标记化学支持 – 问题排查

不尽然。当太多的染料附着在分子上，产生染料间的淬灭，可能就会观测到低水平的荧光输出。同时，如果荧光团偶联到不适于其荧光输出的微区域或附近时，也会导致低荧光。这种现象更易发生在环境敏感型染料中，但是也会出现在非环境敏感型染料中。例如，偶联太靠近芳香族氨基酸或一串芳香族氨基酸，或者偶联太靠近一些碱基会导致淬灭。

标记程度（DOL）测定有助于估计真正偶联到分子上的染料水平，并帮助解决导致信号强度低的问题。

其他反应后纯化方法包括亲和树脂层析、透析、滤膜离心柱、HPLC、TLC、毛细血管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。所有通常用于纯化您的目的分子的方法都可能用于纯化标记后的分子，但是需要考虑到标记可能会改变最终的偶联分子的分子量或电荷情况。

您改变了自己的分子属性 – 如给赖氨酸残基加了一个大体积染料，给羧基加了生物素，或用疏水的交联剂标记了硫醇 - 把一个基团（氨基、硫醇、羧基等）的功能换成了附着其上的标记物的性能。

当结合大量分子标记时，常常会出现这种现象。可降低标记与分子的摩尔比，限制结合的标记分子数量。