货满满的沉浸式教学体验，将复杂的qPCR技术一一拆解，扫除您在qPCR应用中的问题和困惑。
赛默飞将陆续推出从术语说明到高阶应用的32集“Taq Talk”系列教学视频，其中精心收录了最常见的qPCR问题和实验挑战，请跟随知识渊博的赛默飞专家讲者，开启您的实时PCR大师之旅！
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Taq Talk视频系列
第一期 了解实时PCR术语
“RT”是“Real time”的意思吗？Rn是什么？应该选择一步法还是两步法试剂？——在全新登场的第一期课程中，将由Darlene为我们开篇讲解荧光定量PCR中常见术语和缩写词汇。
第二期 实时PCR反应的三个阶段及其重要性
一起get实时PCR反应的三个阶段及其重要性，以及哪个阶段更能代表初始模板的量，原因又是什么？观看视频，跟Rachel一起学习相关内容。
第三期 实时PCR中的Ct值
Ct值还有什么延伸应用？同一个引物/探针检测体系，是否有可能产生不同的Ct值？观看视频，跟Aaron一起学习实时PCR中最常提及、最重要的中间数据：Ct值。
第四期 TaqMan™检测的工作原理
基于TaqMan™探针法的qPCR检测可提供比染料法更好的灵敏度和特异性，观看视频，跟Byron一起学习TaqMan™检测的工作原理。
第五期 qPCR预混液的选择
在您日常的实验中，选择一款正确的预混液将使整个qPCR实验优化过程事半功倍。市面上qPCR预混液品牌和产品层出不穷，种类繁多，我们应该如何选择适合自己应用和检测的预混液，从而提高检测准确率和效能呢？观看视频，跟Byron一起学习什么是实时PCR预混液，您应该选择哪一种？
第六期 TaqMan检测设计小贴士
Applied Biosystems™ TaqMan® Assay系列产品为基础科研和转化研究用户提供完整qPCR解决方案，保障优良的扩增效率和检测表现，观看视频，跟Darlene一起学习TaqMan检测设计小贴士。
第七期 如何为qPCR SNP基因分型检测设计选择序列
在将目标序列提交给设计工具之前，我们需要对其做些什么？观看视频，跟Darlene一起学习如何为qPCR SNP基因分型检测设计选择序列。
第八期 如何评价检测中的PCR效率
扩增效率对实时荧光定量PCR数据的准确度极为重要，任何效率偏差均可能导致错误的结果。本期TaqTalk带您学习如何准确评估qPCR反应的扩增效率。观看视频，跟Aaron一起学习相关内容吧！
第九期 什么是适合您的 qPCR 实验的逆转录方法
在进行针对RNA靶标的基因分析研究时，我们可从便捷性、灵敏度和Assay设计几个方面选择一步法或两步法qRT-PCR，点击视频，观看Byron带来的更多关于逆转录方法选择的讲解！
第十期 如何分析实时PCR数据？
选择用何种方法来分析实时PCR数据，取决于您想要了解的问题。点击视频，观看Rachel带来的更多关于qPCR数据分析的讲解。
第十一期 如何选择TaqMan探针标记？
对于定制TaqMan探针，我们为您提供三种可选的淬灭剂基团：MGB、QSY和TAMRA。但哪一种是您实验的最佳选择呢？点击视频，观看Darlene带来的更多关于TaqMan探针淬灭基团选择的讲解。
第十二期qPCR的基线
实时荧光定量 PCR 反应的基线是指在 PCR 的最初几个循环中 (一般为第 3 至 15 个循环) 的信号水平，此阶段的荧光信号变化极小。低水平的基线信号相当于反应的背景或“噪音” 。每个实时荧光定量 PCR 反应的基线应通过用户分析或扩增曲线自动分析，根据经验确定。应仔细设置基线，以准确确定阈值循环 (Ct) 。基线确定应考虑足够的循环数，消除扩增早期的背景，但应排除扩增信号开始超过背景的循环。当比较不同的实时荧光定量 PCR 反应或实验时，应采用同样的方法确定基线。点击视频，观看Byron带来的关于qPCR基线，及如何设置基线的详细讲解。
第十三期 qPCR的阈值及其设置位置
阈值 (超过背景值的荧光强度，用来确定 Ct) 是另一个由软件自动设置的参数，但也可手动调整。设置阈值可将相关扩增信号从背景中区分出来。实时荧光定量 PCR 仪软件通常将阈值自动设置为基线荧光值标准差的 10 倍。但阈值可设置在 PCR 指数期的任意点。点击视频，观看Byron带来的关于qPCR阈值及其设置位置的详细讲解。
第十四期 Ct值有效性判定小贴士
在2022年3月14日国家卫健委发布的《新型冠状病毒诊疗方案（试行第九版）》中的“解除隔离管理、出院标准以及解除隔离管理、出院后注意事项”条目里，特意强调针对核酸诊断结果认定调整。由之前的核酸检测阴性加入了Ct值≥35的标准。在非阴即阳的定性检测中，Ct值落在35-40之间，是最让检验人头疼一类的结果，如何判定Ct值是否有效，TaqTalk为您带来3个王牌小贴士。
第十五期 实时PCR的应用方向
您知道qPCR可被用于各种不同的研究领域吗？上最引人注目的是研究不同基因靶标的相对表达水平。研究人员比较两个或更多的样本，例如未处理和处理过的动物细胞，以确定目标基因的表达是否在变化以及变化的程度。使用Applied Biosystem实时PCR系统，结合定制或预设计的检测，研究人员可以观察到信使RNA或小分子RNA目标，包括特定的microRNA。想了解更多？请点击收看本期内容吧！
第十六期 获取高质量、可重复qPCR数据的王牌小贴士
qPCR 重复实验不好做？同一样本的Ct结果飘移不定，结论暧昧不清？有什么细节没注意到呢？有什么方法可以帮您得到高重复性、高质量的结果呢？有什么产品能助力我的研究/检测呢？在第十六期课程中，我们来学习获取高质量、可重复qPCR数据的王牌小贴士！
第十七期 实时PCR绝对定量
绝对定量是适合需要测定靶点实际拷贝数的研究人员采用的实时荧光定量 PCR 分析方法，同时也是最费力、最复杂的定量形式。此方法要求周密的计划和高度准确的标准曲线。是否有更简单的方法开展绝对定量？当然有！本期课程将为您介绍此方法
第十八期 qPCR在拷贝数变异分析中的应用
拷贝数变异 (CNV) 是指基因组 DNA 序列拷贝数与参照或标准序列不同的基因组修饰。基因组改变 (如插入、缺失、倒位或易位) 可以导致双等位基因或多等位基因CNV。CNV 与疾病易感性或抗病能力相关，因此它是一项十分重要的研究领域。目前存在许多 CNV 检测方法，包括原位荧光杂交 (FISH)、比较基因组杂交 (CGH)、阵列比较基因组杂交 (aCGH)、实时荧光定量 PCR (qPCR) 和下一代测序 (NGS)。
在拷贝数变异实验中，区分1拷贝基因与2拷贝基因是2倍差异，需要良好的精度。但区分2拷贝基因与3拷贝基因仅为1.5的差异，这需要更高的精度。对于此类型的实验，推荐采用专业的TaqMan CNVs Assay，配套专业的拷贝数变异分析预混液开展研究。
第十九期 qPCR在基因分型中的应用
在本期课程中，我们来学习如何分析qPCR SNP基因分型数据。
真核基因表达和单核苷酸多态 (Single nubleotide polymorphisms, SNP)需要通过检测终点荧光，确定SNP基因型。从而区分低至单核苷酸水平的差异。因此需要更高的检测特异性。
更多基因分型的讲解，请点击观看Aaron带来的Taqtalk讲解
第二十期 SYBR Green的熔解曲线
在本期课程中，我们来学习SYBR Green熔解曲线的相关知识。
SYBR™ Green扩增曲线的形状无法用于特异性评估。不论扩增的是靶点、非靶点还是混合物，曲线外观几乎相同。不同样本之间的非靶点扩增有所差别，每个SYBR™ Green反应都应完成至少一种类型的特异性评估。最常用的评估是熔解曲线分析。更多对基因分型的讲解，请点击观看Rachel带来的Taqtalk讲解。
第二十一期 如何优化SYBR Green qPCR检测
无论您是刚开始使用Applied Biosystems SYBR Green检测进行qPCR实验，或是在获得准确结果方面遇到困难，在本期课程中，您将找到答案。我们将介绍如何在使用SYBR Green检测时设计和优化qPCR实验。
第二十二期 如何优化多重qPCR实验及如何选择单重或多重反应
Applied Biosystems秉承近30年qPCR创新和生产制造经验，为您提供完整卓越的qPCR多重解决方案。我们专利不发光的3' QSY淬灭基团，媲美BHQ探针，保持灵敏度与特异性的同时帮助您充分提高多重检测应用PCR反应性能，给您的多重荧光定量PCR检测又添利器。在本期课程中，您将学习到什么是多重反应？多重反应具有哪些优势？以及多重反应应如何选择染料？
第二十三期 如何优化多重qPCR实验及如何选择单重或多重反应
Applied Biosystems秉承近30年qPCR创新和生产制造经验，为您提供完整卓越的qPCR多重解决方案。我们专利不发光的3' QSY淬灭基团，媲美BHQ探针，保持灵敏度与特异性的同时帮助您充分提高多重检测应用PCR反应性能，给您的多重荧光定量PCR检测又添利器。在本期课程中，您将学习到什么是多重反应？多重反应具有哪些优势？以及多重反应应如何选择染料？
第二十四期 microRNA定量数据归一化方法
您知道如何在microRNA荧光定量PCR实验中减少可能出现的定量误差吗？本期TaqTalk课程将为您解答有关microRNA定量数据归一化方法的问题
第二十五期 ROX参比染料在实时PCR中的应用
如果您曾经了解过实时PCR预混液市场，那么您有可能听说过ROX染料。什么是ROX染料？为什么在qPCR实验室将其用作参比染料？ROX染料无处不在的原因又是什么呢？请在本期Applied Biosystems Taq Talk中寻找答案吧。
第二十六期 实时荧光PCR需要稀释cDNA吗？
是否应该在运行实时荧光PCR之前稀释制备好的cDNA样品？为什么可能需要在反转录之前稀释RNA？在本期的Taq Talk视频中，我们将为您详细解答。
第二十七期 如何将实时荧光PCR的cDNA浓度归一化？
相对基因表达分析是最常见的实时荧光PCR应用之一，也是最常见的实时荧光PCR问题之一。由于每个cDNA都同时使用目标基因和内部对照品运行，是否有必要确保每个cDNA的浓度相同？让我们在本期的Taq Talk中一起探讨一下。
仅供科研使用，不可用于诊断目的。