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Mitotracker™染料应在染色之后立即成像,因为随着时间的推移,这些染料可能会产生毒性。
与许多其它细胞相比,神经元转导更为困难。提高转导效率的主要方法是采用更多数量的病毒颗粒标记细胞。对于原代神经元,在铺盘时转导要比已培养细胞转导效果更好。此外,蛋白的表达在神经元中发生较慢,表达高峰通常发生于2-3天后而非转导后16小时。
DiI是一种亲脂性染料,多数保留在细胞脂质内。当细胞经去垢剂通透或是用乙醇固定时,会去除掉脂质和染料。如果需要通透,可以使用CM-DiI标记,因为CM-DiI会共价结合膜里面的蛋白;部分信号会随着固定/通透丢失,但残留的信号仍足以被检测出。
由于这些染料插入脂质膜,任何对膜的破坏都将导致染料流失。这包括用Triton™ X-100之类的去垢剂或是甲醇之类的有机溶剂通透。通透是胞内抗体标记所必需的,但它会导致染料流失。相反,CFDA SE之类活性染料能够共价连接到细胞组分,因此可以在固定和通透之后更好的保留。
FluoroMyelin™是脂质染料,任何脂质都可以被其染色。髓鞘中脂质含量更高,因而其染色程度要比其他膜成分更强烈。
观察到这两种类型的运输是生物胞素的典型特征。带有标记的霍乱毒素B类的产品只进行逆向运输。
以下是我们的建议:
如果必须进行通透,可以使用共价连接膜里面蛋白的染料,如CellTracker™ CM-DiI。如果使用不与膜里面蛋白共价结合的亲脂性染料进行通透,染料会随着通透去垢剂洗去的脂质一起丢失。
如果您选择的示踪剂是亲脂性染料并且用甲醇固定,脂质会随着甲醇流失。如果您使用甲醇固定,可以选择能够共价结合神经元内的蛋白质的示踪剂。
请确保您使用的是葡聚糖是可固定形式(即包含伯胺)。不包含伯胺的葡聚糖将无法固定。另一个原因可能是葡聚糖的浓度过低,其使用浓度可以增加到10 mg/mL。
如果您想看到最精细的结构,应使用低分子量葡聚糖偶联物,例如3,000 MW葡聚糖偶联物。
如果使用我们的FluoVolt™ 膜电势试剂盒(货号F10488),该试剂盒包含一种背景抑制剂,可改善这一问题。对于其他指标剂,可以考虑使用BackDrop™ 背景抑制剂(货号R37603、B10511和B10512)。
我们的NeuroTrace™ Nissl 染色剂可标记Nissl底物——该底物由与粗面内质网相关的核糖体RNA构成,并大量存在于神经元中。这些染料并非完全特异性靶向神经元,但由于神经元蛋白质的合成水平高而对神经元选择性染色。在某些情况下它们可能会对其他类型细胞(如神经胶质细胞)染色,所以你可能需要降低染色浓度以获得更具选择性的神经元标记效果。对于神经元染色,我们建议的稀释范围是20到300倍。
仅限研究用途,不可用于诊断操作。