Platinum GenoType Tsp DNA Polymerase

Taq DNA polymerase는 종종 PCR 산물(예: 1개 이상의 아데노신)에 nontemplated nucleotide를 추가하기 때문에 증폭된 다이뉴클레오티드 반복 영역의 크기 측정이 매우 까다로울 수 있습니다. 여분의 뉴클레오티드가 포함된 PCR 앰플리콘의 분획은 이종성이며 사용된 역방향 프라이머의 염기 서열에 따라 달라집니다.

Platinum Genotype Tsp DNA polymerase는 여분의 nontemplated nucleotide를 PCR 산물에 추가할 때 감소된 활성을 보입니다. 이러한 효소의 특성으로 연구자는 PCR을 사용한 다이뉴클레오티드 반복 위치의 유전형 분석(genotyping)에서 대립유전자의 올바른 크기를 측정할 수 있습니다.

5´-GTGTCTT 꼬리로 변형된 역방향 프라이머(또는 PIG-tail 프라이머)는 여분의 뉴클레오티드 추가를 개선하고 대립유전자 추출을 촉진하기 위해 종종 Taq DNA polymerase와 함께 사용됩니다[1]. Platinum GenoType Tsp DNA Polymerase 사용 시 변형된 역방향 프라이머를 사용하여 여분의 뉴클레오티드 추가는 증가하였지만 테스트된 위치에 대한 대립유전자 추출은 영향을 받지 않았습니다. 따라서 Platinum GenoType Tsp DNA Polymerase는 표준 또는 변형된 역방향 프라이머를 사용한 다이뉴클레오티드 반복 현미부수체(microsatellite)의 PCR 유전형 분석(genotyping)에 효과적입니다.

다음 표에서는 Tsp DNA polymerase와 Taq DNA polymerase의 특성을 비교합니다.

Tsp DNA polymerase는 500 bp를 초과하는 DNA 단편의 증폭에는 적합하지 않습니다. 5′ 엑소뉴클레아제 활성을 제거하고 익스텐다제(extendase) 활성을 감소시키는 돌연변이는 긴 템플릿을 증폭하는 효소의 기능도 감소시킵니다.

Platinum Tsp DNA polymerase는 약 72°C에서 변성된 항체와 사전 혼합됩니다. PCR의 첫 번째 단계에서 항체의 변성은 효소를 활성화하고 hot-start PCR이 자동으로 시작되도록 보장합니다. Tsp 항체는 Platinum Taq DNA Polymerase와 함께 사용되는 항체와 다름을 유의하십시오.

1. Brownstein MJ, Carpten JD, Smith JR (1996) Modulation of non-templated nucleotide addition by Taq DNA polymerase: primer modifications that facilitate genotyping. Biotechniques 20(6):1004-1006, 1008-1000.