MOLT-4

介绍

Lipofectamine LTX®  试剂是一种专有的无动物源性制剂,其细胞毒性较低,适用于将 DNA 转染到真核细胞中。本参考资料提供了使用 Lipofectamine LTX® 试剂将质粒 DNA 转染到 MOLT-4 人 T 淋巴母细胞(ATCC 货号 CRL-1582)中的推荐步骤。

转染重要指南


使用 Lipofectamine LTX® 试剂转染 MOLT-4 细胞时,请遵循以下重要指南:

  • 在各实验之间保持相同的接种条件。使用低传代细胞;转染前确保细胞健康且细胞活力大于 90%。
  • 转染既可在有血清的条件下进行,也可在无血清的条件下进行。检测无血清培养基与 Lipofectamine LTX® 试剂的相容性。
  • 我们建议,在络合之前使用 Opti-MEM® I 减血清培养基(货号 31985-070)稀释 DNA Lipofectamine LTX® 试剂。
  • 关于其他专业转染方案,请访问 www.lifetechnologies.com/transfection 或联系技术服务部。
  • Lipofectamine LTX® 试剂在基于载体的 RNAi 实验中表现良好。对于 siRNA 和 Stealth RNAi 转染,我们建议使用 Lipofectamine RNAiMAX。有关更多信息,请访问 www.lifetechnologies.com/RNAi 或联系技术服务部。


需要的材料

开始前请准备好以下试剂:

  • 在添加了 4 mM L-谷氨酰胺(货号 25030-081)和 10% 胎牛血清(货号 16000-044)的 RPMI 培养基1640(货号 21870-076)中维持培养的 MOLT-4 细胞。在37℃、5% CO2 的条件下培养细胞。
  • 感兴趣的质粒 DNA。
  • Lipofectamine LTX® 试剂和 PLUS™ 试剂(在 4℃ 下储存)
  • Opti-MEM® I 减血清培养基
  • 适当的组织培养板和耗材

转染 MOLT-4 细胞

按照以下步骤将质粒 DNA 转染至24孔板中的 MOLT-4 细胞中(对于其他规格,请参见下文的扩大或缩小转染规模)。指定的所有数量和体积均以每个孔为基础。

  1. 转染当天,在含有 0.5 mL 完全生长培养基的每个孔中铺 1.0-2.0×105 个细胞。.

  2. 对于每个孔的待转染细胞,将 1.0 μg DNA 稀释到 100 μL 不含血清的 Opti-MEM® I 减血清培养基中。

  3. 将 1.0 μL PLUS™ 试剂(与 DNA 的比例为 1:1)直接加入稀释后的 DNA 中。轻轻混匀并在室温下孵育 5-15 分钟。

  4. 对于每个孔的细胞,将 2.25-3.75 μL Lipofectamine LTX®  试剂添加到上述稀释后的 Opti-MEM®:DNA 溶液中,轻轻混匀并在室温下孵育30分钟,以形成 DNA-Lipofectamine LTX®  试剂复合物。

  5. 孵育30分钟后,将 100 μL DNA-Lipofectamine LTX®  试剂复合物直接添加到含有细胞的每个孔中,并轻轻来回晃动孔板使其混匀。

  6. 转染后不必去除复合物。转染后,将细胞置于 CO2 培养箱中在 37℃下孵育 18-24 小时,然后测定转基因表达。

扩大或缩小转染规模

培养容器 每孔

面积
铺板培养基体积 细胞/孔 稀释
培养基
体积
DNA Lipofectamine®
LTX 试剂
PLUS™ 试剂
96孔0.3 cm2100 μL2.0×10420 μL200 ng0.45-0.75 μL0.2 μL
48孔1 cm2200 μL4.0×10440 μL400 ng0.9-1.5 μL0.4 μL
24孔2 cm2500 μL1.0×105100 μL1.0 μg2.25-3.75 μL1.0 μL
12孔4 cm21 mL2.0×105200 μL2.0 μg4.5-7.5 μL2.0 μL
6孔10 cm22 mL5.0×105 500 μL5.0 μg11.25-18.75 μL5.0 μL

 

25-0993W   2006年11月17日