纳米晶支持 - 入门

Qdot™纳米晶由四个基本层组成，从内核到外壳依次为：

1. 晶核（CdSe或CdSeTe）：决定了Qdot™纳米晶的颜色
2. 无机层（ZnS）：用于提高Qdot™纳米晶的亮度和稳定性
3. 有机/聚合物涂层：提供水溶性和/或用于偶联的官能团
4. 生物分子：共价结合到聚合物层，包括免疫球蛋白、链霉亲和素、受体配体或寡核苷酸。

Qdot™纳米晶及其生物偶联物非常适合需要长时间光稳定性、单一激发、多色分析的实验。部分应用示例包括：

• 流式细胞术
• 细胞和组织染色
• 细胞示踪
• WesternDot™蛋白免疫印记
• 活体成像

我们提供氨基（PEG）、羧基和链霉亲和素官能化的Qdot™ Innovator’s Tool Kit ITK™ 纳米晶用于偶联自己感兴趣的蛋白或其它生物分子。其中氨基（PEG）衍生形式的纳米晶可以与异硫氰酸盐和琥珀酰亚胺酯偶联，或使用水溶的碳化二亚胺结合羧酸。羧基衍生形式的纳米晶能够结合到蛋白质和修饰的寡核苷酸的氨基基团上。链霉亲和素衍生形式的纳米晶则能够结合生物素化的偶联物来形成稳定的标记复合物。

你可以在两种FRET情况下使用Qdot™纳米晶：

• Qdot™纳米晶作为供体而荧光染料作为受体
• 镧系元素（铽、铕等）作为供体而Qdot™纳米晶作为受体

注意：不得在FRET实验中同时将Qdot™纳米晶作为供体和受体。

Qdot™纳米晶在pH6–9的范围内最稳定，最低至pH 5。由于可能存在自聚集，Qdot™纳米晶不能在pH > 9的条件下使用，并且不能在pH < 4的条件下使用，否则聚合物和暴露的核/壳就会开始分离。关于更多详情和pH推荐范围，详见Qdot™ 纳米晶的pH范围。

当在4℃下存储时，Qdot™纳米晶可稳定6个月。由于可能发生聚集，Qdot™纳米晶绝对不能冷冻。关于最高360°C暴露温度的信息见温度稳定性。

亲水性的Qdot™纳米晶在pH 8.3–9.0的硼酸盐缓冲液中储存和运输，而有机Qdot™纳米晶则在癸烷中储存和运输。我们研究过Qdot™纳米晶在多种不同溶剂中的稳定性，更多信息详见溶剂稳定性。

Qdot™纳米晶不会像化学染料那样光漂白或褪色，不需要使用抗淬灭剂。根据我们的研究，Qdot™纳米晶适合用下列封固液：

• HistoMount™封固液（货号：00-8030），非常适合长期保存
• Cytoseal™ 60封固液
• Clarion™封固液
• 大多数基于聚乙烯醇的封固液（有限储存时间，<数周）
• 基于水的封固液（有限储存时间，<1周）
• 至多50%的甘油（有限储存时间，<1周）

提示：我们不推荐ProLong™封固液与Qdot™纳米晶一同使用。

可以，您可以使用标准滤光片来观察Qdot™纳米晶；可以使用低于发射波长的任何波长激发它们。切记，激发光波长越短，Qdot™纳米晶发出的荧光越亮。

每个Qdot™ ITK™纳米晶大约有80–100官能团。我们使用一种免疫吸附测定方法来测定每种偶联物的EC₅₀。

ITK™ Qdot™纳米晶使用第一代Qdot™产品中外层聚合物的经典组成；除了氨基-PEG产品，外层聚合物不含有PEG。标准Qdot™纳米晶的外层聚合物含有PEG。

偶联到一个Qdot™纳米晶上的分子的数量取决于偶联过程中使用的纳米晶与偶联分子的比率，Qdot™纳米晶上可用的结合位点数量，以及Qdot™纳米晶和目标分子的大小。总的来说，每个Qdot™纳米晶上含有2-3个抗体，4-5个生物素分子，6-8个链霉亲和素分子。

Qdot™ 605链霉亲和素偶联物在一系列不同pH的缓冲液中都有稳定的发射峰。在工作浓度下，这些材料在pH 6-9 （超出此范围没有研究）范围内的Tris、HEPES,、磷酸盐和硼酸盐缓冲液中，量子产率和胶体分布都非常稳定。工作浓度下，Qdot™ 605链霉亲和素偶联物在高达200 mM的NaCl缓冲液中是稳定的和非聚集的。在稀释工作液中，高浓度盐可能会导致微观沉淀，但不会引起材料大量沉淀。另外，若干表面活性剂和添加剂例如Tween™ 20、Triton™ X-100、Pluronic™ F-68、NDSB-201和EDTA等，在0.05%浓度时不会对荧光造成影响。与此相反，发现明胶和葡聚糖硫酸酯在0.05%浓度都可促进Qdot™ 605链霉亲和素偶联物聚集，因此在标记应用中应该避免使用。总的来说，我们建议以运输的浓度来储存Qdot™ 605链霉亲和素偶联物而不是高度稀释后保存。在稀释工作液中储存材料超过一段时间可能会导致性能下降。尽管我们并没有在多种缓冲液中表征其它Qdot™偶联物的稳定性，我们预期稳定性相似。

Qdot™偶联物在非优化的缓冲液中会与样本发生更高程度的非特异性结合。我们在多种不同的缓冲液中，包括TBS、PBS、RPMI培养基等，都可获得成功的染色结果，但是发现在孵育缓冲液中的染色结果是最稳定的。

我们没有研究过Qdot™纳米晶的毒性。这种材料是以2 mM总Cd浓度的溶液提供的。我们已经在多种活细胞的体外标记实验中证明这些材料的用途，但是还没有研究这些材料对人类、动物、或培养细胞毒性的系统数据。

Qdot™产品含有无机晶体形式的镉和硒（大颗粒中含有碲）。对于处理这些材料，我们只能建议您按照所有合适的当地的、州的和联邦条例来处理这些材料。关于这些材料成分的更多信息，查询材料安全数据登记表（Material Safety Data Sheet）。

我们没有系统地研究纳米晶的能量转移性质，尽管纳米晶可能作为能量转移的供体和受体。我们已经研究了通过双生物素交联剂相互偶联的Qdot™ 605链霉亲和素偶联物的荧光性，且发现任何浓度的生物素交联剂都不会影响交联后的纳米晶的发射强度。这些结果表明Qdot™偶联物粒子间的淬灭可以忽略。