使用 Lipofectamine LTX 试剂将质粒 DNA 转染到 NCI-H460 细胞中

Lipofectamine LTX Reagent 是一种专利的无动物源性配方，低细胞毒性，用于将 DNA 转染到具有的真核细胞中。该参考文献提供了使用 Lipofectamine LTX 试剂将质粒 DNA 转染到 NCI-H460，人大细胞肺癌细胞（ATCC No.HTB-177）中的推荐方法。

转染重要指南

使用 Lipofectamine LTX 试剂转染 NCI-H460 细胞时，请遵循以下重要指南：

• 在实验之间保持相同的接种条件。使用低代次细胞;在转染前确保细胞健康且存活率超过90％。

• 可以在血清存在或不存在下进行转染。测试无血清培养基与 Lipofectamine LTX 试剂的相容性。

• 我们建议使用 Opti-MEM I Reduced Serum Medium（货号31985-070）稀释 DNA Lipofectamine LTX 试剂，再复合。

• 请访问www.thermofisher.com/genedelivery或联系技术服务部门获取其他专业转染协议。
• Lipofectamine LTX 试剂在基于载体的 RNAi 实验中表现良好。对于 siRNA 和 Stealth RNAi 转染，我们推荐 Lipofectamine RNAiMAX。有关更多信息，请访问www.thermofisher.com/RNAi或联系技术服务。

以下试剂

请在开始实验前备好：

• NCI-H460 细胞培养条件：在 RPMI 培养基1640（货号21870-076）中，添加 4mM L-谷氨酰胺（货号25030-081），10％胎牛血清（货号16000-044）。在37^oC、5％CO ₂条件下培养细胞。

• 目的质粒 DNA。

• Lipofectamine® LTX 试剂

• Opti-MEM I Reduced Serum Media

• 适当的组织培养板和用品

使用此程序在24孔板中将质粒 DNA 转染到 NCI-H460 细胞中（对于其他规格，参见下面的扩大或缩小转染）。所有数量和体积均以每孔为基础给出。

1. 转染前一天，胰蛋白酶消化并计数细胞。每孔0.5 ml完全生长培养基，铺7.5×10 ⁴个细胞。转染当天细胞密度应为50-80％汇合度。


2. （可选）转染当天，从细胞中除去培养基，并用 0.5 ml 完全培养基替换。


3. 对于待转染细胞的每个孔，在不含血清的100 μl Opti-MEM I Reduced Serum Media 中稀释 0.35 μg DNA。


4. 如果使用 PLUS™ 试剂：使用前轻轻混合 PLUS™ 试剂，然后将 0.35 μl PLUS™ 试剂（与 DNA 的比例为1:1）直接加入稀释的 DNA 中。轻轻混匀并室温孵育5-15分钟。


5. 对于每个细胞孔，将1.75-2.75 μl Lipofectamine LTX 试剂加入上述稀释的Opti-MEM：DNA 溶液中，轻轻混合并在室温下孵育30分钟以形成 DNA-Lipofectamine LTX 试剂复合物。


6. 孵育30分钟后，将100 μl DNA-Lipofectamine LTX 试剂复合物直接添加到每个含有细胞的孔中，并通过轻轻前后晃动孔板使其混合。


7. 转染后不必除去复合物。将细胞在37^oC下在CO₂培养箱中孵育18-24小时，然后测定转基因表达。