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Recursos de espectrofotómetro UV-Vis
Explore nuestros recursos a continuación para satisfacer sus necesidades de espectroscopía UV-Vis. Obtenga más información sobre nuestros instrumentos y sus características, especificaciones y aplicaciones en nuestra amplia gama de seminarios web y documentación sobre productos. Descubra cómo y cuándo son útiles las características de absorbancia, ancho de banda espectral, transmitancia y reflectancia para maximizar las capacidades de su instrumento UV-Vis.
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Documentación sobre el producto espectrofotómetro UV-Vis
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Informes técnicos
Seminarios web sobre espectrofotómetros UV-Vis
Principios del espectrofotómetro UV-Vis
En los términos más básicos, los espectrofotómetros permiten llevar a cabo comparaciones fotométricas de intensidades de luz relativas en los espectros ultravioleta y visible. La orientación de una fuente de luz de intensidad constante controlada (halógena, deuterio, xenón) a través del espectro o a una longitud de onda específica a través de una muestra puede confirmar fácilmente las características conocidas o calcular características desconocidas de la muestra. La luz incidente (I0) se puede redireccionar de forma inversa como reflexión, sufrir una pérdida de energía como absorción y pasar a través de muestras transparentes o translúcidas como transmisión. Las muestras que se encuentran en líquidos deben colocarse en un tubo de ensayo o cubeta compuesta de plástico, vidrio o cuarzo que sea compatible con la muestra y la longitud de onda de medición y debe colocarse en un soporte del compartimento de muestras antes de llevar a cabo la medición.
Los espectrómetros pueden tener distintas configuraciones ópticas con una configuración de haz doble dividido, dual o simple. Las unidades más económicas y sencillas dependen de un solo haz de luz que viaja desde el selector de longitud de onda (sistema monocromador o filtro) hasta el detector, pero requiere mediciones separadas del blanco disolvente de línea de base para compararlo con la medición de la muestra. Una unidad de haz doble divide el haz de luz en un haz de referencia y un haz de muestra, lo que permite medir un espacio en blanco y una muestra en el compartimento de muestras en las mismas condiciones del instrumento con un solo detector que alterna la recogida de datos entre la referencia y la muestra. Una configuración de haz dual utiliza dos haces y dos detectores en paralelo para medir la muestra y la referencia de forma simultánea.
Absorción de espectrofotómetro UV-Vis
Cuando las muestras se irradian con luz, absorben de forma selectiva la luz incidente en longitudes de onda específicas. La longitud de onda con la absorbancia más alta (λmáx) sirve normalmente como longitud de onda analítica y se expresa en nanómetros (nm). Las mediciones de absorbancia son fáciles de llevar a cabo y se utilizan para generar curvas de espectro.
La absorción puede proporcionar opciones directas e indirectas para calcular la concentración. Un ejemplo de medición directa de una proteína es a A280, que después permite el cálculo de la concentración de proteínas (c) basándose directamente en la absorbancia de muestras (A) a 280 nm y el coeficiente de extinción específico de la proteína (ε) mediante la ecuación de Beer-Lambert c = A / (ε × L), donde L es la trayectoria óptica. Una medición indirecta, como un ensayo colorimétrico, se basa en la generación de una curva estándar y una reacción que produce un cambio de color proporcional a la cantidad de proteína de la muestra.
Ancho de banda espectral del espectrofotómetro UV-Vis
El tamaño de la hendidura que sale del monocromador controla el ancho de banda espectral (o paso de banda) del instrumento y afecta a la capacidad de discriminar entre dos picos adyacentes (resolución espectral), la intensidad de la luz que llega al detector, el tiempo de medición y la relación señal-ruido. Un espectrofotómetro de ancho de banda más estrecho puede aumentar la resolución y la relación señal-ruido a expensas de la duración de la medición; un instrumento más económico con un ancho de banda más amplio puede reducir el tiempo de obtención de resultados a expensas de una menor resolución y un mayor ruido de fondo. Para satisfacer los requisitos de rendimiento y ancho de banda de todas las farmacopeas mundiales, incluidos la farmacopea de los Estados Unidos (USP), la farmacopea europea (EP) y la farmacopea japonesa (JP), puede elegir el instrumento Thermo Scientific Evolution Pro o los modelos de la serie Evolution One para cumplir todos los requisitos de la USP y EP.
Porcentaje de transmisión de muestras
La transmitancia mide la cantidad de luz que pasa a través de una muestra y puede proporcionar una información cuantitativa basada en las propiedades reflectantes y transmisorias conocidas de un material. Los valores de transmitancia se suelen indicar como un porcentaje, comparando la relación de la luz que llega al detector con la luz incidente que entra en la muestra. Una muestra perfectamente transparente transmite toda la luz (100 % T); una muestra completamente opaca no transmite ninguna luz (0 % T). Esta medición se puede utilizar para calcular la concentración de productos químicos en la solución, probar la claridad del agua y de las películas finas o evaluar el grado de los productos como el jarabe de arce, entre otros.
Para calcular la transmitancia (T), la cantidad de luz que sale de la muestra (I) se divide por la cantidad de luz incidente que entra en la muestra (I0): T = I/I0. Normalmente, estas mediciones se indican como porcentaje de transmitancia y se multiplican por 100: % T = 100(I/I0). Existe una relación logarítmica entre absorbancia y transmitancia, donde A = -log10T: cuando la absorbancia es igual a 0, la transmitancia es 100 % T y cuando la absorbancia es igual a 1 la transmitancia es del 10 %.
Porcentaje de mediciones de reflectancia
Las muestras en forma sólida o de solución pueden reflejar la luz incidente que se emplea en el análisis espectrofotométrico. Cuando una superficie es muy lisa, puede producir una reflexión especular similar a un espejo, donde el rayo de luz incidente se refleja como un solo rayo de luz en un ángulo de reflexión que equivale al ángulo de incidencia. Las superficies rugosas y las que dispersan la luz dentro de la muestra producen en su lugar una reflexión difusa en la que incluso un ángulo de incidencia puede dar lugar a una reflexión que se disipa mediante una amplia distribución de ángulos. La medición de la transmisión de luz de estos materiales mediante un soporte de muestras tradicional solo producirá una fracción de la luz que llega al detector, lo que provocará una reducción de la calidad espectral y la pérdida de información. Sin embargo, el uso de un accesorio de esfera integradora permite recoger toda la luz que pasa por la muestra para realizar mediciones de transmisión total colocando la muestra en el punto de entrada o para mediciones de reflectancia total o difusa colocando la muestra en el puerto de salida.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.