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SuperSignal 化学发光底物
Thermo Scientific SuperSignal 化学发光 HRP 底物在蛋白质印迹应用中具有出色的性能，与其他基于鲁米诺的检测系统相比，具有更长的发光时间和更高的信号强度。
我们提供多种化学发光底物，每种底物都为满足特定的实验需求而研发。
Thermo Scientific 化学发光 HRP 底物
| Thermo Scientific 底物 | 主要优势 | 灵敏度 | 灵敏度 等级† | 信号持续时间（小时） | 推荐 抗体 稀释范围 |
|---|---|---|---|---|---|
| Pierce ECL | 入门级 ECL 底物 | 低皮克 | 1 | 1 至 2 | 1°: 0.2–10 μg/mL 2°: 0.07–1 μg/mL |
| Pierce ECL Plus | 兼容化学发光和荧光检测，可灵活选择检测模式 | 低皮克至中飞克 | 2 | 5 | 1°: 0.05–1 μg/mL 2°: 5–40 ng/mL |
| SuperSignal West Pico PLUS | 日常应用，稳定性好，灵敏度较入门级 ECL 更高 | 低皮克至高飞克 | 3 | 长达 24 | 1°: 0.2–1 μg/mL 2°: 10–50 ng/mL |
| SuperSignal West Dura | 信号持久，适合与成像系统一起使用 | 中飞克 | 3 | 24 | 1°: 0.02–1 μg/mL 2°: 4–20 ng/mL |
| SuperSignal West Femto | 在优化的系统中可获得理想的高灵敏度 | 低至中飞克 | 4 | 8 | 1°: 10–200 ng/mL 2°: 2–10 ng/mL |
| SuperSignal West Atto | 最高灵敏度，所需优化操作更少 | 低飞克至高阿克 | 5 | 6 | 1°: 0.2–1 μg/mL 2°: 4–10 ng/mL |
| † 灵敏度等级：1=最低，5=最高 | |||||
SuperSignal West Pico Plus 化学发光底物
与老款 SuperSignal West Pico 底物相比，升级版 Thermo Scientific SuperSignal West Pico PLUS 化学发光底物具有更好的灵敏度，更长的信号持续时间和更高的信号强度。理想的发光强度与出色的持续时间相结合，可实现多次曝光，轻松获得发表级别的印迹图像。
SuperSignal West Pico PLUS 底物的性能数据
其他化学发光底物与 SuperSignal West Pico PLUS 底物的比较。 使用 2 倍梯度稀释的 HEK293 或 HeLa 细胞裂解物进行指定目标的检测，从括号中所示的量开始。用 SuperSignal West Pico PLUS 底物或 Bio-Rad Clarity 底物孵育 5 分钟后，进行化学发光检测并比较底物的性能。参阅产品页了解详细信息。
满足低皮克到高飞克级检测所需
使用 SuperSignal West Pico PLUS 底物进行低皮克到高飞克级的检测。在电泳还原样品缓冲液中稀释 Turbo GFP-His-HA-Flag。泳道 1 包括 10 pg 纯化蛋白，1:1 制备梯度稀释液，蛋白上样量为 10 µL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜上，进行封闭后，将膜与 His 抗体一起孵育 （货号MA1-21315) ,一抗浓度1 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗一起孵育（货号32430），二抗浓度100 ng/mL。加入 SuperSignal West Pico PLUS 底物后（货号34577）进行印迹成像。
信号持久稳定
使用 SuperSignal West Pico PLUS 底物获得稳定的信号。 使用 2 倍梯度稀释的 HEK293 或 HeLa 细胞裂解物进行指定目标的检测，分别从 4 µg/孔或 20 µg/孔开始。SDS-PAGE 分离后，转印蛋白质到 PVDF 膜（货号88518）或硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。用溶解在 Pierce 20X TBS Tween 20 缓冲液中的 5％ 脱脂奶粉封闭膜，缓冲液（货号28360），使用 Invitrogen™ beta-Catenin（货号MA1-300），STAT3（货号MA1-13042），或 WNT1（货号MA5-15544）一抗孵育，然后使用山羊抗小鼠 IgG（H + L）二抗 HRP 二抗一起孵育（货号31430），二抗浓度 20 ng/mL。加入 SuperSignal West Pico PLUS 底物孵育 5分钟后，进行化学发光检测。加入底物后，在指定时间点下捕获胶片上的信号。
SuperSignal West Dura 化学发光底物
Thermo Scientific SuperSignal West Dura 持久型化学发光底物经过优化，可实现高灵敏度和长信号持续时间的检测，非常适用于基于冷 CCD 镜头的成像系统。与信号在 30-60 分钟之内下降到几乎无法检测到的底物不同，SuperSignal West Dura 化学发光底物产生的信号可稳定保持 24 小时，从而实现胶片或成像系统的多次曝光。
SuperSignal West Dura 底物的性能数据
SuperSignal West Dura 底物的信号持续时间更长。 在硝酸纤维素膜上检测 HeLa 细胞裂解物中的 Hsp86。在样品缓冲液中稀释 HeLa 细胞裂解物，然后在 95˚C 下加热 5 分钟。泳道 1 含有 10μg 总蛋白（总 10μL/孔）。制备四组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔（泳道 2-5）。蛋白转印到硝酸纤维素膜上后（货号88024），进行印迹封闭（货号37542），用兔抗 Hsp 86 抗体（货号PA3-013）孵育，然后用山羊抗兔 IgG HRP 二抗（货号31460）孵育，二抗浓度为 6.6 ng/mL。最后，根据产品说明书分别加入 SuperSignal West Dura 底物（货号 34076）或 Amersham™ ECL™ Prime 底物（GE Healthcare，货号RPN2232）。在底物孵育后的各个时间点，使用 CCD 成像系统对两个印迹进行成像。（在每个时间点对两个印迹使用相同的成像曝光参数。）
中飞克级灵敏检测
使用 SuperSignal West Dura 底物实现中飞克检测。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 Turbo GFP-His-HA-FLAG。 泳道 1 包括 1,000 fg 的 Turbo GFP。制备七组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到 PVDF 膜（货号88518）上，然后使用 SuperBlock T20（TBS）封闭缓冲液（货号37536）封闭膜。膜与生物素化的 His 抗体 （货号MA1-21315-BTIN）一起孵育，一抗浓度为 1 μg/mL ，然后与 Invitrogen Streptavidin, HRP 二抗（货号21126）一起孵育，二抗稀释度为1：50,000。加入 SuperSignal West Dura 底物（货号34076）后检测印迹。
更高的灵敏度和更长的信号持续时间
使用 SuperSignal West Dura 底物获得更高的灵敏度和更长的信号持续时间。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 A431 细胞裂解液。泳道 1 包含 5 µg 的 A431 裂解液。制备五组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。使用含 5％ 牛奶的 TBST 缓冲液封闭膜。将膜与 β-Catenin 抗体（货号MA1-300) 一起孵育, 一抗浓度为 0.3 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）一起孵育，二抗浓度为20 ng/mL。根据每个制造商的说明书，加入 SuperSignal West Dura 底物（货号34076），Clarity™ Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories, Inc.）或 Immobilon™ Western Chemiluminescent HRP 底物（EMD Millipore Corp.）后检测印迹。在 myECL 成像仪上同时采集 30 秒曝光的印迹结果，成像仪设置为：黑色= 65,296，白色= 65,535，gamma = 1.0。
SuperSignal West Femto 化学发光底物
Thermo Scientific SuperSignal West Femto 超敏化学发光底物可实现低飞克级的蛋白质印迹检测。当与优化的抗体浓度和封闭缓冲液结合使用时，SuperSignal West Femto 底物能够检测到低丰度目标蛋白，即使目标蛋白丰度太低而无法用入门级 ECL 底物观察到。
SuperSignal West Femto 底物的性能数据
使用 SuperSignal West Femto 底物进行真正的飞克级检测，。 将纯化的 IκB 从 100 到 1 fg 进行一系列稀释，然后在 4-20% 小型胶上进行电泳。将蛋白质转印到 PVDF 膜上，在室温下使用 StartingBlock 封闭缓冲液封闭 1 小时。使用1:1,000 稀释的兔抗 IκBα（1 mg/mL），4°C 下过夜孵育，然后在室温下，使用 1:200,000 稀释的 HRP 山羊抗兔 lgG（1 mg/mL）二抗孵育 1 小时。将该膜在 Thermo Scientific CL-XPosure 胶片下曝光 1 分钟。
高灵敏度和持久的信号
使用 SuperSignal West Femto 底物获得高灵敏度和长信号持续时间。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 NIH3T3 裂解液。泳道 1 包含 5 µg 的 NIH3T3 裂解液。制备五组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号 84731）。用含 5％ 牛奶的 TBST 缓冲液封闭膜。将膜与抗 Erk1 （货号MA1-13041) 一起孵育，一抗浓度为 0.2 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）一起孵育，二抗浓度为5 ng/mL。根据每个制造商的说明书，加入 SuperSignal West Femto 底物（货号34096），Clarity™ Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories, Inc.）或 Luminata™ Forte Western HRP 底物（EMD Millipore Corp.）或 Immobilon™ Western 化学发光 HRP 底物（EMD Millipore Corp.）后检测印迹。印迹同时曝光两分钟，在一张8 x 10 英寸的 CL-XPosure 胶片（货号34091）上进行采集。
节省你的抗体
SuperSignal West Femto 底物 可让你在使用更少抗体的同时获得更多信息。 A431 细胞裂解液于电泳还原样品缓冲液中依次稀释为 5、2.5、1.25、0.625、0.3125 和 0.15625 µg/孔，蛋白上样量为 10 µL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。将膜用 TBST 中的 5% 牛奶封闭，并切成三个膜条以优化抗体稀释度。将膜与 β-连环蛋白（货号MA1-300) 一起孵育，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号31460）在适当稀释比下一起孵育。加入 SuperSignal West Femto 底物（货号34095）后检测印迹。在 CL-XPosure 胶片，8 x 10 英寸（货号34091）和 myECL 成像仪（货号62236）上采集10秒曝光的结果。将 myECL 成像仪的条带图进行反转和对比（黑色=62,000，白色=65,535，gamma=1.0）。
SuperSignal West Atto 极敏化学发光底物
SuperSignal West Atto 极敏化学发光底物是一种超灵敏的增强型化学发光（ECL）底物，可在辣根过氧化物酶（HRP）的蛋白印迹分析中实现高阿克（ag）级水平的蛋白质检测。与其他市售超敏 HRP 底物相比，它具有更高的灵敏度和更好的信噪比。当检测极低丰度目标蛋白时，或进行需要最高灵敏度的珍贵样品检测时，Atto 底物是理想选择。
检测更低水平的蛋白
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图 1.其他化学发光底物与 SuperSignal West Atto 底物的比较。
- 使用多种 HRP 化学发光底物，SuperSignal West Atto，Bio-Rad Clarity Max，Amersham ECL Select，Millipore Immobiolon Western，Bio-Rad Clarity 和入门级 ECL 进行 HeLa 裂解物中的 Akt（pan）检测。印迹使用 Akt(pan) 单克隆抗体（货号Ma-5-14916）孵育，然后使用 HRP 标记山羊抗兔 lgG 二抗（货号32460）孵育。根据产品说明书，在印迹上加入不同底物。使用 iBright 成像系统采集图像。
- SuperSinal West Atto，Bio-Rad Clarity Max，Amersham ECL Select，Millipore Immobilon Western，Bio-Rad Clarity 和 ECL 的方框区域中的蛋白印迹条带的信噪比以柱状图在右侧展示。SuperSignal West Atto 底物在各蛋白上样量的检测中都具有最佳信噪比。在 0.625µg 之后，ECL 无法检测到超出背景噪声的信号。在 0.313µg 之后，Clarity 和 Immobilon 无法检测到超出背景噪声的信号。
节省珍贵样品用量
SuperSignal West Atto 底物可以检测非常稀的样品。 用 SuperSignal West Atto，Bio-Rad Clarity 或 Millipore Immobion 检测 HeLa 细胞裂解物中的 p23。SuperSignal West Atto 底物仅需要 1.25 µg 细胞裂解物即可获得清晰明了的信号，而使用其他两种底物想获得相同水平的信号强度则需要 20µg 细胞裂解物。
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图 2.SuperSignal West Atto 底物可以检测非常稀的样品。在 Novex Tris-甘氨酸预制胶上分离 HeLa 细胞裂解物，并使用 Power Blotter Select 转印膜组和 Power Blotter 转印系统将其转移到硝酸纤维素膜（货号PB3210）上。使用小鼠抗 P23（货号MA3-414）孵育印迹，然后使用山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）孵育。最后，按照产品说明书，每块印迹分别加入 SuperSignal West Atto 底物（货号 A38558），Clarity™Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories，Inc.）或 Immobilon Western 化学发光 HRP 底物（EMD Millipore Corp.）。使用 iBright FL 成像系统同时采集所有印迹结果。
Thermo Scientific 化学发光 HRP 底物
| Thermo Scientific 底物 | 主要优势 | 灵敏度 | 灵敏度 等级† | 信号持续时间（小时） | 推荐 抗体 稀释范围 |
|---|---|---|---|---|---|
| Pierce ECL | 入门级 ECL 底物 | 低皮克 | 1 | 1 至 2 | 1°: 0.2–10 μg/mL 2°: 0.07–1 μg/mL |
| Pierce ECL Plus | 兼容化学发光和荧光检测，可灵活选择检测模式 | 低皮克至中飞克 | 2 | 5 | 1°: 0.05–1 μg/mL 2°: 5–40 ng/mL |
| SuperSignal West Pico PLUS | 日常应用，稳定性好，灵敏度较入门级 ECL 更高 | 低皮克至高飞克 | 3 | 长达 24 | 1°: 0.2–1 μg/mL 2°: 10–50 ng/mL |
| SuperSignal West Dura | 信号持久，适合与成像系统一起使用 | 中飞克 | 3 | 24 | 1°: 0.02–1 μg/mL 2°: 4–20 ng/mL |
| SuperSignal West Femto | 在优化的系统中可获得理想的高灵敏度 | 低至中飞克 | 4 | 8 | 1°: 10–200 ng/mL 2°: 2–10 ng/mL |
| SuperSignal West Atto | 最高灵敏度，所需优化操作更少 | 低飞克至高阿克 | 5 | 6 | 1°: 0.2–1 μg/mL 2°: 4–10 ng/mL |
| † 灵敏度等级：1=最低，5=最高 | |||||
SuperSignal West Pico Plus 化学发光底物
与老款 SuperSignal West Pico 底物相比，升级版 Thermo Scientific SuperSignal West Pico PLUS 化学发光底物具有更好的灵敏度，更长的信号持续时间和更高的信号强度。理想的发光强度与出色的持续时间相结合，可实现多次曝光，轻松获得发表级别的印迹图像。
SuperSignal West Pico PLUS 底物的性能数据
其他化学发光底物与 SuperSignal West Pico PLUS 底物的比较。 使用 2 倍梯度稀释的 HEK293 或 HeLa 细胞裂解物进行指定目标的检测，从括号中所示的量开始。用 SuperSignal West Pico PLUS 底物或 Bio-Rad Clarity 底物孵育 5 分钟后，进行化学发光检测并比较底物的性能。参阅产品页了解详细信息。
满足低皮克到高飞克级检测所需
使用 SuperSignal West Pico PLUS 底物进行低皮克到高飞克级的检测。在电泳还原样品缓冲液中稀释 Turbo GFP-His-HA-Flag。泳道 1 包括 10 pg 纯化蛋白，1:1 制备梯度稀释液，蛋白上样量为 10 µL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜上，进行封闭后，将膜与 His 抗体一起孵育 （货号MA1-21315) ,一抗浓度1 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗一起孵育（货号32430），二抗浓度100 ng/mL。加入 SuperSignal West Pico PLUS 底物后（货号34577）进行印迹成像。
信号持久稳定
使用 SuperSignal West Pico PLUS 底物获得稳定的信号。 使用 2 倍梯度稀释的 HEK293 或 HeLa 细胞裂解物进行指定目标的检测，分别从 4 µg/孔或 20 µg/孔开始。SDS-PAGE 分离后，转印蛋白质到 PVDF 膜（货号88518）或硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。用溶解在 Pierce 20X TBS Tween 20 缓冲液中的 5％ 脱脂奶粉封闭膜，缓冲液（货号28360），使用 Invitrogen™ beta-Catenin（货号MA1-300），STAT3（货号MA1-13042），或 WNT1（货号MA5-15544）一抗孵育，然后使用山羊抗小鼠 IgG（H + L）二抗 HRP 二抗一起孵育（货号31430），二抗浓度 20 ng/mL。加入 SuperSignal West Pico PLUS 底物孵育 5分钟后，进行化学发光检测。加入底物后，在指定时间点下捕获胶片上的信号。
SuperSignal West Dura 化学发光底物
Thermo Scientific SuperSignal West Dura 持久型化学发光底物经过优化，可实现高灵敏度和长信号持续时间的检测，非常适用于基于冷 CCD 镜头的成像系统。与信号在 30-60 分钟之内下降到几乎无法检测到的底物不同，SuperSignal West Dura 化学发光底物产生的信号可稳定保持 24 小时，从而实现胶片或成像系统的多次曝光。
SuperSignal West Dura 底物的性能数据
SuperSignal West Dura 底物的信号持续时间更长。 在硝酸纤维素膜上检测 HeLa 细胞裂解物中的 Hsp86。在样品缓冲液中稀释 HeLa 细胞裂解物，然后在 95˚C 下加热 5 分钟。泳道 1 含有 10μg 总蛋白（总 10μL/孔）。制备四组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔（泳道 2-5）。蛋白转印到硝酸纤维素膜上后（货号88024），进行印迹封闭（货号37542），用兔抗 Hsp 86 抗体（货号PA3-013）孵育，然后用山羊抗兔 IgG HRP 二抗（货号31460）孵育，二抗浓度为 6.6 ng/mL。最后，根据产品说明书分别加入 SuperSignal West Dura 底物（货号 34076）或 Amersham™ ECL™ Prime 底物（GE Healthcare，货号RPN2232）。在底物孵育后的各个时间点，使用 CCD 成像系统对两个印迹进行成像。（在每个时间点对两个印迹使用相同的成像曝光参数。）
中飞克级灵敏检测
使用 SuperSignal West Dura 底物实现中飞克检测。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 Turbo GFP-His-HA-FLAG。 泳道 1 包括 1,000 fg 的 Turbo GFP。制备七组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到 PVDF 膜（货号88518）上，然后使用 SuperBlock T20（TBS）封闭缓冲液（货号37536）封闭膜。膜与生物素化的 His 抗体 （货号MA1-21315-BTIN）一起孵育，一抗浓度为 1 μg/mL ，然后与 Invitrogen Streptavidin, HRP 二抗（货号21126）一起孵育，二抗稀释度为1：50,000。加入 SuperSignal West Dura 底物（货号34076）后检测印迹。
更高的灵敏度和更长的信号持续时间
使用 SuperSignal West Dura 底物获得更高的灵敏度和更长的信号持续时间。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 A431 细胞裂解液。泳道 1 包含 5 µg 的 A431 裂解液。制备五组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。使用含 5％ 牛奶的 TBST 缓冲液封闭膜。将膜与 β-Catenin 抗体（货号MA1-300) 一起孵育, 一抗浓度为 0.3 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）一起孵育，二抗浓度为20 ng/mL。根据每个制造商的说明书，加入 SuperSignal West Dura 底物（货号34076），Clarity™ Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories, Inc.）或 Immobilon™ Western Chemiluminescent HRP 底物（EMD Millipore Corp.）后检测印迹。在 myECL 成像仪上同时采集 30 秒曝光的印迹结果，成像仪设置为：黑色= 65,296，白色= 65,535，gamma = 1.0。
SuperSignal West Femto 化学发光底物
Thermo Scientific SuperSignal West Femto 超敏化学发光底物可实现低飞克级的蛋白质印迹检测。当与优化的抗体浓度和封闭缓冲液结合使用时，SuperSignal West Femto 底物能够检测到低丰度目标蛋白，即使目标蛋白丰度太低而无法用入门级 ECL 底物观察到。
SuperSignal West Femto 底物的性能数据
使用 SuperSignal West Femto 底物进行真正的飞克级检测，。 将纯化的 IκB 从 100 到 1 fg 进行一系列稀释，然后在 4-20% 小型胶上进行电泳。将蛋白质转印到 PVDF 膜上，在室温下使用 StartingBlock 封闭缓冲液封闭 1 小时。使用1:1,000 稀释的兔抗 IκBα（1 mg/mL），4°C 下过夜孵育，然后在室温下，使用 1:200,000 稀释的 HRP 山羊抗兔 lgG（1 mg/mL）二抗孵育 1 小时。将该膜在 Thermo Scientific CL-XPosure 胶片下曝光 1 分钟。
高灵敏度和持久的信号
使用 SuperSignal West Femto 底物获得高灵敏度和长信号持续时间。 在电泳还原样品缓冲液中稀释 NIH3T3 裂解液。泳道 1 包含 5 µg 的 NIH3T3 裂解液。制备五组 1：1 梯度稀释液，蛋白上样量为 10μL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号 84731）。用含 5％ 牛奶的 TBST 缓冲液封闭膜。将膜与抗 Erk1 （货号MA1-13041) 一起孵育，一抗浓度为 0.2 µg/mL，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）一起孵育，二抗浓度为5 ng/mL。根据每个制造商的说明书，加入 SuperSignal West Femto 底物（货号34096），Clarity™ Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories, Inc.）或 Luminata™ Forte Western HRP 底物（EMD Millipore Corp.）或 Immobilon™ Western 化学发光 HRP 底物（EMD Millipore Corp.）后检测印迹。印迹同时曝光两分钟，在一张8 x 10 英寸的 CL-XPosure 胶片（货号34091）上进行采集。
节省你的抗体
SuperSignal West Femto 底物 可让你在使用更少抗体的同时获得更多信息。 A431 细胞裂解液于电泳还原样品缓冲液中依次稀释为 5、2.5、1.25、0.625、0.3125 和 0.15625 µg/孔，蛋白上样量为 10 µL/孔。电泳后，将蛋白质转印到硝酸纤维素膜（货号88018）上，使用 Pierce Power Blotter（货号22834）和 Pierce 1 步法转印缓冲液（货号84731）。将膜用 TBST 中的 5% 牛奶封闭，并切成三个膜条以优化抗体稀释度。将膜与 β-连环蛋白（货号MA1-300) 一起孵育，然后与山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号31460）在适当稀释比下一起孵育。加入 SuperSignal West Femto 底物（货号34095）后检测印迹。在 CL-XPosure 胶片，8 x 10 英寸（货号34091）和 myECL 成像仪（货号62236）上采集10秒曝光的结果。将 myECL 成像仪的条带图进行反转和对比（黑色=62,000，白色=65,535，gamma=1.0）。
SuperSignal West Atto 极敏化学发光底物
SuperSignal West Atto 极敏化学发光底物是一种超灵敏的增强型化学发光（ECL）底物，可在辣根过氧化物酶（HRP）的蛋白印迹分析中实现高阿克（ag）级水平的蛋白质检测。与其他市售超敏 HRP 底物相比，它具有更高的灵敏度和更好的信噪比。当检测极低丰度目标蛋白时，或进行需要最高灵敏度的珍贵样品检测时，Atto 底物是理想选择。
检测更低水平的蛋白
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图 1.其他化学发光底物与 SuperSignal West Atto 底物的比较。
- 使用多种 HRP 化学发光底物，SuperSignal West Atto，Bio-Rad Clarity Max，Amersham ECL Select，Millipore Immobiolon Western，Bio-Rad Clarity 和入门级 ECL 进行 HeLa 裂解物中的 Akt（pan）检测。印迹使用 Akt(pan) 单克隆抗体（货号Ma-5-14916）孵育，然后使用 HRP 标记山羊抗兔 lgG 二抗（货号32460）孵育。根据产品说明书，在印迹上加入不同底物。使用 iBright 成像系统采集图像。
- SuperSinal West Atto，Bio-Rad Clarity Max，Amersham ECL Select，Millipore Immobilon Western，Bio-Rad Clarity 和 ECL 的方框区域中的蛋白印迹条带的信噪比以柱状图在右侧展示。SuperSignal West Atto 底物在各蛋白上样量的检测中都具有最佳信噪比。在 0.625µg 之后，ECL 无法检测到超出背景噪声的信号。在 0.313µg 之后，Clarity 和 Immobilon 无法检测到超出背景噪声的信号。
节省珍贵样品用量
SuperSignal West Atto 底物可以检测非常稀的样品。 用 SuperSignal West Atto，Bio-Rad Clarity 或 Millipore Immobion 检测 HeLa 细胞裂解物中的 p23。SuperSignal West Atto 底物仅需要 1.25 µg 细胞裂解物即可获得清晰明了的信号，而使用其他两种底物想获得相同水平的信号强度则需要 20µg 细胞裂解物。
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图 2.SuperSignal West Atto 底物可以检测非常稀的样品。在 Novex Tris-甘氨酸预制胶上分离 HeLa 细胞裂解物，并使用 Power Blotter Select 转印膜组和 Power Blotter 转印系统将其转移到硝酸纤维素膜（货号PB3210）上。使用小鼠抗 P23（货号MA3-414）孵育印迹，然后使用山羊抗小鼠 HRP 二抗（货号32430）孵育。最后，按照产品说明书，每块印迹分别加入 SuperSignal West Atto 底物（货号 A38558），Clarity™Western ECL 印迹底物（Bio-Rad Laboratories，Inc.）或 Immobilon Western 化学发光 HRP 底物（EMD Millipore Corp.）。使用 iBright FL 成像系统同时采集所有印迹结果。
客户之声
"在我们的实验工作中，Atto 底物非常好用。之前我们有个蛋白一直无法检测出信号，直到用了 Atto 底物才检测出来！现在它是实验室中的主力。"
—Jackie Dillon 博士，高级研究员，Benson Hill, Inc.
仅供科研使用，不可用于诊断目的。