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TA 클로닝 키트
Invitrogen TA 클로닝 기술은 1단계 클로닝 전략으로 기존 제한효소 및 접합 클로닝을 크게 간소화합니다. 이 전략은 PCR 산물의 효소적 변형이 필요하지 않으며 제한효소 부위를 포함한 프라이머를 사용할 필요가 없습니다.
Invitrogen TA 클로닝 키트는 여러 DNA 단편에서 아데닌(A)과 티민(T)으로 구성된 상보적 염기를 활용하여 함께 혼성화(hybridize)합니다. PCR 산물은 산물의 3’ 말단에 하나의 디옥시아데노신을 추가하는 Taq DNA 중합효소를 사용하여 증폭됩니다. TA 클로닝 키트에 제공되는 선형화 벡터는 삽입체가 벡터에 효율적으로 접합될 수 있도록 하는 상보적 3´ 디옥시티미딘(T) 잔류물을 포함하고 있습니다.
유연성과 속도를 동시에
| InvitrogenExpressLink T4 DNA 리가아제(Ligase)를 TA 클로닝 키트에 추가하여 상온에서 15분만에 접합을 수행할 수 있으며, 일반적으로 삽입체를 지닌 재조합체를 >80% 이상의 수율로 반응시킵니다. TA 클로닝 키트는 Invitrogen pCR™ 2.1 및 pCR™ II 벡터 선택 옵션과 함께 제공됩니다. pCR II 벡터의 T7 및 Sp6 프로모터는 삽입체의 in vitro 전사를 통해 센스(sense) 또는 안티 센스(anti-sense) 산물을 산출합니다. |  |
성능과 경제성
TA 클로닝 키트는 컴피턴트 세포(K2020-20 및 K2020-40) 없이 사용하거나 20개/40개 반응 패키지로 제공되는 Invitrogen One Shot INVαF’ 화학적 컴피턴트 E. coli(K2000-01 및 K2000-40) 및 One Shot TOP10F’ 화학적 컴피턴트 E. coli(K2040-01 및 K2040-40)와 함께 사용할 수 있습니다.
pCR II 벡터를 사용하는 TA 클로닝(듀얼 프로모터)의 경우 키트는 컴피턴트 세포(K2750-20 및 K2750-40) 없이 사용하거나 20개/40개 반응 패키지로 제공되는 One Shot INVαF’ 화학적 컴피턴트 E. coli(K2050-01 및 K2050-40) 및 One Shot TOP10F’ 화학적 컴피턴트 E. coli(K2060-01 및 K2060-40)와 함께 사용할 수 있습니다.
TA 클로닝 키트는 성능과 경제성 면에서 경쟁업체인 ‘P’사를 능가합니다.
| TA 클로닝 키트 | P사 | |
|---|---|---|
| 클로닝 효율 | 80%(컨트롤 사용) | 60%(컨트롤 사용) |
| 접합 시간 | 15 분 | 1시간 |
| 접합 온도 | 실온 | 실온 |
| PCR 클린업 필요성 | 아니오 | 권장 사항 |
| 선별 항생제 | 카나마이신 및 암피실린 | 암피실린 단독 |
키트 구성품 | ||
| 벡터 |  | |
| 접합 버퍼 | | |
| 대조 삽입 DNA | | |
| dNTPs | | |
| 멸균수 | | |
| 대조 DNA 템플릿 | | |
| PCR 버퍼 | | |
| 대조 PCR 프라이머 | | |
교정 효소 사용 여부
Invitrogen Platinum SuperFi와 같이 넓은 3´ ~ 5´ 엑소뉴클레아제 활성 범위를 갖는 내열성 중합효소는 3´ A-돌출부를 남기지 않습니다. Taq 중합효소로 생성된 PCR 산물은 3 A-돌출부가 제거되지 않기 때문에 TA 클로닝 시스템에서 높은 클로닝 효율을 나타냅니다. 그러나 교정 중합효소를 사용하거나 평활 말단(blunt-end) 단편을 복제하려는 경우 순환 프로그램 말미에 3´ A-돌출부를 Taq로 배양하여 추가할 수 있습니다.
또는 Invitrogen Zero Blunt PCR 클로닝 키트를 사용할 수도 있습니다. 이 키트는 내열성 프루프리딩(proofreading) 중합효소를 사용하여 평활 말단 PCR 산물을 효율적으로 복제합니다.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.