Lipofectamine LTX® 试剂采用专有的无动物源性配方,用于将 DNA 转染到真核细胞中,且具有低细胞毒性。本参考文件提供了使用 Lipofectamine LTX® 试剂将质粒 DNA 转染到 HEK 293 人胚肾细胞(ATCC 货号 CRL-1573)中的推荐程序。
转染重要指南
使用 Lipofectamine® LTX 试剂将 DNA 转染到 HeLa S3 细胞中时,请遵循以下重要指南:
- 在转染时向培养基中加入 100 U/ml 青霉素/100 μg/ml 链霉素(货号 15140-122)不会导致 HeLa S3 细胞死亡。如果您希望在转染时使用其他较高浓度或其他抗生素,请充分检测实验条件。
- 在实验之间保持相同的接种条件。使用低传代细胞;在转染前确保细胞健康且活细胞比例大于 90%。
- 在存在或不存在血清的情况下,均可进行转染。检测无血清培养基与 Lipofectamine® LTX 试剂的相容性。
- 我们推荐在复合前使用 Opti-MEM® I 减血清培养基(货号 31985-062)稀释 DNA 和
- Lipofectamine® LTX 试剂。
- 请访问 www.lifetechnologies.com/transfection 或联系技术服务部门以获取其他专用转染方案(包括有关使用 PLUS™ 试剂和抗生素的细胞类型特定建议,以及基于载体的 RNAi 方案)。
- Lipofectamine® LTX 试剂适用于基于载体的 RNAi 实验。对于 siRNA 和 Stealth™ RNAi 转染,我们推荐使用 Lipofectamine® RNAiMAX(货号 13778-075)。请访问 www.lifetechnologies.com/RNAi 或联系技术服务部门以获取更多信息。
需要的材料
开始实验前请准备好以下试剂:
- 在补充以下物质的含 L-谷氨酰胺的 DMEM(货号 11965-084)中维持培养的 HeLa S3 细胞:0.1 mM MEM 非必需氨基酸溶液(货号 11140-050)和 10% 胎牛血清(货号 26140-079)。在 37°C 下含 5% CO2 的条件下培养细胞。
- 目标质粒 DNA(100 ng/μl 或更高)
- Lipofectamine® LTX 试剂(储存在 +4°C 下直至使用)
- Opti-MEM® I 减血清培养基
- 适当的组织培养板和用品
如要以不同组织培养规格转染 HeLa S3 细胞,请根据相对表面积,成比例地改变 Lipofectamine® LTX 试剂、DNA、细胞、培养基和 PLUS™ 试剂的用量,如下表所示(用量以每孔计)。
培养容器 | 表面 积/ 孔 | 铺板培养基体积 | 细胞数/孔 | 稀释 培养基 体积 | DNA | Lipofectamine® LTX 试剂 |
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96孔 | 0.3 cm2 | 100 μl | 8 x 103 | 20 μl | 50 ng | 0.1-0.25 μl |
48孔 | 1 cm2 | 200 μl | 2 x 104 | 40 μl | 100 ng | 0.2-0.5 μl |
24孔 | 2 cm2 | 500 μl | 4 x 104 | 100 μl | 250 ng | 0.5-1.25 μl |
12孔 | 4 cm2 | 1 ml | 8 x 104 | 200 μl | 500 ng | 1.0-2.5 μl |
6孔 | 10 cm2 | 2 ml | 2 x 105 | 500 μl | 1.25 μg | 2.5-6.25 μl |