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我们总结了一系列要点提示和技巧并建立了一个详细的知识库,以满足您的各类科研需求,助您优化试验,获得最理想的结果。

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概述

我们提供用于脑冰冻切片染色的BrainStain™ 成像试剂盒(货号B34650)。该试剂盒能够通过单次20分钟染色步骤,对脑冰冻切片中的髓鞘、神经元以及细胞核进行三色标记。

固体和结晶形式的DiI以及其他相关染料(货号D282,D3911,D7757,和D12731)有时与一个特定的神经元接触,通过膜侧向扩散染上整个细胞。此外,我们的NeuroTrace™组织标记糊剂也可挑到针上,置于特定的神经元上。

有关我们的神经元细胞标记方法的比较结果请参阅下表。

产品

标记方式

标记强度

特征

神经元特异性抗体

针对神经细胞表达蛋白的一抗。

与蛋白质表达量成比例。

唯一的神经元特异性标记方式。

亲脂性神经元示踪剂

疏水性染料掺入到细胞中的脂质。

由于细胞中含有大量的脂类,这种标记方式能提供最强的标记。

能够跟踪整个样品的神经元。

荧光标记的右旋糖苷

通常右旋糖苷采用显微注射。

所有的细胞质可能被标记,标记密度可能会更高。

能够标记单个神经元,从而避免了荧光背景干扰。

膜电位指示剂

染料通过水性缓冲液上样到活细胞里。

取决于周围电场引起的结构变化,或者去极化引起的染料流入。

膜电位的变化在各种生理进程中发挥核心作用,包括神经脉冲波传播,肌肉收缩以及细胞信号传导过程。

要考虑的因素有示踪对象的大小、给样方式(注射,直接上样到组织等),示踪对象是否需要固定。以下链接详细介绍了我们提供的各类神经元示踪剂的详细信息以及选择方法:

神经元特异性抗体

请注意,只有抗神经元蛋白抗体是针对神经元细胞的。我们提供GFAP 、HuC/HuD、NMDA受体,突触蛋白I以及许多其他抗神经元蛋白抗体。更多信息以及我们的一抗搜索工具链接如下:

亲脂性神经元示踪剂

请选择与您现有的激发光源和发射滤光片组/通道兼容的染料。固体、糊和晶体形式的染料可直接施加到组织中的神经元。如需标记培养的细胞或进行显微注射,可采用溶液或固态形式的亲脂性染料。

转运过程相当缓慢:在活体组织中大约6 mm/天,在固定组织中更慢。亲脂性羰花青示踪剂从开始给样处扩散到神经元末端,可能需要数天甚至数周的时间。FAST DIO和DiI类似物(具有不饱和烷基尾)可以提高50%左右的转运速度。

右旋糖酐神经元示踪剂

NeuroTrace™ BDA-10,000 神经元示踪试剂盒(货号N7167)手册有一个 使用10,000 MWlysine-fixable biotin dextran amine(BDA)进行注射操作及神经元跟踪的实验方案。该试验方案也适用于其他荧光标记的右旋糖酐。

请参阅第4和5页的表1a和1b。

我们已使用过3000至70,000分子量右旋糖酐,但3000至10000分子量右旋糖酐最常用于神经元示踪。3000 分子量的右旋糖酐用于对精细神经传递进行更详细的跟踪、研究间隙连接,并且扩散更快;而10000MW右旋糖酐具有较慢的分散速度、较长的胞内存留时间,且不会不穿过间隙连接。

我们没有测定右旋糖酐偶联物的净电荷。净电荷取决于标记右旋糖酐所用的荧光团和制备偶联物所采用的方法。我们根据所用的荧光团将右旋糖酐标记为中性的或阴性的,但是染料和右旋糖酐的净电荷可能并不总是相同。Alexa Fluor™、Cascade Blue™、荧光黄、荧光素和Oregon Green™右旋糖苷本质上是阴性的,而大多数标记两性离子罗丹明 B、四甲基罗丹明和Texas Red™染料的右旋糖酐基本上是中性的。

极性神经元示踪剂

Lucifer Yellow CH是一个酰肼,所以我们任一Alexa Fluor™或荧光标记的酰肼产品都适于此用途。此类产品的清单请见此处

麦胚凝集素和霍乱毒素偶联物可以用于逆向示踪。它们在某些应用中可能会有一些顺向示踪。选择指南可以在这里找到。

膜电位指示剂

在周围电场的作用下结构变化的分子可用作检测瞬时(毫秒级)电位变化的快反应探针。慢反应染料则会进入去极化细胞,结合蛋白或膜。增强去极化会造成额外的染料流入,增强荧光强度;过极化的特征则是荧光强度下降。快反应探针通常用于完整心脏组织的电位活动成像,或测量药理刺激引起的膜电位变化。慢反应探针常用于探索线粒体功能和细胞活力。

神经元荧光成像试剂

这些染料是保密的,但它们是标记Nissl物质的染色剂。Nissl物质由与粗面内质网相关的核糖体RNA构成,并大量存在于神经元细胞中。 

我们只在小鼠脑冰冻切片上测试过,但是有文献指出NeuroTrace™ Nissl 染色剂可染色石蜡切片。

它们是保密的脂质染料,可染色髓鞘,但并非特异性针对神经元。

我们只在小鼠脑冰冻切片上测试过。

我们只在小鼠脑冰冻切片上测试过。它们可能可以染培养的神经元,但也很可能染到细胞膜,并且可能出现一定的染料内吞现象。髓鞘的荧光强度可能更强。

BrainStain™成像试剂盒能够通过一个20分钟的染色步骤对脑冰冻切片中的髓鞘、神经元和核酸进行三色染色。它包括FluoroMyelin™ 绿色染料,NeuroTrace™ 530/615 红色荧光Nissl染色剂以及用于细胞核染色的DAPI。

神经元健康

可采用PrestoBlue™细胞活力染色剂和CyQUANT™细胞增殖检测试剂盒。我们还提供神经突生长染色试剂盒(货号A15001)。更多有关我们的神经元细胞健康检测试剂的信息请见此处

不是,该细胞活力染料和膜染色剂可以对任意类型的细胞进行染色。其他有关神经突生长染色试剂盒的常见问题解答请见此处