BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸用作 RNA 转染对照

BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸是一种荧光素标记的 dsRNA 低聚体，设计用于 RNAi 分析，有助于评估和优化 dsRNA 寡核苷酸通过阳离子脂质体介导的递送或电穿孔进入哺乳动物细胞。在 RNAi 研究中使用 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸具有以下优势：

• 与 Invitrogen 的 Stealth™ RNAi、标准未修饰 siRNA 或 Dicer 生成的纯化 siRNA 配合使用时具有良好的转染效率。
• 在每项 RNAi 实验中，均可提供较高、简单、基于荧光的转染效率。

BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸的特性

BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸具有以下特性：

• 是一种荧光素标记的双链 RNA 双链体，具有与标准 siRNA 相同的长度、电荷和构型。
• 含有化学修饰，与其他未修饰的荧光标记 RNA 相比，该化学修饰可增强稳定性并可在显著更长的时间段内对荧光信号进行评估。示例：在 HEK293 细胞中可检测到荧光信号的时间至少持续 72 小时。需要注意的是，荧光信号强度取决于转染效率和细胞生长速率。
• BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸序列与任何已知基因均不同源，可确保不会诱导因将寡核苷酸引入细胞而引起的非特异性细胞事件。
• 摄取时主要定位于细胞核 (1)。有关贴壁（图 A）和悬浮（图 B）细胞中荧光摄取的示例，请参见右图。

重要提示：BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸仅设计用作 siRNA 摄取评估工具，不提供有关 Stealth™ RNAi 或 siRNA 行为（包括其细胞定位、半衰期或稳定性）的任何信息。

BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸以溶于退火缓冲液的 20 µM 或 1 mM 储备液的形式提供。处理 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸储备液时，请遵循以下指导原则。

1. BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸对光敏感。将储备液避光储存在 -20°C 下。如果妥善储存，储备液可稳定储存至少 6 个月。
2. 使用时，在冰上或室温下解冻储备液。解冻后，将管置于冰上，直至使用。使用后，将储备液放回 -20°C 储存条件下。
3. 如果处理得当，储备液可以冷冻和解冻多次，而不会损失荧光信号。
4. 采取预防措施以确保储备液不会受到 RNase 污染。

           a. 所有操作均使用不含 RNase 的无菌移液器吸头和用品。
 
            b. 处理试剂和溶液时请佩戴手套。

您可将 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸（20 µM 或 1 mM 储备液）与适合向哺乳动物细胞递送 Stealth™ RNAi、siRNA 或 Dicer 生成的 siRNA 的任何阳离子脂质体转染试剂配合使用。转染 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸时，请遵循以下指导原则。
 
提示：   为高效转染多种哺乳动物细胞，我们建议使用由 Invitrogen 提供的 Lipofectamine 2000 试剂（货号 11668-027）

• BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸的用量取决于哺乳动物细胞的生长速率和转染效率。如果您是首次转染哺乳动物细胞系，我们建议评估几种脂质浓度，并将 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸的最终浓度从 10 nM 改为 200 nM，以确定用于获得强荧光信号的 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸的最适用量。注：对于检测的大多数细胞系（例如 HEK293、A549、HeLa），当使用 100 nM BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸进行转染时，我们可获得易于检测的荧光信号。
• 按照您所用转染试剂生产商建议的密度制备和接种哺乳动物细胞。
• 按照您所用转染试剂生产商的说明制备脂质-BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸复合物。请务必在临转染前稀释 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸（即请勿储存稀释的寡核苷酸）并加入适当的培养基中。我们建议将 BLOCK-iT™ 荧光寡核苷酸稀释至由 Invitrogen 提供的 Opti-MEM I 减血清培养基（货号 31985-062）中。
• 评估转染后 6 至 24 小时的荧光摄取。根据细胞的转染效率和生长速率，可在更长的时间点检测到荧光信号。

1. Fisher, T.L., Terhorst, T., Cao, X., and Wagner, R.W. (1993) Nuc.Acids Res.21, 3857-3865.


2. Ciccarone, V., Chu, Y., Schifferli, K., Pichet, J.-P., Hawley-Nelson, P., Evans, K., Roy, L., and Bennett, S. (1999) Focus 21, 54-55. ©2005 Invitrogen Corporation.保留所有权利。