流式细胞术支持 - 入门

细胞计数是一种测量细胞和微粒物理化学特性的方法。流式细胞术可在流式细胞仪内使细胞或微粒单独通过激光来测定其特性，它可用于测定单细胞，针对样品中的每个细胞提供独立的测定结果。此外，还可提供这些样品特性的统计分布结果。

流式细胞仪由三个子系统组成：流体系统、光学系统和电子系统。流体系统负责使细胞移动，从而对其进行分析。光学系统负责产生和收集光信号。电子系统负责将合适的光学信号转化为电子信号，以便进行计算机分析。

可进行多种应用，包括免疫分型、细胞周期分析、凋亡检测（如膜联蛋白V染色检测实验）、CellEvent™ Caspase-3/7检测、TUNEL检测、细胞活性检测、增殖检测（如CellTrace™ 检测和Click-iT™ EdU检测）、MitoProbe™检测法测定线粒体电势、利用计数微球进行细胞计数。

• 可测定来自单个细胞的数据。
• 可从大量细胞中获得数据，产生细胞群的丰富统计学分析结果。
• 由于可测定单个细胞，能够揭示种群的异质性。
• 支持多重检测，可鉴定小型亚群。
• 可以快速分析数以千计的细胞。
• 非常适合血液样本和其他悬浮细胞。
• 数据获取后，可以多次重复分析。
• 流式细胞仪文件（FCS）可以归档。

针对多参数分析应用，Attune™ NxT声波聚焦流式细胞仪可以选择最多4个激光器和14色配置，采用模块化系统设计来满足大部分试验需求和实验室预算。创新的光路设计，有助于确保四个空间分隔的激光器精确对齐样品流，确保长期的数据一致性、优越的性能和出色的可靠性。仪器可配备多达4个具有平顶光束的固态激光器（405 nm、488 nm、561 nm和637 nm）。

Attune™ NxT声波聚焦流式细胞仪的声波聚焦技术采用超声波辐射压力（>2 MHz），将微粒运送至样品流中心。之后，这股预聚焦流注入到为样品提供额外流体动力学压力的鞘液流中。这种“声波辅助流体动力学聚焦”技术可以在任何进样速率的情况下都保证样品流中心范围集中、激光照度均一。在传统的依赖于流体动力学聚焦技术的流式细胞仪中，样品中心需要变宽来适应流速的增加，从而导致激光照度不均一。

• 模块化设计—多种配置可选，可现场升级。
• 节省时间—在不降低数据质量的前提下，速度提高10倍以上。
• 简化样品准备流程—无需洗涤，无裂解选项，流体不堵塞。
• 可实现独特的应用—可针对广泛的细胞类型和样本构建复杂的实验方案。

Attune™ NxT自动进样器是Attune™ NxT声波聚焦流式细胞仪的可选附件，能够快速分析至多384份样品。对于不同形式平板——无论96孔还是384孔板——它都具有广泛的兼容性。内置智能探针，最大限度避免堵塞和截留（<0.5%），防止损坏仪器。该仪器通过通气而不是振荡混合，确保样品的均质性，同时维持细胞的活性。它还可作为Attune™ NxT流式细胞仪关机程序的一个步骤来执行自动清洗。无论采用何种取样方法（试管或平板）和数据采集速率，它都能提供一致的数据。

Attune™ NxT声波聚焦流式细胞仪检测的下限是0.5 µm。

• 滴度测定新抗体时，我们建议查阅推荐浓度的上下限浓度范围（可能是0.5–20 µL）。
• 在您的直方图上标绘数据，并选择阳性和阴性类群平均荧光强度分离最明显的浓度。
• 如果您想要检测混合的细胞类群，则阴性类群可以是阴性峰或同型对照。
• 如果您使用过少的抗体，会由于阳性类群不能全部得到标记，导致区分度很小。
• 如果您使用过多的抗体，由于非特性结合，阴性类群接近阳性类群，导致区分度降低。
• 如果推荐的抗体使用范围未能给你一个最好的结果，可能需要采用更多或更少的抗体进行滴定测定。

一抗是靶向目标抗原的抗体。在流式细胞术中，很多一抗直接采用荧光基团标记。如果是这种情况，则不需要二抗。

二抗是结合到一抗上的抗体。如果您的一抗来源于小鼠，则其抗体类型是鼠IgG。此时，您需要一种能够靶向鼠IgG的抗体。这种抗体可以是任意动物来源的——山羊和驴是最常用的。

不需要。如果您的一抗直接偶联荧光基团，则不需要二抗。只有一抗未偶联时，才需要二抗。

如果您使用多种一抗，则这些一抗应来源于不同的种属，例如小鼠和兔。如果它们来源于同一种属，则您的二抗会标记所有的一抗。您的二抗不可与一抗来源于同一种属。例如，如果您采用兔抗X和小鼠抗X的一抗，则不可使用兔抗小鼠二抗。这是因为，加入的抗兔二抗也会标记兔抗-小鼠二抗。所有二抗来自同一种属并无问题。在本例中，使用山羊抗小鼠和山羊抗兔二抗是更好的选择。

会。在流式细胞术应用中，FIX & PERM™细胞通透试剂盒可用于固定和通透悬浮细胞，从而使抗体可以接近到胞内靶标且不降低其散射特性。此试剂盒经验证可用于细胞系、全血和骨髓。除了固定和通透细胞外，该试剂盒还可裂解红细胞。其可作为通用标记试剂（GPR），可用于临床应用，同时也可广泛用于实验室研究

可以，以下为两份相关的文献：

Haranaga S, Yamaguchi H, Friedman H et al.(2001) Chlamydia pneumoniae infects and multiplies in lymphocytes In vitro. Infect Immun 69:7753–7759.

Al-Mufti R, Hambley H, Albaiges G et al. (2000) Increased fetal erythroblasts in women who subsequently develop pre-eclampsia. Hum Reprod 15:1624–1628. 

可以。通常情况下，您需要延长在通透缓冲液（试剂B）中的孵育时间，以下为两份相关的文献：

• Millard I, Degrave E, Philippe M et al. (1998) Detection of intracellular antigens by flow cytometry: comparison of two chemical methods and microwave heating. Clin Chem 44:2320–2330.
• Parker JE, Mufti GJ, Rasool F et al. (2000) The role of apoptosis, proliferation, and the Bcl-2–related proteins in the myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia secondary to MDS. Blood 96:3932–3938.

• Cal-Lyse™预混合裂解溶液（货号GAS010和GAS010S100）是为在全血或骨髓的单克隆抗体染色后裂解红细胞，而专门配制的一款体外诊断试剂。用这种试剂处理后，红细胞裂解，白细胞固定。处理不影响结合白血球的荧光标记抗体，同时保证了白血球的形态散射特性完整。
• High-Yield Lyse（货号HYL250）是一种预混合、无固定剂红细胞裂解溶液，可用于辅助去除全红细胞中的红细胞，以便在最大限度避免损失稀有的细胞群的前提下，进行流式细胞分析。使用这种试剂时，需在采用荧光团偶联的单克隆抗体染色血液样品后，立即裂解红细胞；不需要清洗步骤。

TransFix™细胞抗原稳定试剂（货号FIX2、FIX20和FIX100）是一种全血防腐剂，用于稳定白细胞和保护抗原位点，以便进行后续的细胞分析。其支持简便地分批处理多个样品，以实现最佳的实验室工作流程。此外，用TransFix™试剂稳定的血液可收集和运输到其他地点进行分析。其具有操作简易、性价比高、经过多项发表成果验证、方便和灵活的特点。

人们常使用与荧光抗体来源于同一种属的血清来进行封闭。如果没有使用二抗，这一成分通常为一抗；但如果使用二抗，这种成分就是二抗的宿主。用于直接标记的小鼠一抗时，Fc封闭试剂可以替代鼠血清。CD16 + CD32抗体（FRC-4G8）（货号MFCR004）是一个靶向免疫球蛋白gamma复合体Fc的低亲和力受体。

Alignflow™流式细胞仪校微珠是对齐、聚焦、校准流式细胞仪的可靠参考品。Alignflow™微珠的大小、荧光强度高度统一，导致FSC和荧光强度的的变异系数都很低。该微珠的大小、发射波长、荧光强度与很多生物学样本类似，且允许校准流式细胞仪激光光源、光学器件和流量，且不浪费宝贵和敏感的试验材料。2.5 µM和6.0 µM规格可用于蓝色、红色和紫外激光。Alignflow™流式细胞仪校准珠的紫外激光最佳激发范围为350–370 nm，最佳发射范围为400–470 nm，但是也能被紫色激光激发。

细胞分选设置微珠（货号C16506、C16507、C16508和C16509）是用于设置和校准流式细胞细胞分选仪器的可靠标准品。细胞分选设置微珠的大小、发射波长、和强度与很多生物学样本类似，可用于校准流式细胞仪细胞分选系统（包括激光光源系统、光学系统和流体系统）。通过优化微珠，可核对细胞分选设置，例如滴落延时和效率（分选时的细胞损耗）。细胞分选设置微珠可以与紫外、蓝、绿/黄和红激光一同使用。

我们的流式细胞仪大小校准试剂盒含有无荧光微粒大小的校准标准品，能够简便、精确地通过流式细胞仪测定细胞大小。此试剂盒包含了六种悬浮的高度均一的聚苯乙烯微球，直径分别为1.0 µm、2.0 µm、4.0 µm、6.0 µm、10.0 µm和15.0 µm。所有微球悬液以方便的滴管形式提供。此试剂盒通过大小已知的非荧光微球的散射特性，大致测定细胞大小。

同型对照是一抗同型的非靶向抗体，可用作一抗非特异结合的对照。

这些同型对照并不是非特异性结合的最适宜的对照，同型对照的使用正渐渐的离开流式细胞领域。作为替代，可使用未染色细胞确定阴性群体，使用单独染色对照设置补偿，使用减一染色（FMO）对照设置区域和门限。

您可能需要考虑是否有必要使用同型对照。以下是您可能感兴趣的部分参考文献：

• O'Gorman MR, Thomas J. (1999) Isotype controls—time to let go? Cytometry 38:78–80. 
• Keeney M, Gratama JW, Chin-Yee IH et al. (1998) Isotype controls in the analysis of lymphocytes and CD34+ stem/progenitor cells by flow cytometry—time to let go! Cytometry 34:280–283. 
• Hulspas R, O'Gorman MR, Wood BL et al. (2009) Considerations for the control of background fluorescence in clinical flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom 76:355–364.
• Enumeration of Immunologically Defined Cell Populations by Flow Cytometry; Approved Guideline—Second Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute, (CLSI). Document H42-A2 Volume 27 No.16, 2007. 
• Clinical Flow Cytometric Analysis of Neoplastic Hematolymphoid Cells; Approved Guideline—Second Edition. Clinical and Laboratory Standards Institute, (CLSI). Document H43-A2 Volume 27 No. 11, 2007. 

FMO对照（染色减一）是一种采用扣除一个颜色的所有染色组合在来标记细胞或微珠的对照。请针对您的染色组合准备一份FMO对照。这些对照对合理设置您的数据门限很有帮助。

补偿对照仅需未染色的细胞样品（或阴性对照）和单一颜色标记的样品——每管一个。如果您希望单色染色对照如您期望的那么亮,，那么可以使用我们的AbC™总抗体补偿微珠试剂盒（货号A10513和A10497），这试剂盒是将抗体结合到微珠而非细胞上。

需要，您需要为您试验中任何一种颜色设置补偿对照。诸如我们LIVE/DEAD™ Fixable Dead Cell Stain Kits这样的胺基反应染色，您需要使用我们的ArC™ Amine Reactive Compensation Bead Kit（货号 A10346）标记珠子设置补偿对照。对于其他染色，例如细胞周期染色，您需要为您的补偿对照使用标记细胞。

提示：这是一个通用的标记方案，可用作提高您自己试验的指南：

1. 将细胞调整为每毫升1 x 10E7 个细胞
2. 将需要标记的100微升的样品转移到管子里
3. 向细胞添加合适量的抗体（如果没有特定数量可以使用，做一个滴定曲线，例如1.2 μL、2.5 μL、5.0 μL、10 μL、20 μL，并选择分辨率最好的抗议用量）。
4. 轻轻的混合，在冰上孵育15-30分钟。
5. 清洗：添加2 mL的PBS+1% BSA，离心，倒出。
6. 添加2 mL的PBS+1% BSA。
7. 用流式细胞仪分析。

可以向样品中添加内部微球计数的标准品来完成流式细胞仪细胞计数。收集到的微球数量已知体积。这使得您可以计算细胞浓度。

这根据您的仪器。Attune NxT™声波聚焦流式细胞仪使用测定体积注射泵来确保不使用珠子的完全细胞计数。这与使用传统流体力学聚焦调整样品的流式细胞仪形成对比。

无珠细胞能够通过使用DETACHaBEAD™技术的Dynabeads™试剂盒分离得到。这些包括了Dynabeads™ FlowComp™试剂盒和Dynabeads™ CELLection™细胞分离试剂盒。同时，任何阴性分离试剂盒都会产生无珠细胞。

人类细胞

Dynabeads™ FlowComp™ 人 CD4试剂盒（T 细胞）（货号11361D）

Dynabeads™ FlowComp™人CD8试剂盒（T 细胞）（货号11362D）

Dynabeads™ FlowComp™人CD3试剂盒（T 细胞）（货号11365D）

Dynabeads™ FlowComp™人CD14试剂盒（T 细胞）（货号11367D）

Dynabeads™ CD34阳性分离试剂盒（造血祖细胞）（货号11301D）

Dynabeads™ CD4阳性分离试剂盒（T 细胞）（货号11331D）

Dynabeads™ CD8阳性分离试剂盒（T 细胞）（货号11333D）

Dynabeads™ 标准CD4+/CD25+ T 细胞试剂盒（货号11363D）

DETACHaBEAD™ CD19试剂盒（货号12506D）

CELLection™ 上皮细胞富集的 Dynabeads™（货号16203）

Dynabeads™人树状细胞（DC）富集试剂盒（货号11308D）

小鼠细胞

Dynabeads™ FlowComp™小鼠CD4试剂盒（T 细胞）（货号11461D）

Dynabeads™ FlowComp™小鼠CD8试剂盒（T 细胞）（货号11462D）

Dynabeads™ FlowComp™小鼠CD4+CD25+调节性T细胞试剂盒（货号11463D）

Dynabeads™ FlowComp™小鼠Pan T（CD90.2）（货号11465D）

Dynabeads™小鼠Pan T（CD90.2）（货号11443D）

DETACHaBEAD™小鼠CD4试剂盒（T 细胞）（货号12406D）

这取决于您的仪器。人们已经试验了17种颜色（Perfetto SP, Chattopadhyay PK, and Roederer M (2004) Seventeen-colour flow cytometry: unraveling the immune system. Nat Rev Immunol 4:648–655.）或更多，但是这需要很多规划和测试使得其能够起作用。Attune NxT™声波聚焦流式细胞仪可以运行14种颜色，前向和侧向散射，其配备了4种激光（紫、蓝、黄和红）。

关于流式细胞术抗体组合的设计，见我们新的分子探针流式细胞术抗体组合设计工具。抗体组合设计工具可以帮助您经过简单的几步，为您的流式细胞染色组合选择荧光抗体偶联物：选择抗体种属反应性，最多选择14个目标靶标（包括活性染料），选择激光或者您希望观察的荧光。

可以通过流式细胞仪完成以下细胞健康和活力检测：

细胞凋亡检测：

细胞膜不对称性：膜联蛋白V是结构相关蛋白家族一员，其可以在Ca2+存在的情况下结合磷脂。膜联蛋白V可结合多种磷脂，但是对磷脂酰丝氨酸表现出高度的亲和性。磷脂酰丝氨酸主要存在于细胞膜的内部小叶上；然而，在细胞凋亡早期，观测到磷脂酰丝氨酸转移到外部小叶。这个转移使得在含有Ca2+孵育缓冲液存在的情况下，磷脂酰丝氨酸可与膜联蛋白V结合。凋亡中的细胞可以用膜联蛋白V染色，而正常细胞不会被染色。多种偶联不同荧光基团的膜联蛋白V可供选择。

线粒体健康：细胞凋亡早期的典型特征是线粒体紊乱，同时伴随膜和氧化还原电位改变。我们独家提供了大量可通过流式细胞术分析活细胞内的线粒体活性，同时可最大限度避免细胞功能损伤的荧光探针。

线粒体染色的MitoProbe™系列染料（MitoProbe™ DiOC2(3) 检测试剂盒，货号 M34150；MitoProbe™ JC-1检测试剂盒，货号M34152；MitoProbe™ DiIC1(5) 检测试剂盒，货号M34151）为检测细胞凋亡过程出现的线粒体膜电位损失提供了快速、简单和可靠的流式细胞术检测手段。

半胱天冬酶活性： CellEvent™ Caspase-3/7 Green 流式细胞检测试剂盒（货号C10427）支持对凋亡细胞中活化的caspase-3和 caspase-7进行流式细胞术检测。该试剂盒包含新型荧光底物CellEvent™ Caspase-3/7 Green检测试剂和SYTOX™ AADvanced™死细胞染色剂，可靶向识别活化的caspase-3和caspase-7的序列。

DNA片段化：细胞凋亡后期的特征是核形态改变，包括DNA片段化、染色质凝缩、核膜降解，核起泡以及DNA链断裂。凋亡过程中DNA片段出现DNA链断裂，可以通过TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记）检测进行分析。APO-BrdU TUNEL检测（货号A23210）是一种双色检测方法，可通过成像或流式细胞术标记DNA断裂和细胞总DNA，检测细胞凋亡情况。

核染色质凝缩：细胞凋亡后期的特征是核形态改变，包括DNA片段化，染色质凝缩，核膜降解，核起泡以及DNA链断裂。凋亡的细胞表现出核染色质凝结增加。由于核染色质凝结，细胞透过性核酸染色剂发出较高的荧光，从而能够结合传统死细胞染色剂来区分凋亡细胞。

Vybrant™细胞凋亡检测试剂盒#5，Hoechst 33342/Propidium Iodide（货号V13244）基于凋亡细胞染色质的压缩状态的荧光检测，为凋亡提供了一个快速和方便的检测手段。染色质凝结&膜渗透死细胞凋亡试剂盒包含Hoechst™ 33342、YO-PRO™-1以及PI染料, 用于流式细胞仪（货号V23201）检测凋亡细胞中核染色质凝结和质膜通透性的变化。

细胞周期分析：

活细胞检测： Vybrant™ DyeCycle™系列染料为活细胞周期分析提供了稳定的低毒性荧光染料，提供405 nm（货号V35003）、488 nm （货号V35004）、532 nm（货号V35005）或 633 nm（货号V10309和V10273）三种激发峰选择。染料毒性低，染色的细胞可储存和培养，或进行功能分析。

固定细胞检测：用FxCycle™ Violet染色剂（货号F10347）、SYTOX™ AADvanced™ 死细胞染色试剂盒（货号S10349）或FxCycle™ Far Red染色剂（货号F10348）分析细胞周期，为简单固定的细胞周期分析提供了多色选择。

细胞增殖：

染料稀释检测细胞增殖：染料稀释检测细胞增殖依赖细胞膜透过性荧光分子。染料进入到细胞后，共价结合蛋白质的氨基基团，导致染料长期保留在细胞中。通过随后的细胞分裂，每个子代细胞大约会分到亲代一半的荧光。采用流式细胞仪对细胞群的荧光强度进行分析，可以某个细胞或细胞群自标记之后的增殖情况，判定其传代次数。CellTrace™荧光染色剂可在不影响细胞形态和生理功能的条件下，在体内或体外追踪传代情况。目前尚未发现该染色剂对细胞增殖活性或细胞生物学功能有影响。染色后，染料可在细胞内稳定保留若干天。可用于流式细胞仪的试剂盒包括CellTrace™ CFSE细胞增殖试剂盒（货号No. C34554）CellTrace™ Violet细胞增殖试剂盒（货号 C34557）和CellTrace™ Far Red细胞增殖试剂盒（货号 C34564）。

DNA合成检测：测定新合成的DNA是准确分析某个细胞或细胞群细胞增殖情况的方法。基于DNA合成的细胞增殖检测可根据掺入的修饰核苷，测定DNA合成速率。Click-iT™ Plus EdU细胞增殖检测利用了click化学试剂和修饰的核苷EdU，为BrdU染色提供了出色的替代方法，可用于检测和定量新合成的DNA数量。Pacific Blue（货号C10636）、Alexa Fluor™ 488（货号C10632和C10633）和Alexa Fluor™ 647（货号C10634和C10635）可用于Click-iT™ Plus EdU细胞增殖检测。

活力检测：

死细胞很容易与很多试剂非特异性结合，从而给出假阳性结果。因此，从流式细胞仪数据中排除死细胞，是有助于确保结果和分析准确性的关键步骤。

不能固定膜通透染色剂：SYTOX™死细胞染色剂（货号S34857、S34860、S34861、S34859和S34862）不能穿过完整的细胞膜，与dsDNA结合后发出更强的荧光，从而成为我们最明亮的几种死细胞染色剂之一。非细胞通透性的经典DNA结合染料包括碘化丙啶（货号P21493）和7-AAD（货号A1310）。这两种染料已经被广泛用于流式细胞仪活性分析。CellTrace™钙黄绿素AM染料可被动运输进入到贴壁和非贴壁细胞。这些细胞通透性酯酶底物可作为测定酶活性（激发荧光的必要条件）和细胞膜完整性的（在胞内保留荧光产物的必要条件）的活力探针。目前供应的蓝色（货号 C34853）、紫色（货号C34858）和绿色（货号C34852）荧光染料是活细胞短时染色的理想染料，且可用于多重流式细胞术试验。

可固定细胞活性染色剂：LIVE/DEAD™可固定死细胞染色剂是可固定的细胞活性染料，有助于准确评估固定和/或通透后样品中细胞活性。LIVE/DEAD™固定死细胞染色试剂盒基于荧光活性染料与细胞蛋白（胺基）的反应。这些染料不能透过活细胞膜，因此仅仅细胞表面蛋白可和染料反应，导致染色暗淡。活性染料可以透过死细胞损毁的细胞膜，将内部和外部的胺基染色，导致更加强烈的染色效果。LIVE/DEAD™固定死细胞染色试剂盒可提供八单通道颜色，适用于三种包装规格的UV、405、488、532、561或633 nm激光，可满足您的试验需要。

• 钙流：每一种Oregon Green™钙指示剂都可通过更高的亲和力结合胞内钙离子，提供适合很多应用的灵敏度范围。Oregon Green™探针在Ca²⁺静息水平下发射绿色荧光；Ca²⁺浓度增加时，荧光强度会增加14倍。细胞通透配方（货号O6807）能加入到细胞培养基中并与流式细胞仪兼容。
• 基于罗丹明的钙离子指示剂包含了大量不同的探针，用于探测Ca²⁺浓度的大小变化。该指示剂与钙离子结合后，会发出50倍增强的荧光。这一类波长范围的荧光可与GFP或绿色荧光染料结合，用于多重检测应用。Rhod-2, AM（货号R1245MP）专门靶向线粒体，可与流式细胞仪联用。
• 膜电位：细胞凋亡初期的典型特征是线粒体紊乱，伴随着膜和氧化还原电位变化。我们提供一系列专门用于流式细胞术活细胞线粒体膜电位分析的产品，可最大限度避免影响细胞功能。对于细胞凋亡过程出现的线粒体膜电位损失，MitoProbe™系列线粒体染色剂（货号M34150、M34151和M34152）可提供快速、简单和可靠的流式细胞术检测方法。MitoTracker™染料（货号M7510和M7512）是用于染色活细胞内的线粒体的膜电位依赖型探针。在之后的流式细胞免疫化学、DNA末端标记，原位杂交或复染色步骤中，MitoTracker™染料的染色图案全程保留。相比于只依赖线粒体膜电位的检测方法，线粒体通透性转移孔检测体系（货号M34153）可直接测定通透性转移孔开合情况。线粒体通透性转移孔（MPTP）是一个由线粒体内膜和外膜成分构成的非特异性通道。在细胞死亡过程中，此通道显现，参与线粒体成分释放。
• 吞噬作用：在吞噬过程中，细胞内吞微粒（如微生物）。此过程对于免疫应答非常重要，同时对清除凋亡细胞也非常重要。研究吞噬作用的探针包括BioParticles™指示剂——用荧光标记的细菌和酵母。
• 使用淬灭/洗涤检测法来追踪吞噬过程能够表征简单的摄入，或利用一种pH指示剂监视吞噬途径的各个阶段。我们提供pHrodo™ Red或Green（货号A10010、P35361、P35364、P35365、P35366和P35367）标记的免洗检测体系和全血的免洗检测体系（货号A10025、A10026、P35381和P35382），都适用于流式细胞仪。
• pH改变：可使用荧光强度或比率计测定法测定生理学范围内的细微pH变化。pHrodo™ 染料（货号P35373和P35372）提供了pH2-9之间的信号强度调制，同时可以选择各种荧光波长。荧光右旋糖酐内吞示踪是分析细胞区室pH变化的常用方法。pHrodo™染料的右旋糖酐偶联物（货号P35368和P10361）可用于区分从早期的核内体到溶酶体在内的各种囊泡，不需要洗涤和淬灭，是最完整的解决方案。
• 活性氧：处于环境压力下的细胞通常含有超高水平的活性氧（ROS）。CellROX™试剂是为检测和定量活细胞中的ROS而开发的荧光探针。这些细胞通透性试剂在还原态时不发荧光或发微弱的荧光；在被氧化后，就发出明亮的荧光且依旧位于细胞内。我们提供已通过流式细胞术验证的CellROX™ Green（货号C10492）CellROX™ Orange（货号C10493）和CellROX™ Deep Red（货号C10491）检测试剂盒。

可以。流式细胞仪可用于：

• 计数检测：用于流式细胞仪的细菌计数试剂盒（货号B7277）或LIVE/DEAD™ BacLight™细菌活性和计数试剂盒（货号L34856）
• 活性/活力检测：LIVE/DEAD™ BacLight™ 细菌活性试剂盒（货号 L13152）
• 膜电位：BacLight™细菌膜电位试剂盒（货号B34950）
• 酵母活性/活力实验：用于流式细胞仪（货号L34952）的LIVE/DEAD™ FungaLight™酵母活性试剂盒，FungaLight™酵母CFDA, AM/碘化丙啶活力试剂盒（货号F34953）。