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Lipofectamine® LTX 试剂是一种专有的无动物源性制剂,其细胞毒性较低,适用于将 DNA 转染到真核细胞中。本参考资料提供了使用 Lipofectamine® LTX 试剂(货号 15338-100)将质粒 DNA 转染到 LNCap 人前列腺上皮癌细胞(ATCC 货号 CRL-1740)中的推荐步骤。
转染重要指南
使用 Lipofectamine® LTX 试剂将 DNA 转染至 LNCap 细胞时,请遵循以下重要指南:
需要的材料
开始前请准备好以下试剂:
按照以下步骤将质粒 DNA 转染至24孔板中的 LNCap 细胞中(对于其他规格,请参见下文的扩大或缩小转染规模)。指定的所有数量和体积均以每个孔为基础。
要在不同规格的组织培养容器中转染 LNCap 细胞,应根据相对表面积按比例调整 Lipofectamine® LTX 试剂、DNA、细胞、培养基和 PLUS™ 试剂的用量,如表格所示(指定的量以每个孔为基础)。
培养容器 | 每孔 表 面积1 | 铺板培养基体积 | 细胞/孔 | 稀释 培养基 体积2 | DNA | Lipofectamine® LTX 试剂 | PLUS™ 试剂 |
---|---|---|---|---|---|---|---|
96孔 | 0.3 cm2 | 100 μL | 1.4×104 | 20 μL | 100 ng | 0.25-0.45 μL | 0.1 μL |
48孔 | 1 cm2 | 200 μL | 3.5×104 | 40 μL | 200 ng | 0.5-0.9 μL | 0.2 μL |
24孔 | 2 cm2 | 500 μL | 7×104 | 100 μL | 500 ng | 1.25-2.25 μL | 0.5 μL |
12孔 | 4 cm2 | 1 mL | 1.4×105 | 200 μL | 1 μg | 2.5-4.5 μL | 1.0 μL |
6孔 | 10 cm2 | 2 mL | 3.5×105 | 500 μL | 2.5 μg | 6.25-11.25 μL | 2.5 μL |
1 表面积可能因生产商而异。
2 如果 Lipofectamine® LTX 试剂的体积太小而无法准确分配,并且无法合并稀释液,则在 Opti-MEM® I 减血清培养基中将 Lipofectamine® LTX 试剂预稀释10倍,然后分配10倍的量(应至少为 1.0 μL/孔)。丢弃任何未使用的经稀释 Lipofectamine® LTX 试剂。