Zeocin™

Zeocin™ 是一种腐草霉素 D1（从轮枝链霉菌中分离得到的一种碱性、水溶性、铜螯合糖肽）制剂，对细菌、真菌（包括酵母菌）、植物和哺乳动物细胞系具有强烈的毒性。溶液呈蓝色是因为有铜存在，Zeocin™ 的铜螯合形式并无活性。当抗生素进入细胞后，铜阳离子从 Cu²⁺ 还原成 Cu¹⁺，并被细胞中的巯基化合物清除。清除铜后，Zeocin™ 被激活，于是结合并切割 DNA，从而导致细胞死亡。已对 13,665 Da 的 Zeocin™ 耐药蛋白进行了分离和表征。该蛋白是 Sh ble 基因（印度斯坦链异壁菌博来霉素基因）的产物，以化学计量方式与 Zeocin™ 结合并抑制其 DNA 链切割活性。该蛋白在真核和原核宿主细胞中的表达赋予了其对 Zeocin™ 的抗性。

注：本说明书描述了关于使用 Zeocin™ 的基本信息。有关详细信息（包括 Zeocin™ 结构和经 Zeocin™ 处理的细胞照片），请从官网下载 Zeocin™ 手册。

规格

内容物：100 mg/mL 高压灭菌去离子水溶液。
运输/储存：置于蓝冰上运输。在 -20℃ 下储存。
大肠杆菌筛选：25-50 μg/mL，溶于低盐 LB 培养基中*
*（NaCl 浓度不得超过 5 g/L。）
酵母菌筛选：50-300 μg/mL，溶于 YPD 或基本培养基中
哺乳动物细胞筛选：50-1000 μg/mL，溶于适当的培养基（随细胞系变化）中。

处理 Zeocin™

• 处理含 Zeocin™ 的溶液时，应始终佩戴手套和护目镜，并穿着实验服。
• Zeocin™ 对光敏感。请将抗生素和含有抗生素的孔板或培养基存放在暗处。
• 减少细菌培养基中的盐分并将 pH 值调至7.5，以使 Zeocin™ 保持活性，因为高离子强度以及酸性或碱性会抑制 Zeocin™ 活性。
• 在 -20℃ 下储存 Zeocin™，使用前在冰上解冻。

大肠杆菌中的 Zeocin™ 筛选

宿主细胞：不得含有 Tn5 转座子（即 TOP10、DH5、DH10）。
培养基：使用 pH 值为7.5的低盐 LB 培养基（10 g 胰蛋白胨、5 g NaCl 和 5 g 酵母菌提取物），以防 Zeocin™ 失活。
筛选：在大肠杆菌中使用 25-50 μg/mL 的 Zeocin™ 进行筛选。

酵母菌中的 Zeocin™ 筛选

酵母菌： 酿酒酵母，毕赤酵母
培养基：含 1 M 山梨醇的 YPD（电穿孔细胞）；YPD 或基本孔板（化学转化细胞）。检测 pH 值被调节至 6.5-8.0 的培养基，并选择可让您使用较低 Zeocin™ 浓度的 pH 值。
转化方法：使用电穿孔、锂离子方案或 EasyComp™ 试剂盒。请勿将原生质球法与含有 Zeocin™ 的质粒联合用于酵母菌转化，因为这会导致细胞完全死亡。
筛选：根据酵母菌株、培养基 pH 值和离子强度，使用 50-300 μg/mL 的 Zeocin™。绘制杀灭曲线，以确定杀灭未转化宿主菌株所需的较低 Zeocin 浓度。

注：转化后，让细胞在 YPD 培养基中恢复1小时。为高效进行 Zeocin™ 筛选，请在低细胞密度下铺板（使用 10、25、50、100 和 200 μL 转化反应）。