量子点支持 – 问题排查

在正常的储存过程中可能偶然会观察到少量Qdot™纳米晶聚集。为了在使用前去除这些聚合物，我们建议在2,000 x g下离心1分钟。仅吸取上层清液并避免吸到沉淀。根据我们的经验，沉淀聚集物通常仅会导致10%以下的产品损耗。

一旦产品形成聚集，就无法重新分散到溶液内。我们建议重新购买。

冷冻会导致产品聚集。一旦聚集后就不能重新分散到溶液内。

选择合适的封固液对保持Qdot™纳米晶荧光性能至关重要。根据我们的研究，Qdot™纳米晶适合用下列封固液：

• HistoMount™封固液（货号00-8030），非常适合长期保存
• Cytoseal™ 60封固液
• Clarion™封固液
• 大多数基于聚乙烯醇的封固液（有限储存时间，<数周）
• 基于水的封固液（有限储存时间，<1周）
• 至多50%的甘油 （有限储存时间，<1周）

注：我们不推荐ProLong™封固液与Qdot™ 纳米晶一同使用，因其会导致Qdot™发生荧光淬灭。

闪烁是量子点固有的性质；实际上，所有的单一发冷光的分子都会闪烁，包括有机染料。由于其亮度和光稳定性，Qdot™纳米晶的闪烁显得更加明显。激发能量越高，Qdot™纳米晶闪烁甚至更快。使用Beta-巯基乙醇可以减少闪烁。

有机ITK™ Qdot™纳米晶中有一定几率会析出白色沉淀。ITK™ Qdot™纳米晶有时候会含有呈白色沉淀状的杂质。

在3,000 rpm下离心ITK™ Qdot™纳米晶3-5分钟，可以从上清中去除白色沉淀，之后就可以直接使用上清了。

部分建议如下：

• 使用Qdot™ 孵育缓冲液（货号Q20001MP）
  内附的缓冲液具有特殊配方，在大多数使用Qdot™链霉亲和素偶联物免疫标记应用中，均可提高信噪比。其它缓冲液可能会导致更多的不均匀着色，并且尤其可能增加背景着色。然而，一些特别的应用可能会需要其他缓冲液条件。请参见实验方案“使用Qdot™链霉亲和素偶联物进行双重标记”（Double-labeling Using Qdot™ Streptavidin conjugates.）。
• 确定样品是否含有高水平的内源性生物素。对样本进行亲和素-生物素预封闭
  如果使用Qdot™孵育缓冲液却依然得到较高的非特异性背景信号，则可能必须检查操作流程中的其他步骤。用BSA或正常动物血清封闭样品可以降低抗体和Qdot™链霉亲和素偶联物的非特异性结合。最好的做法是使用封闭缓冲液稀释您的一抗和二抗。另外，肝脏和肾脏等组织的切片可能含有内源性生物素，其可能产生非特异性信号。内源性生物素能够用亲和素/生物素封闭试剂盒（货号E21390）封闭。
• 背景中出现染色颗粒或块状荧光物质
  随着时间推移，Qdot™孵育缓冲液中的BSA偶尔会轻微聚集。在使用Qdot™链霉亲和素偶联物标记样品前必须移除这些聚集物。添加到样品前，可通过离心将孵育混合液中的聚集物沉淀下来。将样品在台式离心机（Eppendorf 5415）中5,000 x g离心2分钟来完成此过程。在将孵育混合液添加到样品中前，也可将其通过0.2 µm的滤膜离心柱以去除微观沉淀。如果你使用Qdot™孵育缓冲液之外的其它缓冲液，往往会导致孵育缓冲液中的NaCl或其他盐浓度过高，可能很难通过过滤法解决。在这种情况下，须减少整体盐浓度。
• 优化生物素化的二抗工作浓度
  调节染色过程中所用的生物素化抗体水平，能够帮助优化特异性信号。为实现特异性标记，必须要提供较高水平的生物素化抗体，但抗体水平过高又会导致抗体与样品发生非特异性结合。Qdot™链霉亲和素偶联物会连接到非特异性结合的生物素化抗体上，导致较高的背景染色。
• 优化Qdot™链霉亲和素偶联物的工作浓度
  正如免疫标记应用中，滴定一抗和二抗是维持最佳的特异信号的必备条件，应该对每个种偶联物都应该优化其工作浓度。总的来说，等于或轻微低于饱和浓度的情况下可获得最佳的信噪比，相反，当高于饱和浓度时将会导致背景信号升高。