细胞计数和成像仪器支持 - 入门

可以，Countess™ II FL仪器与EVOS™成像系统使用同样的光立方。Countess™ II仪器不能使用光立方。

所有的EVOS™成像系统都是倒置显微镜。对CC物镜来说，盖玻片必须朝下，朝向物镜，因为镜头有一个仅适用于薄玻璃盖玻片或塑料盖玻片的短工作距离。LWD物镜设计用于观察微孔板、皮氏培养皿或者细胞培养瓶底部；这些物镜镜头的长工作距离适应于较厚的材料，诸如多种容器的塑料底。

FLoid™ 细胞成像工作站是一个简单、易用的透射光及三色荧光显微镜。蓝色、绿色和可见红色（Texas Red™染料）三种荧光色为固定设置，不可更换为其他滤片组。放大倍数固定设置为20x的物镜；该物镜不可移除或更换。

而EVOS™ FL成像系统是易于使用的透射光及荧光显微镜，允许用户通过物镜转轮和光立方托盘选择多种放大倍数和荧光检测选项。EVOS™ FL 成像系统允许使用23种不同的光立方和18种不同的物镜（从2x到100x）。

• 当颜色和焦距已被标准校准时，对于一般的使用，Plan Achromat物镜是绝佳的；这些适用于放大倍数要求低（2x到4x）的样品。推荐Plan Achromat物镜用于基本视野明亮的显微镜和简单荧光检测。
• Plan Fluorite物镜为明亮的荧光信号和高对比度提供了更高水平的分辨率。推荐基本的荧光成像以及更大放大倍数的明场显微镜使用这些物镜。
• Plan Apochromat物镜提供了最高水平的分辨率、荧光亮度、对比度和色度校准。如果您需要成像非常小的结构且需要高对比度和亮度，Plan Apochromat物镜是最好的选择。

GFP光立方（Ex = 470/22；Em = 510/42）以470 nm为激发中心，前后各延伸11 nm，总的激发范围从459到481 nm。其发射以510 nm为中心，前后各延伸21 nm，总的发射带宽范围从489到531 nm。

• Qdot™ 525光立方（Ex = 445/45; Em = 525/15）以445 nm为激发中心，前后各延伸22.5 nm，总的激发范围从422.5到467.5 nm。其发射以525 nm为中心，前后各延伸7.5 nm，总的发射带宽范围从517.5到532.5 nm。
• GFP光立方最适于有效激发从460到480 nm荧光，且可以从蓝绿光到绿光范围内发射。
• Qdot™ 525光立方更适用于在低波长下（高能）激发量子点，且在绿光范围内具有较窄发射。

可以。EVOS™ XL 成像系统（而不是EVOS™ XL Core 成像系统），EVOS™ FL和EVOS™ FL Auto成像系统能够用于细胞计数并且可以计量多达六种标记的样品。

Countess™ II和Countess™ II FL 全自动细胞计数仪都包括自动聚焦，触摸屏，明明场计数、使用台盼蓝的可视化测试以及使用一次性载玻片。Countess™ II FL全自动细胞计数仪同时能适用于重复使用的玻璃载玻片和基于EVOS™ LED光立方的荧光检测。

可以，Countess™ II FL仪器能与EVOS™成像系统使用同样的光立方。Countess™ II仪器不使用光立方。如果Countess™ II FL仪器不安装光立方功能就完全如同Countess™ II仪器，就像一个明视野的细胞计数仪。

可以，Countess™ II FL仪器不需要光立方，并且如果不需要荧光性，没有光立方也可正常使用。

不需要，Countess™ II和Countess™ II FL仪器不需要电脑。

由于数据不需要特殊的软件打开，因此没有合适的电脑软件。文件可以以标准图片格式（JPEG, PNG, TIFF, 或BMP）存储到USB仪器，并可以通过外部任何图片软件打开，或者数据可以以CSV格式存储到USB仪器并通过电子数据表程序打开。仪器的相关软件可以在这里下载。

不可以。您可以使用U盘将自己的数据从仪器转移到电脑并用Windows™操作系统。

Countess™ II和Countess™ II FL仪器没有内置存储器，因此没有需要消除的文件。文件可以以标准图片格式（JPEG, PNG, TIFF, 或BMP）存储到USB仪器，并可以通过外部任何图片软件打开，或者数据可以以CSV格式存储到USB仪器并通过电子数据表程序打开。

USB接口是完全相同的，然而，如果一个USB或外部驱动同时连接到两个端口上，仅仅第一个连接的储存仪器能够被识别。USB鼠标也能使用任一个USB端口。

Countess™ II和Countess™ II FL仪器的尺寸非常小（23 cm (w) x 14 cm (d) x 23 cm (h)），重量不超过3.6 kg（不安装光立方）。Countess™ II FL仪器中不含有光立方，必须单独购买。

Countess™ II和Countess™ II FL仪器预先校准过的。您不需要校准仪器。

不可以。Countess™ II仪器不含有电器元件能够接受用于依赖荧光性检测的光立方。

不可以，仅仅Countess™ II FL仪器可以利用重复使用的盖玻片。Countess™ II仪器仅仅可利用一次性盖玻片。

是的，盖玻片有不同的厚度，因此需要为重复使用的盖玻片和一次性盖玻片设置公称焦距。一旦设定，Countess™ II FL仪器能够检测到使用了哪一个盖玻片并采用适当的公称焦距值。

一个视野中，2.2 mm x 1.6 mm区域被计数，总的区域为3.5平方毫米。Countess™ II和Countess™ II FL仪器仅仅计算一个简单的视野，与屏幕上可见的视野直接相一致，不带有放大功能。

目前，我们仅仅提供单独包装的一次性盖玻片。

不可以，Countess^™ II和 Countess™ II FL仪器的成像软件不能检测到游动细胞。分析之前，细胞必须固定化或者固定好。

1 x 10E5到4 x 10E6 细胞/mL是重要的置信区间，将会得到最佳的准确度和精确度。计数样品从1 x 10E4到1 x 10E7细胞/mL都被验证过，但是伴有很大的重复计算的可变性。

Countess™ II和Countess™ II FL仪器能够检测到微粒/细胞的范围为4–60 μm。细胞大小7–60 μm范围的准确可行性分析是可行的。

通过一个复杂的图像分析算法识别物体并通过圆度和大小对微粒或细胞进行分类，通过染色方式从死细胞中鉴别出活的细胞。

在使用0.2%台盼蓝的条件下，基于染料的排斥性。活细胞排斥染料。死细胞胞内的蛋白质会被强烈的染色。

不可以，很不幸用于准备细胞大小和荧光数据的直方图无法浏览。

有的，IQ/OQ（安装合格证/操作合格证）用户执行测试程序包裹可以通过销售代表（目录号A28154）单独购买。如果您需要一个工程师帮您执行IQ⁄OQ验证，报告目录号4479677是一次测试或目录号4479671是反复测试过程。

我们不销售Countess™ II FL仪器的特别实验，然而我们已经验证了Countess™ II FL仪器的一些激发荧光性和凋亡实验。荧光性和凋亡实验的应用注释可以在这里找到。

是的，明视野活性数和浓度将稀释计算在内，因此显示的是在台盼蓝稀释前原始样品的值。

不可以。台盼蓝样品的准备最多简化到1:1混合，上样，读数和得出结果仅仅将2倍稀释度计算在内。对于最终结果，任何的进一步稀释都需要用户计算。

每个样品花费的时间为10秒。

下列的细胞系和原代细胞已经通过测试：

• 细胞系：HEK 293, A431, CHO-M1, CHSE, COLO-205, COS-7, HeLa, HepG2, HL-60, J774(MMM), Jurkat, K-562, MCF-7, MRC-5, NIH/3T3, PC-12, SF-21, U266, 和U2OS
• 原代细胞：人类脂肪组织来源干细胞, HASMCs, HPAECs, HPASMCs, HUVECs, C2C12, RBCs,和PMBCs

当我们使用同样的细胞和盖玻片，同时测试Countess™ II和Countess™ II FL 全自动细胞计数仪与初代Countess™ 全自动细胞计数仪时，仪器间的计算到计算的变化率<10%. 

在明场模式下计数，Countess™ II和Countess™ II FL仪器自动默认设定1：1与台盼蓝稀释。在荧光模式下，没有这样默认设定。

当一个实验工作者使用玻璃血球计数板和显微镜手动计数细胞时，单个实验的重复计数的变化率一般为10%或更多。

Countess™ II和Countess™ II FL仪器的用户观测到的重复计数的变化率通常应该<5%。

不可以，为了获得明明场活性和荧光信息，分别执行两种单独的计数方式。

可以，在荧光和明明场模式下，仪器都可以计数，允许简单的转染转化率计算并在结果中显示，如‘‘%阳性’’代表目标光立方。

不可以，细菌太小无法从非细胞碎片中鉴别。

可以，但是您需要采用多个circularity进行试验，直到您发现最适用于自己的细胞类型的那种。

先进的Countess™ II和Countess™ II FL仪器的计数运算法能够清楚地分辨成簇细胞中的细胞边界，通常能够精确的计数细胞。

可以，Countess™ II和Countess™ II FL仪器能够计数PBMCs，但不能区分白细胞类型。

可以，Countess™ II和Countess™ II FL仪器可以计数RBC。但我们建议按照1：10,000的比例稀释血液样品。由于它们的染色和台盼蓝染色模式，仪器无法评估RBCs的活力。

Countess™ II和Countess™ II FL不能计数活的精子和快速运动原生动物。

如果有两个细胞相互贴在一起，并且每一个都具有充分明确的细胞形态，成像分析固件会将它们区分为两个不同的细胞。

我们已经使用默认设置测试了超过20种常用细胞类型，包括原代细胞、PBMCs、昆虫细胞和鱼细胞。某些类型的细胞可能需要调整某些参数，这些参数可由用户自行优化。

Countess™ II和Countess™ II FL仪器最适用于哺乳动物计数；但是也可以对其他类型细胞进行计数。

目前为止，我们没发现其他染料可与Countess™ II和Countess™ II FL仪器一起用来进行明场活性测定。但只要能够正确安装光立方，即可在Countess™ II和Countess™ II FL仪器中观测到多种荧光染色或蛋白。

Countess™ II FL仪器可以与那些已经用于活性测定的染料一起使用。一些已经在Countess™ II FL仪器上验证过的通用的染料在下表中列出：

Countess™ II FL仪器可以与那些已经用于活性测定的染料一起使用。部分已在Countess™ II FL仪器上验证的通用的染料请见下表：

具体取决用于细胞的荧光染色剂类型。台盼蓝指示剂是一种非细胞透性着色染料，其可以淬灭荧光，因此可以淬灭活细胞表面的荧光染色或者死细胞的胞内荧光染色。

不能，Countess™ II和Countess™ II FL仪器附带一盒盖玻片，不提供台盼蓝染料，因此其需要单独购买（货号T10282）。如果您单独购买一盒盖玻片，会附带台盼蓝染料。

荧光是在相对标准下测定的，因此这太依赖于环境条件而难给予一个定量的回答。简而言之，Countess™ II FL仪器提供的荧光敏感性与低倍率荧光显微镜的相同。

台盼蓝是活/死细胞鉴别所必需的成分，可区分不同性质的细胞。但如果不需要活力信息，一些细胞自身可能具有足够的对比度，因而可在没有台盼蓝的明场下计数。假定细胞在台盼蓝中1:1稀释，我们在明场下获得就是细胞浓度值；如果细胞未被稀释，您需要将浓度乘以2，才能获得未与台盼蓝混合的细胞的准确浓度。

初代Countess™全自动细胞计数仪已经停产了，但我们依然为此设备提供耗材。初代Countess™自动细胞计数仪最新的软件和固件仍可点击此处下载，请见页面底部“初代Countess软件下载”部分。仪器免费赠送的U盘之中也含有这种软件。该软件支持处理细胞计数数据并且可以将您的数据以PDF的格式保存，以便打印或归档。

注：为替代初代Countess™自动细胞计数仪，我们提供了Countess™ II和Countess™ II FL全自动细胞计数仪。

可以，但活力计数和浓度将稀释度计算在内，因此显示的是没有经过台盼蓝稀释的原始细胞样品浓度。

不可以。台盼蓝样品的准备最多简化到1:1混合，上样，读数和得出结果仅仅将2倍稀释度计算在内。对于最终结果，任何的进一步稀释都需要用户计算。

每个样品花费30秒。

设计的初代Countess™全自动细胞计数仪可以读取的样品浓度范围为从1 × 10E4 细胞/mL到1 × 10E7 细胞/mL，最高的准确度在1 × 10E5 细胞/mL到 4 × 10E6 细胞/mL之间。

初代Countess™全自动细胞计数仪能计数的细胞大小范围为5– 60 μm。

在使用0.2%台盼蓝的条件下，基于染料的排斥性。活细胞排斥染料，死细胞将其带入细胞质中。

通过一个复杂的图像分析算法识别对象，并通过圆度和大小对细胞进行分类，通过染色方式鉴别死/活细胞。

可以。其可以测定活和死细胞的大小，同时也可测定每个细胞群的平均大小。

初代Countess™全自动细胞计数仪尺寸很小（27 cm (w) x 20 cm (d) x 19 cm (h)），重量大约5.7 kg。

目前，我们仅仅提供单独包装的一次性盖玻片。

Countess™仪器不需要定期维护服务。用湿布对仪器表面进行清洁。清洁LCD屏幕时，关闭仪器，切断电源，用一块轻微湿润的软布沾上LCD清洁剂清洁LCD。清洁屏幕时过分用力会损毁LCD屏幕。清洁后应立即擦干屏幕。不要重复使用计数板。如果需要排除仪器的故障，请通过LifeScience-CNTS@thermofisher.com联系技术支持部门。为了避免损坏仪器，请勿对Countess™仪器执行任何修理和修复工作。

不需要电脑。

不可以。您可以使用U盘将自己的数据从仪器转移到使用Windows操作系统的电脑上。

为最大限度确保分析性能和打印报告，您可以在自己的电脑上下载Countess™软件。初代Countess™全自动细胞计数仪最新的软件和固件仍可点击此处下载，请见页面底部“初代Countess软件下载”部分。仪器免费赠送的U盘之中也含有这种软件。该软件支持处理细胞计数数据并且可以将您的数据以PDF的格式保存，以便打印或归档。

可以。所有的数据都以.dbt格式的文件储存并可通过Countess™ PC软件打开。此类图像包括.jpg格式的图片文件。您可以利用任何图像软件打开.jpg格式文件。

可以。可能需要在电脑上使用Countess™软件来生成报告。报告显示了细胞图像、所有数字数据以及细胞大小的直方图。

您可以使用任何电子数据表软件打开.csv文件。您同时可以使用任何图像软件打开图片文件。为了查看完整的数据集，处理数据并打印报告，您可使用此处提供的Countess™软件（请见页面底部“初代Countess软件下载”部分）。仪器免费赠送的U盘之中也含有这种软件。该软件支持处理细胞计数数据并且可以将自己的数据以PDF的格式保存，以便打印或归档。

下列细胞系已进行过测试：HEK-293, A431, CHO-M1, CHSE, COLO-205, COS-7, HeLa, HepG2, HL-60, J774(MMM), Jurkat, K-562, MCF-7, MRC-5, NIH/3T3, PC-12, SF-21, U266,和U2OS。下列原代细胞已进行过测试：人类脂肪组织来源干细胞、HASMC、HPAEC、HPASMC、HUVEC、C2C12、RBC和PMBC。

我们没有测试过不规则或伸长的细胞。如果细胞非常不规则或伸长，您可试着“设定”菜单下的“参数”功能来改变细胞circularity设置。这个功能改变了图像分析软件识别细胞的方式。您可能需要试验多个circularity设置，直到发现最适用于自己的细胞类型的circularity。

我们已经成功的计数啤酒酵母（Fleishman面包酵母）这种消耗性产品。Countess™仪器成功计数这些酵母细胞的前提是它们不要过于成块。但Countess™不能区分活/死的酵母细胞。

不可以。细菌太小无法从非细胞碎片中鉴别。

初代Countess™仪器能准确的计数多达五到六个细胞的结块。超过这个数量，细胞将会重叠，仪器精确度可能会变得像人眼一样。然而，计数的细胞将会大于真实尺寸。

初代Countess™仪器能够计数溶解的全血和Ficoll™培养基细胞样品中的白细胞。

可以。您应该按大约1：10,000的比例稀释血液样品，并在“bead”模式下计数即可。仪器无法估计全血样品中的细胞活力。

可以，初代Countess™仪器能够计数PBMC，但不能区分白细胞类型。

可以。Countess™仪器可以计数RBCs。按大约1：10,000的比例稀释血液样品，并在“bead”模式下计数即可。仪器无法估计血红细胞的活力。

我们没有测试过植物细胞。如果植物细胞适合于仪器最佳的大小范围并且没有严重结块，Countess™仪器应该可以计数植物细胞。

很难计数快速运动的细胞。仪器不能计数活的精子和快速运动原生动物。

仪器可以计算总的浓度，但是不能提供细胞的活力信息。将仪器设为“bead”模式，可以进行细胞计数。

不可以。仪器不能选择性的分析一个特定大小的细胞群。仪器在图像中取所有物体的平均值并测定细胞大小的均值。之后仪器设定上限和下限，大小均值取决于调节设置。

如果有两个细胞相互贴在一起，并且每一个都具有充分明确的细胞形态，成像分析固件会将它们区分为两个不同的细胞。

我们已经使用默认设置测试了超过20种常用细胞类型，包括原代细胞、PBMCs、昆虫细胞和鱼细胞。某些类型的细胞可能需要调整某些参数，这些参数可由用户自行优化。

我们仅在Countess™仪器上测试了台盼蓝染料。

目前，我们还没有发现其它染料能用于Countess™仪器。我们已经试验过伊红Y、伊红B和nigrisin。然而，我们发现在很低的台盼蓝浓度下（0.1%），仪器就能检测到染色，这有助于减少接触台盼蓝的几率。

Countess™仪器预先校准过的。如果您升级了仪器上的固件，则需要重新校准。如果您决定使用其它品牌或浓度的台盼蓝（非试剂盒内附），也需要重新校准仪器。校准指的是针对标准的蓝色设置背景，通常需要花费大约2-3分钟。除上述两种情况下外，均不需要校准仪器。

我们尝试了0.05–0.6%浓度的台盼蓝，只要仪器在那个台盼蓝浓度下重新进行了校准，效果都非常好。

基本的差别体现在激发通道数量（5比7），明场下的成像能力、视野、共焦点和物镜转轮档位数上。CellInsight™ CX5系统是最基本的HCS系统，具有5个通道，可在明场和宽视野下成像，只有1个物镜转轮档位。CellInsight™ CX7系统和ArrayScan™系统具有7个发光通道，可在明场下成像，视野广，共焦点，具有3个（CX7）或4个（ArrayScan™系统）物镜转轮档位。ArrayScan™系统还具有活细胞成像的附加选择。更多信息，请点击此处.

如遇任何有关CellInsight™系统和ArrayScan™系统的问题，请联系仪器客户服务部。可通过LifeScience-CNTS@thermofisher.com联系他们。