使用 Lipofectamine® LTX 试剂将质粒 DNA 转染到 NTera2 细胞中

Lipofectamine LTX® 试剂是一种专有的无动物源性制剂，其细胞毒性较低，适用于将 DNA 转染到真核细胞中。本参考资料提供了使用 Lipofectamine LTX® 试剂将质粒 DNA 转染至 NTera2 人胚胎癌干细胞系（ATCC 货号 CRL-1973）中的推荐步骤。

转染重要指南

使用 Lipofectamine LTX® 试剂转染 NTera2 细胞时，请遵循以下重要指南：

• 在高密度下维持培养细胞，在各实验之间保持相同的接种条件。使用低传代细胞；转染前确保细胞健康且细胞活力大于 90%。
• 转染既可在有血清的条件下进行，也可在无血清的条件下进行。检测无血清培养基与 Lipofectamine LTX® 试剂的相容性。
• 我们建议，在络合之前使用 Opti-MEM® I 减血清培养基（货号 31985-070）稀释 DNA Lipofectamine LTX® 试剂。
• 使用 PLUS™ 试剂（货号 11514-015）可增强 NTera2 细胞中的转染性能
• 关于其他专业转染方案，请访问 www.lifetechnologies.com/genedelivery 或联系技术服务部。
• Lipofectamine LTX® 试剂在基于载体的 RNAi 实验中表现良好。对于 siRNA 和 Stealth RNAi 转染，我们建议使用 Lipofectamine RNAiMAX。有关更多信息，请访问 www.lifetechnologies.com/RNAi 或联系技术服务部。

需要的材料

开始前请准备好以下试剂：

• 在添加了 2 mM L-谷氨酰胺（货号 25030-081）和 10% 胎牛血清（货号 16000-044）的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM)（货号 10313-021）中维持培养的 NTera2 细胞。在37℃、5% CO₂ 的条件下培养细胞。

• 感兴趣的质粒 DNA。

• Lipofectamine LTX® 试剂（在 +4℃下储存直至使用）

• Opti-MEM® I 减血清培养基

• 适当的组织培养板和耗材

按照以下步骤将质粒 DNA 转染至24孔板中的 NTera2 细胞中（对于其他规格，请参见下文的扩大或缩小转染规模）。指定的所有数量和体积均以每个孔为基础。

1. 转染前一天，去除培养基，用 PBS 洗涤一次，然后用无菌细胞刮刀刮取细胞。收集细胞。在含有 0.5 mL 完全生长培养基的每个孔中铺 1.0×10⁵ 个细胞。转染当天细胞密度应为 80-90% 汇合度。


2. （可选）转染当天，从细胞中吸走生长培养基，替换为 0.5 mL 完全生长培养基。


3. 对于每个孔的待转染细胞，将 0.5 μg DNA 稀释到 100 μL 不含血清的 Opti-MEM® I 减血清培养基中。


4. 如果使用 PLUS™ 试剂：使用前轻轻混匀 PLUS™ 试剂，然后将 0.5 μL PLUS™ 试剂（与 DNA 的比例为 1:1）直接加入稀释后的 DNA 中。轻轻混匀并在室温下孵育 5-15 分钟。


5. 对于每个孔的细胞，将 1.75-3.25 μL Lipofectamine LTX® 试剂添加到上述稀释后的 Opti-MEM®:DNA 溶液中，轻轻混匀并在室温下孵育30分钟，以形成 DNA-Lipofectamine LTX® 试剂复合物。


6. 孵育30分钟后，将 100 μL DNA-Lipofectamine LTX® 试剂复合物直接添加到含有细胞的每个孔中，并轻轻来回晃动孔板使其混匀。


7. 转染后不必去除复合物。转染后，将细胞置于 CO₂ 培养箱中在 37℃下孵育 18-24 小时，然后测定转基因表达。