使用 Lipofectamine LTX 试剂将质粒 DNA 转染到 RAW264.7 巨噬细胞中

Lipofectamine® LTX 试剂采用专有的无动物源性配方，用于将 DNA 转染到真核细胞中，且具有低细胞毒性。本参考文件提供了使用 Lipofectamine® LTX 试剂（货号 15338-100）将质粒 DNA 转染到 RAW264.7 巨噬细胞中的推荐程序。

转染重要指南

使用 Lipofectamine® LTX 试剂转染 mNPC 细胞时，请遵循以下重要指南：

• 在各实验间维持相同的接种条件。使用低传代细胞；确保细胞
  转染前健康且存活率超过 90%。
• 在存在或不存在血清的情况下，均可进行转染。检测无血清培养基与 Lipofectamine® LTX 试剂的相容性。
• 使用 PLUS 试剂（货号 11514-015）可增强在 RAW264.7 巨噬细胞中的转染性能
• 我们建议使用 Opti-MEM ® I 减血清培养基（货号 31985-062）稀释 DNA 和 Lipofectamine® LTX 试剂后进行复合。
• 如要获取其他专用转染方案，请访问 www.lifetechnologies.com/transfection 或联系技术服务部门。
• Lipofectamine® LTX试剂在基于载体的 RNAi 实验中表现良好。对于 siRNA 和 Stealth™ RNAi 转染，我们建议使用 Lipofectamine® RNAiMAX（货号 13778-075）。请访问 www.lifetechnologies.com/RNAi 或联系技术服务部门以获取更多信息。

需要的材料

开始实验前请准备好以下试剂：

• RAW264.7 巨噬细胞
• 目标质粒 DNA（100 ng/μl 或更高）
• Lipofectamine® LTX 试剂（储存在 +4℃ 下直至使用）和 PLUS™ 试剂（储存在 4℃ 下）
• Opti-MEM® I 减血清培养基
• 相应的组织培养板和用品

使用此程序，以48孔规格将质粒 DNA 转染至 RAW264.7 巨噬细胞中。所有用量和体积均以每孔计。

1. 转染前一天，使用胰蛋白酶处理细胞并进行细胞计数。每孔含 0.5 ml 完全生长培养基，用 6.2 x 10⁴ 个细胞铺板。


2. （可选）转染当天，从细胞中去除生长培养基，然后更换为 0.5 ml 完全生长培养基。


3. 对于每孔待转染的细胞，用 40 μl Opti-MEM® I 减血清培养基稀释 0.3 μg DNA，不添加血清。


4. 使用前轻轻混合 PLUS™ 试剂，然后将 0.375 μl PLUS™ 试剂直接加入稀释后的 DNA 中。轻轻混合并在室温下孵育 5-15 分钟。


5. 对于每孔细胞，在上述 DNA 稀释液中加入 0.75-1.50 μl Lipofectamine® LTX 试剂，轻轻混合并在室温下孵育 30 分钟，以形成 DNA-Lipofectamine® LTX 复合物。


6. 孵育30分钟后，在含有细胞的每个孔中直接加入 40 μl DNA-Lipofectamine® LTX 复合物，并轻轻前后晃动培养板混合。


7. 转染后不必移除复合物。转染后将细胞在 37°C 的 CO₂ 培养箱中孵育 18-24 小时，然后检测转基因表达。