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세포 및 유전자 치료를 위한 AAV생산
CTS AAV-MAX Helper Free AAV 생산 시스템
보완적 연구 및 cGMP-제조 AAV-MAX 솔루션을 이용해 임상 단계로 향하는 길을 가속화하십시오. 하나의 완전한 AAV 생산 시스템으로서 연구 단계부터 임상 및 상업적 생산에 이르기까지 전환이 용이해집니다.
연구 & 개발 → 전임상 → 임상 및 상업적 생산
그림 1. CTS AAV-MAX Helper Free AAV Production System의 구성 요소
RUO 및 CTS AAV-MAX 생산 시스템의 비교
AAV-MAX Helper-Free AAV 생산 시스템을 통해 발견 단계부터 연구 및 상업적 개발 제조에 이르기까지 전환이 편리하며, 연구 등급 및 cGMP 제조 시약 옵션을 갖춘 최적화되고 확장 가능한 하나의 플랫폼을 제공합니다. 그림 2는 두 가지 혈청형을 이용한 CTS 및 RUO 시스템의 등가성을 보여줍니다.
그림 2. 연구 등급(RUO)과 CTS 시약 간의 AAV 역가 비교. AAV serotype AAV2 및 AAV6은 125mL shake flask에서 30mL 생산 규모로 생산되었습니다. RUO 및 CTS AAV-MAX 시스템 시약의 성능은 바이러스 역가로 측정한 것과 동일한 것으로 나타났습니다. 역가는 qPCR로 측정되었습니다.
| 속성 | AAV-MAX(RUO) | CTS AAV-MAX |
|---|---|---|
| 용도 | 연구 전용 | 세포, 유전자 또는 조직 기반 제품의 제조 또는 연구용 |
| 카탈로그 포장 크기 | 1-10 L 생산 규모 | 1–100L 생산 규모 |
| 조성 | 동일 (배지에 GlutaMAX 보충 필요) | 동일 (배지에 GlutaMAX 포함) |
| 성능 | 동일 | 동일 |
| 생산자 세포주 |
|
|
| 규제 지원 문서 | 없음 |
|
| GMP 제조 | ISO 90001 또는 ISO 13485 인증 현장에서 제조됨 | 의료 기기에 대한 GMP, 21 CFR Part 820, USP<1043> 및 Ph Eur 5.2.12를 준수하여 제조되었습니다. ISO 13485 인증을 받은 현장에서 제조됨 |
CTS AAV-MAX Helper Free AAV Production System의 구성 요소
CTS 바이러스 생산 세포(VPC) 2.0
- 클론, 293F 유래, 고생산 세포주
- 화학적으로 정의된 배지의 고밀도 suspension 배양(>12 x 106cells/mL)에 최적화
- SV40 대형 T 항원 또는 유전 공학 없음
- 강력한 확장성 및 통로 안정성
- 문서화, 21 CFR 211 및 EudraLex, Volume 4에 따라 cGMP 은행 제조, ICH Q5A 및 ICH Q5D 지침에 따라 특성화
그림 3. Viral Production Cell 2.0 은 여러 통로를 통해 유사한 성장 프로파일을 유지합니다. 세포는 Viral Production Medium에서 배양되었고 배양 생존력 및 VCD는 4일차 ~ 7일차 세포 시딩 후에 측정하였습니다.
배지
- CTS Viral Production Medium
- 동물 유래 성분 무함유
- 화학적으로 정의됨
- 단백질 무함유
- 페놀 레드 무함유
- 최대 100L까지의 포장 크기로 기성 제품 이용 가능
- Advanced Granulation Technology (AGT) 형식
- Granular dry media 형식
- 동물 유래 성분 무함유
- 화학적으로 정의됨
- 단백질 무함유
- 페놀 레드 무함유
- 최대 100L까지의 포장 크기로 기성 제품 이용 가능
- AGT 과립은 빠르게 용해되고 pH 및 삼투질 농도에 맞게 사전 조정됨
그림 4. CTS Viral Production Medium은 다양한 규모의 세포 배양에서 추가적인 영양 지원 없이 7일 동안 고밀도의 VPC 2.0의 강력한 성장을 지원합니다. VPC2.0은 각 크기의 배양균에서 0.5 x 106 cells/mL로 배양되기 시작했으며 Vi-Cell XR을 사용하여 7일 동안 성장을 측정합니다. Corning사의 제품인 5L shake flask를 제외한 사용된 모든 shake flask는 Nalgene(Thermo Fisher Scientific)의 제품이었습니다.
형질주입 및 생산
- CTS AAV-MAX 형질주입 시약 및 형질주입 부스터(AOF, CD)
- CTS AAV-MAX Enhancer(AOF, CD)
- CTS Viral-Plex ™ Complexation Buffer(AOF, CD, 단백질 무함유)
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그림 5. Enhancer를 추가한 AAV 생산 및 enhancer를 추가하지 않은 AAV 생산의 결과 Enhancer는 형질 주입일에 3 x 106 cells/mL로 준비된 VPC 2.0에 추가되었습니다(T = 0). 형질주입의 경우 GFP=expressing transfer plasmid및 helper plasmid가 각각의 Rep/Cap plasmid와 함께 사용되었습니다. 형질주입 72시간 후 AAV-MAX Lysis Buffer를 37°C에서 2시간 동안 AAV를 수확하기 위해 바로 배양균에 추가하였으며, 이어서 qPCR을 통한 AAV 역가 측정을 수행하였습니다. 데이터는 enhancer를 이용한 AAV 생산의 역가(vg/mL)로 normalize되었습니다.
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그림 6. 형질주입 중 부스터 추가 및 추가하지 않은 AAV 생산의 결과 형질주입의 경우 GFP-expressing transfer plasmid 및 helper plasmid가 각각의 Rep/Cap plasmid와 함께 사용되었습니다. 형질주입 72시간 후 AAV-MAX Lysis buffer를 37C에서 2시간 동안 AAV를 수확하기 위해 바로 배양균에 추가하였으며, 이어서 qPCR을 통한 AAV 역가 측정을 수행하였습니다. 데이터는 부스터를 이용한 AAV 생산의 역가(vg/mL)로 normalize되었습니다.
CTS 바이러스 생산 세포(VPC) 2.0
- 클론, 293F 유래, 고생산 세포주
- 화학적으로 정의된 배지의 고밀도 suspension 배양(>12 x 106cells/mL)에 최적화
- SV40 대형 T 항원 또는 유전 공학 없음
- 강력한 확장성 및 통로 안정성
- 문서화, 21 CFR 211 및 EudraLex, Volume 4에 따라 cGMP 은행 제조, ICH Q5A 및 ICH Q5D 지침에 따라 특성화
그림 3. Viral Production Cell 2.0 은 여러 통로를 통해 유사한 성장 프로파일을 유지합니다. 세포는 Viral Production Medium에서 배양되었고 배양 생존력 및 VCD는 4일차 ~ 7일차 세포 시딩 후에 측정하였습니다.
배지
- CTS Viral Production Medium
- 동물 유래 성분 무함유
- 화학적으로 정의됨
- 단백질 무함유
- 페놀 레드 무함유
- 최대 100L까지의 포장 크기로 기성 제품 이용 가능
- Advanced Granulation Technology (AGT) 형식
- Granular dry media 형식
- 동물 유래 성분 무함유
- 화학적으로 정의됨
- 단백질 무함유
- 페놀 레드 무함유
- 최대 100L까지의 포장 크기로 기성 제품 이용 가능
- AGT 과립은 빠르게 용해되고 pH 및 삼투질 농도에 맞게 사전 조정됨
그림 4. CTS Viral Production Medium은 다양한 규모의 세포 배양에서 추가적인 영양 지원 없이 7일 동안 고밀도의 VPC 2.0의 강력한 성장을 지원합니다. VPC2.0은 각 크기의 배양균에서 0.5 x 106 cells/mL로 배양되기 시작했으며 Vi-Cell XR을 사용하여 7일 동안 성장을 측정합니다. Corning사의 제품인 5L shake flask를 제외한 사용된 모든 shake flask는 Nalgene(Thermo Fisher Scientific)의 제품이었습니다.
형질주입 및 생산
- CTS AAV-MAX 형질주입 시약 및 형질주입 부스터(AOF, CD)
- CTS AAV-MAX Enhancer(AOF, CD)
- CTS Viral-Plex ™ Complexation Buffer(AOF, CD, 단백질 무함유)
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그림 5. Enhancer를 추가한 AAV 생산 및 enhancer를 추가하지 않은 AAV 생산의 결과 Enhancer는 형질 주입일에 3 x 106 cells/mL로 준비된 VPC 2.0에 추가되었습니다(T = 0). 형질주입의 경우 GFP=expressing transfer plasmid및 helper plasmid가 각각의 Rep/Cap plasmid와 함께 사용되었습니다. 형질주입 72시간 후 AAV-MAX Lysis Buffer를 37°C에서 2시간 동안 AAV를 수확하기 위해 바로 배양균에 추가하였으며, 이어서 qPCR을 통한 AAV 역가 측정을 수행하였습니다. 데이터는 enhancer를 이용한 AAV 생산의 역가(vg/mL)로 normalize되었습니다.
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그림 6. 형질주입 중 부스터 추가 및 추가하지 않은 AAV 생산의 결과 형질주입의 경우 GFP-expressing transfer plasmid 및 helper plasmid가 각각의 Rep/Cap plasmid와 함께 사용되었습니다. 형질주입 72시간 후 AAV-MAX Lysis buffer를 37C에서 2시간 동안 AAV를 수확하기 위해 바로 배양균에 추가하였으며, 이어서 qPCR을 통한 AAV 역가 측정을 수행하였습니다. 데이터는 부스터를 이용한 AAV 생산의 역가(vg/mL)로 normalize되었습니다.
CTS AAV-MAX 시스템의 확장
기존 AAV 생산 시스템과 관련된 문제로는 낮은 역가, 높은 비용의 cGMP plasmid DNA, 낮은 확장성 및 목적에 부합하는 cGMP 제조 시약의 부족 등이 있습니다. CTS AAV-MAX 시스템은 제품별 규제 지원으로 사전에 최적화된 시약을 사용하여 높은 AAV 역가를 생산하고, 확장하는 체적에 맞게 바이러스 역가를 유지하는 확장형 부유액 플랫폼에서 AAV를 생산하도록 개발되어 이러한 문제를 극복할 수 있습니다.
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그림 7. 250 mL shake flask와 50 L bioreactor의 AAV 생산을 위한 AAV6 게놈 역가. 완전한 CTS AAV-MAX 시스템이 AAV6를 생산하는 데 사용되었습니다. ddPCR을 통해 원유 시료의 역가를 측정했습니다.
AAV-MAX 생산 워크플로우용 세포 치료 시스템(CTS) 시약
Gibco 세포 치료 시스템(CTS) 시약은 세포 및 유전자 치료를 위해 설계된 GMP 제조 제품이며, 신뢰성 있게 치료를 임상으로 전환할 수 있습니다.
| cGMP 제조 | 테스트 및 문서화 | 검증된 사용 |
|---|---|---|
| 의료 기기에 대한 GMP, 21 CFR Part 820, USP<1043> 및 Ph Eur 5.2.12에 따라 제조되었으며, 제조 시설은 FDA 등록, ISO 13485 인증을 받았으며 정기적으로 감사를 받았습니다. | 추적성 문서화—약물 마스터 파일(Drug Master Files, DMF) 및/또는 규제 지원 파일(Regulatory Support Files, RSF), 원산지증명(Certificates of Origin, CoO) 포함. 제품 안전 테스트—해당 제품에 대한 무균성, 내독소성 및 마이코플라스마 테스트 | FDA 승인 및 EMA 승인 CAR T 치료와 최초의 FDA 승인 치료용 암 백신에 사용되었습니다. [1] 100회 이상의 임상 시험에 사용되었습니다. |
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