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항체 내재화
세포 표면 수용체에 특이적인 항체는 결합 시 수용체-매개 엔도사이토시스(receptor-mediated endocytosis)를 유도합니다. 일반적으로 이들은 약물, 독소, 효소 또는 DNA 연구 응용 분야의 표적 전달을 위한 운반체로서 연구됩니다.
당사는 내재화 모니터링에 사용할 수 있는 다양한 항체 라벨링 기술과 항체 라벨링용 염료(dye)를 제공합니다.
항체 내재화 모니터링을 위한 pHrodo 기술
형광이 환경의 영향을 받지 않는 형광단(예: Invitrogen Alexa Fluor dye)은 내재화 시 소광제를 사용해야 합니다. 반면, pHrodo iFL 및 Deep Red dye는 중성 pH에서 비형광성이며 산성 환경에서는 내재화되면서 밝은 형광성을 띠기 때문에 소광제가 필요하지 않습니다.
pHrodo iFL 및 Deep Red dye는 중성 pH에서는 신호가 거의 또는 전혀 나타나지 않으며, 염료가 내재화되고 pH가 감소함에 따라 각각 근적외선, 적색 또는 녹색 판독값으로 신호가 증가합니다. 형광 신호의 증가는 세포 내 경로의 진행을 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다. pHrodo Deep Red는 pKa가 낮고 세포 내 경로의 후반부까지 형광을 나타내지 않는다는 점이 pHrodo iFL Green 및 Red와 구별됩니다.
낮은 pKa pHrodo Deep Red는 후기 엔도솜과 리소좀에 최적화되어 있습니다. Herceptin(유방암 및 위암 치료에 사용되는 단클론 항체)에 pHrodo Deep Red를 라벨링했습니다. SKBR3 세포를 pHrodo Deep Red–labeled Herceptin 및 CellLight Early Endosome-RFP(왼쪽), CellLight Late Endosome-RFP(중앙), CellLight Lysosomes-RFP(오른쪽)로 처리했습니다. 밤새 인큐베이션한 후 시료를 37˚C에서 30분 동안 NucBlue Live 핵 염료로 염색했습니다. EVOS M7000 세포 이미징 시스템을 사용하여 형광 이미지를 획득하고 오버레이했습니다. 중첩된 형광 신호(흰색으로 표시)는 pHrodo Deep Red(자홍색)로 라벨링된 내재화된 Herceptin 항체가 후기 엔도솜과 리소좀에서는 형광을 보이지만 초기 엔도솜에서는 형광을 보이지 않음을 보여줍니다. 이러한 데이터는 후기 엔도솜과 리소좀에서 발견되는 5.5–6.0의 보다 산성화된 pH가 pHrodo Deep Red를 비형광에서 진한 적색 형광으로 활성화하는 데 필요하다는 것을 시사합니다.
항체 라벨 선택 가이드
| pHrodo Green iFL | pHrodo Red iFL | pHrodo Deep Red | |
|---|---|---|---|
| 범위 | 초기 엔도솜부터 리소좀까지 | 후기 엔도솜 및 리소좀 | |
| 일반적인 필터 세트 | FITC/GFP | TRITC/RFP | Cy5 |
| Ex/Em(nm) | 509/533 | 560/585 | 640/655 |
| 신호 대 잡음비 |  |  |  |
| 광안정성 | | | |
| 밝기 | | | |
| pKa* | 6.5 | 6.5 | 5 |
| 멀티플렉싱 | 예 | ||
| Live cells | 예 | ||
| Fixed cells | 아니요 | ||
| 플랫폼 | 이미징, high content analysis, 유세포 분석 | ||
| Zenon Fab 단편 | Z25609 (Mouse) Z25611 (Human) Z25613 (Human 5x) | Z25610 (Mouse) Z25612 (Human) Z25614 (Human 5x) | |
| SiteClick 위치 특이적 | — | C20034 | S10914 |
| 아민-반응성 라벨링 키트 | P36015(20 μg) P36022(100 μg) P36023(1mg) | P36014 (20 μg) P36020(100 μg) P36021(1mg) | P35355 (100 μg) P35356 (1mg) |
| 아민-반응성 시약 | P36013 | P36011 | P35359 |
* 환경 pH가 pKa에 도달하기 전에 신호가 나타납니다.
pHrodo 항체 라벨링 방법
pHrodo iFL Green 및 pHrodo iFL Red reactive dye는 기존 pHrodo dye의 변형된 형태입니다. 용해도에 최적화되어 있어 결합 중에 용액에서 침전될 수 있는 항체를 라벨링하는 데 유용합니다. pHrodo iFL Green, pHrodo iFL Red 및 pHrodo Deep Red는 고객의 내재화 분석 요구에 맞게 다양한 항체 라벨링 기술과 결합할 수 있습니다.
위치 특이적 SiteClick 항체 라벨링 기술
SiteClick 항체 라벨링 시스템은 항원-결합 도메인에서 멀리 떨어진 중쇄 N-연결 글리칸에 검출 분자를 간단하고 부드럽게 위치별로 부착할 수 있어 아이소타입(isotype) 또는 숙주 종에 관계없이 라벨링 간, 항체 간 우수한 재현성을 제공합니다. 항체는 당 잔기에 아지도(azido) 부분을 결합하도록 변형할 수 있어 pHrodo iFL 또는 Deep Red와 함께 사용할 수 있는 Click-iT sDIBO Alkynes 제품군뿐만 아니라, Alexa Fluor dye, 비오틴, 원하는 분자의 부착을 위한 반응성 형태를 이용한 부착에 손쉽게 사용할 수 있습니다.
SiteClick pHrodo iFL Red–labeled Trastuzumab(녹색으로 임의 채색)과 Hoesecht 33342 대비 염색을 사용하여 인큐베이션한 HER2-양성 세포의 high-content analysis.
신속한 스크리닝을 위해 pHrodo iFL dye를 사용한 Zenon 항체 라벨링
Zenon Antibody Labeling Kits는 IgG 항체를 매우 빠르게(약 10분 내) 라벨링할 수 있는 방법을 제공하는 항체 내재화 스크리닝에 유용한 도구입니다. Zenon 라벨링 방법은 pH-민감성의 pHrodo iFL dye 또는 기존 Alexa Fluor dye에 결합된 Fab 단편을 사용합니다. 이러한 Fab 단편은 IgG 항체의 Fc 부분에 대해 유도되므로 표적 항체의 항원 인식 부위가 손상되지 않고 폐색이 발생하지 않으면서 일관된 정도의 라벨링을 제공합니다. Zenon 기술은 1 μg의 적은 항체에 라벨을 부착할 수 있으며, 아민 또는 티올 반응성 라벨을 사용하는 기존의 라벨링 방법과 달리 Zenon 항체 라벨링은 BSA 및 기타 안정화 단백질과 호환됩니다.
Zenon pHrodo iFL 라벨링 시약은 human 또는 mouse IgG와 복합체를 형성하여 많은 항체 시료에 대해 신속하고 확장 가능한 항체 내재화 스크리닝을 위한 신속한 라벨링을 제공할 수 있습니다.
기존 pHrodo 아민-반응성 염료 및 라벨링 키트
pHrodo iFL 제품 및 pHrodo Deep Red는 항체에서 사용가능한 라이신의 기존 항체 라벨링을 위해 사용할 수 있습니다. 이러한 아민-반응성 pHrodo STP 또는 TFP ester는 녹색, 적색, 진한 적색 버전으로 제공되며, 단백질 또는 항체를 라벨링하고 정제하는 데 필요한 모든 것이 포함된 독립형 패키지 또는 라벨링 키트로 제공됩니다.
제품 특징: pHrodo iFL Red 및 Green STP Ester dye
pHrodo iFL Red 및 Green STP Ester dye는 기존 pHrodo Red 및 Green dye의 향상된 버전이며 기존 염료보다 더 잘 녹는 컨주게이트를 생성하도록 최적화되어 있습니다. 이러한 향상된 특성 덕분에 컨주게이션 중에 용액에서 침전될 수 있는 항체의 라벨링에 유용합니다.
내재화 연구를 위한 항체 라벨링
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| SiteClick Antibody Azido Modification Kit (sDIBO label is not included order separately) | 100 mg | S20026 |
| Click-iT pHrodo iFL Red sDIBO Alkyne for Antibody Labeling | 100 mg | C20034 |
| SiteClick pHrodo Deep Red sDIBO Alkyne | 250 μg | S10914 |
| SiteClick pHrodo Deep Red sDIBO Alkyne | 1 mg | S10915 |
| SiteClick pHrodo iFL Red sDIBO Alkyne | 1 mg | S10903 |
| SiteClick pHrodo iFL Red sDIBO Alkyne | 5 mg | S10908 |
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| Zenon pHrodo iFL Green Mouse IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25609 |
| Zenon pHrodo iFL Red Mouse IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25610 |
| Zenon pHrodo iFL Green Human IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25611 |
| Zenon pHrodo iFL Red Human IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25612 |
| Zenon pHrodo iFL Green Human IgG Labeling Reagent 5x | 최대 20개의 96 웰 플레이트 | Z25613 |
| Zenon pHrodo iFL Red Human IgG Labeling Reagent 5x | 최대 20개의 96 웰 플레이트 | Z25614 |
| Zenon pHrodo iFL Deep Red Mouse IgG Labeling reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25622 |
| Zenon pHrodo iFL Deep Red Human IgG Labeling reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25618 |
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| pHrodo Deep Red Antibody Labeling Kit | 3 x 100 µg | P35355 |
| pHrodo Deep Red Antibody Labeling Kit | 3 x 1 mg | P35356 |
| pHrodo iFL Red Microscale Protein Labeling Kit | 3 x 20 µg | P36014 |
| pHrodo iFL Red Antibody Labeling Kit | 3 x 100 µg | P36020 |
| pHrodo iFL Red Antibody Labeling Kit | 3 x 1 mg | P36021 |
| pHrodo iFL Green Microscale Protein Labeling Kit | 3 x 20 µg | P36015 |
| pHrodo iFL Green Antibody Labeling Kit | 3 x 100 µg | P36022 |
| pHrodo iFL Green Antibody Labeling Kit | 3 x 1 mg | P36023 |
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| pHrodo Deep Red TFP Ester (amine-reactive) | 3 x 100 µg | P35358 |
| pHrodo Deep Red TFP Ester (amine-reactive) | 1 mg | P35359 |
| pHrodo iFL Red STP Ester (amine-reactive) | 3 x 100 µg | P36011 |
| pHrodo iFL Red STP Ester (amine-reactive) | 1 mg | P36010 |
| pHrodo iFL Green STP Ester (amine-reactive) | 3 x 100 µg | P36013 |
| pHrodo iFL Green STP Ester (amine-reactive) | 1 mg | P36012 |
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| SiteClick Antibody Azido Modification Kit (sDIBO label is not included order separately) | 100 mg | S20026 |
| Click-iT pHrodo iFL Red sDIBO Alkyne for Antibody Labeling | 100 mg | C20034 |
| SiteClick pHrodo Deep Red sDIBO Alkyne | 250 μg | S10914 |
| SiteClick pHrodo Deep Red sDIBO Alkyne | 1 mg | S10915 |
| SiteClick pHrodo iFL Red sDIBO Alkyne | 1 mg | S10903 |
| SiteClick pHrodo iFL Red sDIBO Alkyne | 5 mg | S10908 |
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| Zenon pHrodo iFL Green Mouse IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25609 |
| Zenon pHrodo iFL Red Mouse IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25610 |
| Zenon pHrodo iFL Green Human IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25611 |
| Zenon pHrodo iFL Red Human IgG Labeling Reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25612 |
| Zenon pHrodo iFL Green Human IgG Labeling Reagent 5x | 최대 20개의 96 웰 플레이트 | Z25613 |
| Zenon pHrodo iFL Red Human IgG Labeling Reagent 5x | 최대 20개의 96 웰 플레이트 | Z25614 |
| Zenon pHrodo iFL Deep Red Mouse IgG Labeling reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25622 |
| Zenon pHrodo iFL Deep Red Human IgG Labeling reagent | 최대 4개의 96 웰 플레이트 | Z25618 |
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| pHrodo Deep Red Antibody Labeling Kit | 3 x 100 µg | P35355 |
| pHrodo Deep Red Antibody Labeling Kit | 3 x 1 mg | P35356 |
| pHrodo iFL Red Microscale Protein Labeling Kit | 3 x 20 µg | P36014 |
| pHrodo iFL Red Antibody Labeling Kit | 3 x 100 µg | P36020 |
| pHrodo iFL Red Antibody Labeling Kit | 3 x 1 mg | P36021 |
| pHrodo iFL Green Microscale Protein Labeling Kit | 3 x 20 µg | P36015 |
| pHrodo iFL Green Antibody Labeling Kit | 3 x 100 µg | P36022 |
| pHrodo iFL Green Antibody Labeling Kit | 3 x 1 mg | P36023 |
| 이름 | 라벨링 스케일 | 제품 번호 |
|---|---|---|
| pHrodo Deep Red TFP Ester (amine-reactive) | 3 x 100 µg | P35358 |
| pHrodo Deep Red TFP Ester (amine-reactive) | 1 mg | P35359 |
| pHrodo iFL Red STP Ester (amine-reactive) | 3 x 100 µg | P36011 |
| pHrodo iFL Red STP Ester (amine-reactive) | 1 mg | P36010 |
| pHrodo iFL Green STP Ester (amine-reactive) | 3 x 100 µg | P36013 |
| pHrodo iFL Green STP Ester (amine-reactive) | 1 mg | P36012 |
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