Invitrogen Platinum SuperFi DNA Polymerase

確保PCR序列準確性的最高可信度

Invitrogen Platinum SuperFi II DNA聚合酶是一種熱啟動、工程改造校正的DNA聚合酶，可為您的PCR擴增提供卓越的保真度和特異性。Platinum SuperFi II DNA聚合酶具有大於300x Taq的高保真度，以及專為60°C引子黏合溫度而配製的獨特緩衝液，可為最高擴增準確性需求的PCR應用（如基因選殖、定序和突變）提供了高效性和便利性。

產品亮點

  • 卓越的準確度—經次世代定序鑑定，其保真度高於Taq保真度300倍以上。
  • 簡化的工作流程—優化的緩衝液專為60°C的引子黏合溫度而配置（無需Tm計算器）。
  • 更高的PCR成功率—可針對富含GC的目標物、純度不佳的DNA和長片段序列進行穩健的擴增。
  • 實現自動化—透過Invitrogen Platinum熱啟動技術，可確保反應設置後24小時內的高特異性和室溫穩定性。
  • 減少移液步驟—我們提供含、或不含直接凝膠上樣染料的預混液選項。

使用客戶對於Platinum SuperFi II聚合酶的評價

Platinum SuperFi II DNA聚合酶的優勢

>300x Taq高保真度

Platinum SuperFi II DNA聚合酶的錯誤率極低，在確保DNA序列準確性方面具有最高的可信度。使用次世代定序方法檢測，Platinum SuperFi II DNA聚合酶的相對保真度經計算後高於Taq DNA聚合酶的300倍。

Bar graph of commercially available Taq enzymes showing Platinum SuperFi II enzyme with greater than 350X fidelity relative to Taq enzyme.

圖1. 市售商用酶相對於Taq酶的保真度比較。 使用不同的DNA聚合酶，透過PCR擴增3.9 kb的序列，然後以MuA轉座酶將所得之PCR擴增子進行片段化。在片段化過程中引入了由12個隨機核苷酸組成的獨特分子標籤（Unique molecular identifiers，UMI），以單獨標記每一個產物。經次世代定序後，將讀數（reads）與正確序列進行比對，依照UMI家族分組，藉此發現擴增中的錯誤。只有當錯誤存在於UMI家族的所有reads中時，錯誤才得以識別；否則將被視為定序錯誤而被丟棄。以Taq DNA聚合酶作為標準來衡量聚合酶的保真度。請點擊此處，詳細閱讀研究文章。

影片：什麼是高保真PCR？

了解DNA聚合酶的保真度、測量酶保真度的方法，以及在您的PCR中使用高保真DNA聚合酶的優勢。

60°C的引子黏合溫度

Platinum SuperFi II緩衝液的獨特配方有助於減少PCR中繁瑣的優化步驟。使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶時，不再需要計算黏合步驟的引子解鏈溫度。遵循常規引子設計原則（圖2）所得的產物，無論其序列如何，創新的緩衝液配方均能在60°C進行引子黏合。當在黏合步驟中使用計算出之Tms時，該緩衝液同樣能確保成功擴增（數據未顯示）。

Bar graph of commercially available Taq enzymes showing Platinum SuperFi II enzyme with greater than 350X fidelity relative to Taq enzyme.

圖2. Platinum SuperFi II DNA聚合酶在60°C的通用黏合溫度下可生成具有高特異性和高產率的PCR產物。使用不同黏合溫度的引子組，在60°C黏合溫度下從50 ng人類基因組DNA中擴增12個目標物。所使用的分子量標準參照物是Invitrogen TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。上述用於Platinum SuperFi DNA聚合酶的黏合溫度是透過Tm計算器所得之。

了解黏合步驟在PCR中的重要性、如何使用特殊配製的PCR緩衝液規避優化步驟，以及緩衝液實現了通用黏合溫度所帶來的優勢。

通用的PCR擴增方案

由於採用了創新型的反應緩衝液，Platinum SuperFi II DNA聚合酶擁有通用的黏合溫度和靈活的延長時間，從而實現所有PCR反應的共循環擴增（co-cycling）。

Diagram illustrating simultaneous amplification of replicates for 3 distinct PCR targets with one universal protocol in 1 to 2 hours.

圖3. 透過通用PCR擴增方案，可節省時間並實現不同PCR反應的同時擴增。由於引子黏合溫度和延伸步驟不同，使用常規PCR試劑來進行PCR時，每個DNA片段都需要特定的擴增方案；因此，多個目標物通常無法在一次PCR運行中同時擴增。透過Platinum SuperFi II DNA聚合酶，因其具有通用的引子黏合溫度，可針對最長片段選擇擴增步驟時間，以實現在一個方案中同時進行不同的PCR擴增（圖4）。

Gel analysis of five PCR fragments of distinct sizes amplified with Platinum SuperFi II DNA Polymerase using the same protocol

圖4. Platinum SuperFi II DNA聚合酶，可實現短片段和長片段的同時擴增。從100 ng人類基因組DNA中擴增0.7 kb、2.0 kb、4.8 kb和14 kb的片段，均使用相同的擴增方案：98°C變性10秒，60°C黏合10秒，72°C延伸7分鐘。延伸時間是根據最長目標片段來進行計算。

直接凝膠上樣電泳

Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix提供了PCR產物直接凝膠上樣的便利性，省去了向PCR樣品中添加染料的繁瑣步驟，並有助於減少移液錯誤。綠色緩衝液兼容於下游實驗應用，包括DNA定序、接合和限制性酶切。

Diagrammed steps illustrating amplification of a PCR product with the Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix and resolution of green reaction mix to blue and yellow markers.

圖5. 綠色預混液，可實現將PCR產物直接加樣至凝膠中上進行分析。Platinum SuperFi II DNA聚合酶的預混液，以綠色緩衝液規格提供，其中包含一種密度試劑和兩種追踪染料。使用這兩種染料（藍色和黃色），可以在電泳過程中輕鬆觀察DNA條帶的遷移（如右圖中電泳5分鐘和15分鐘的條帶）。

>300x Taq高保真度

>300x Taq高保真度

Platinum SuperFi II DNA聚合酶的錯誤率極低，在確保DNA序列準確性方面具有最高的可信度。使用次世代定序方法檢測，Platinum SuperFi II DNA聚合酶的相對保真度經計算後高於Taq DNA聚合酶的300倍。

Bar graph of commercially available Taq enzymes showing Platinum SuperFi II enzyme with greater than 350X fidelity relative to Taq enzyme.

圖1. 市售商用酶相對於Taq酶的保真度比較。 使用不同的DNA聚合酶，透過PCR擴增3.9 kb的序列，然後以MuA轉座酶將所得之PCR擴增子進行片段化。在片段化過程中引入了由12個隨機核苷酸組成的獨特分子標籤（Unique molecular identifiers，UMI），以單獨標記每一個產物。經次世代定序後，將讀數（reads）與正確序列進行比對，依照UMI家族分組，藉此發現擴增中的錯誤。只有當錯誤存在於UMI家族的所有reads中時，錯誤才得以識別；否則將被視為定序錯誤而被丟棄。以Taq DNA聚合酶作為標準來衡量聚合酶的保真度。請點擊此處，詳細閱讀研究文章。

影片：什麼是高保真PCR？

了解DNA聚合酶的保真度、測量酶保真度的方法，以及在您的PCR中使用高保真DNA聚合酶的優勢。

60°C的引子黏合溫度

60°C的引子黏合溫度

Platinum SuperFi II緩衝液的獨特配方有助於減少PCR中繁瑣的優化步驟。使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶時，不再需要計算黏合步驟的引子解鏈溫度。遵循常規引子設計原則（圖2）所得的產物，無論其序列如何，創新的緩衝液配方均能在60°C進行引子黏合。當在黏合步驟中使用計算出之Tms時，該緩衝液同樣能確保成功擴增（數據未顯示）。

Bar graph of commercially available Taq enzymes showing Platinum SuperFi II enzyme with greater than 350X fidelity relative to Taq enzyme.

圖2. Platinum SuperFi II DNA聚合酶在60°C的通用黏合溫度下可生成具有高特異性和高產率的PCR產物。使用不同黏合溫度的引子組，在60°C黏合溫度下從50 ng人類基因組DNA中擴增12個目標物。所使用的分子量標準參照物是Invitrogen TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。上述用於Platinum SuperFi DNA聚合酶的黏合溫度是透過Tm計算器所得之。

了解黏合步驟在PCR中的重要性、如何使用特殊配製的PCR緩衝液規避優化步驟，以及緩衝液實現了通用黏合溫度所帶來的優勢。

通用的PCR擴增方案

通用的PCR擴增方案

由於採用了創新型的反應緩衝液，Platinum SuperFi II DNA聚合酶擁有通用的黏合溫度和靈活的延長時間，從而實現所有PCR反應的共循環擴增（co-cycling）。

Diagram illustrating simultaneous amplification of replicates for 3 distinct PCR targets with one universal protocol in 1 to 2 hours.

圖3. 透過通用PCR擴增方案，可節省時間並實現不同PCR反應的同時擴增。由於引子黏合溫度和延伸步驟不同，使用常規PCR試劑來進行PCR時，每個DNA片段都需要特定的擴增方案；因此，多個目標物通常無法在一次PCR運行中同時擴增。透過Platinum SuperFi II DNA聚合酶，因其具有通用的引子黏合溫度，可針對最長片段選擇擴增步驟時間，以實現在一個方案中同時進行不同的PCR擴增（圖4）。

Gel analysis of five PCR fragments of distinct sizes amplified with Platinum SuperFi II DNA Polymerase using the same protocol

圖4. Platinum SuperFi II DNA聚合酶，可實現短片段和長片段的同時擴增。從100 ng人類基因組DNA中擴增0.7 kb、2.0 kb、4.8 kb和14 kb的片段，均使用相同的擴增方案：98°C變性10秒，60°C黏合10秒，72°C延伸7分鐘。延伸時間是根據最長目標片段來進行計算。

直接凝膠上樣

直接凝膠上樣電泳

Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix提供了PCR產物直接凝膠上樣的便利性，省去了向PCR樣品中添加染料的繁瑣步驟，並有助於減少移液錯誤。綠色緩衝液兼容於下游實驗應用，包括DNA定序、接合和限制性酶切。

Diagrammed steps illustrating amplification of a PCR product with the Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix and resolution of green reaction mix to blue and yellow markers.

圖5. 綠色預混液，可實現將PCR產物直接加樣至凝膠中上進行分析。Platinum SuperFi II DNA聚合酶的預混液，以綠色緩衝液規格提供，其中包含一種密度試劑和兩種追踪染料。使用這兩種染料（藍色和黃色），可以在電泳過程中輕鬆觀察DNA條帶的遷移（如右圖中電泳5分鐘和15分鐘的條帶）。

Platinum SuperFi II DNA聚合酶提供的穩健性

高產量和高特異性

由於酶的穩健性和出色的熱啟動技術，Platinum SuperFi II DNA聚合酶可高特異性和高產量地擴增多種不同長度的目標物。基於抗體的Platinum熱啟動技術在最初的PCR變性步驟之前會抑制酶的活性，防止非特異性擴增和引子降解，同時提高目標擴增片段的產量。

Gel analysis comparing Platinum SuperFi II enzyme with 3 commercially available DNA polymerases and their ability to amplify DNA fragments ranging from 0.3 to 14 kb

圖6. 適用於擴增多種不同長度的寬範圍片段，且用途廣泛。Platinum SuperFi II DNA聚合酶（最左側）可高產量和高特異性地從100 ng人類基因組DNA擴增0.3 kb至14 kb範圍的DNA片段。同時使用其他供應商的DNA聚合酶，擴增相同的目標物：A—Merck KOD Hot Start，B—KAPA HiFi HotStart PCR試劑盒，C—PrimeSTAR GXL。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

高靈敏度

Platinum SuperFi II DNA聚合酶的高靈敏度，可以檢測低豐度DNA模板並獲得準確的結果。在起始材料數量有限或樣品中目標DNA濃度較低的實驗中，高靈敏度聚合酶是非常有利的。

Diagrammed steps illustrating amplification of a PCR product with the Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix and resolution of green reaction mix to blue and yellow markers.

圖7. 從少量起始DNA中實現高靈敏度和可靠的擴增。Platinum SuperFi II DNA聚合酶（最左側）可分別從0.4 ng、2 ng、10 ng、50 ng和250 ng人類基因組DNA中可靠地擴增2 kb片段（模板量標示於每個泳道上方）。使用其他供應商的DNA聚合酶擴增相同的目標物：A—PfuUltra II Fusion Hot Start，B—HotStar HiFidelity DNA聚合酶試劑盒，C —Expand HiFi PLUS Enzyme Blend。預估的拷貝數為每0.4 ng人類基因組DNA約100個拷貝。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

對於抑制劑的耐受性

Platinum SuperFi II DNA聚合酶於DNA結合結構域進行了改造設計，從而實現高持續合成能力，並提高對氯化血紅素（hemin，紅血球成分）、木聚醣（xylan，植物生物聚合物）和腐植酸（humic acid，存在於土壤）等常見PCR抑制劑的耐受性。

PCR gel of 2 kb fragment amplified from 50 ng of human genomic DNA spiked in with humic acid, hemin, and bile salt

圖8. Platinum SuperFi II DNA聚合酶顯示對常見PCR抑制劑的高度耐受性。使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶或其他供應商的高保真DNA聚合酶，從50 ng人類基因組DNA中擴增2 kb人類基因組DNA片段：A—Q5 Hot Start High-Fidelity，B—PrimeSTAR GXL，C—Merck KOD Hot Start，和D—KAPA HiFi HotStart PCR試劑盒，反應混合物中含有1—無抑制劑，2—腐植酸（4 µg/mL），3—血紅素（20 µM）或4—膽鹽（1毫克/毫升）。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

室溫穩定性

Platinum SuperFi II DNA聚合酶在室溫下具有更高的穩定性，可實現高通量應用。其卓越的Platinum熱啟動技術可實現室溫穩定性和酶的高特異性。

PCR gel showing 0.5 kb fragment amplified form 50 ng of human genomic DNA after 24 hour room temperature set up

圖9. 使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶配製的反應系統在室溫下十分穩定。從50 ng人類基因組DNA中擴增出0.5 kb片段。PCR反應分別在室溫下放置0小時和24小時，然後加載至Applied Biosystems ProFlex熱循環儀進行擴增。即使經過24小時的室溫設置，Platinum SuperFi II DNA聚合酶（lane P）也能獲得高特異性和高產量的擴增結果。同時使用其他供應商的DNA聚合酶進行相同的實驗：A—Q5 Hot Start High-Fidelity，B—KAPA HiFi HotStart PCR Kit，C—PrimeSTAR GXL。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶對不同類型的模板進行PCR擴增

富含AT和GC模板的PCR擴增

Platinum SuperFi II DNA聚合酶憑藉其酶的穩健性及特別配製的專用緩衝液，能夠高特異性地擴增範圍寬廣的各種序列。Platinum SuperFi II緩衝液可以擴增富含GC的目標物，而無需補充DNA解鏈添加劑。

PCR gel of AT-rich and GC-rich targets amplified from 50 ng of human genomic DNA

圖10. Platinum SuperFi II DNA聚合酶可對富含AT和GC的目標物進行穩健擴增。從50 ng人類基因組DNA中擴增出15個具有不同GC含量的目標物，且無需添加任何有助於DNA變性的補充緩衝液。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

PCR gel of GC-rich targets (73% to 77%) amplified from 50 ng of human genomic DNA

圖11. 強勁擴增富含GC的目標物。Platinum SuperFi II DNA聚合酶可對富含GC的困難目標物（最左側）進行高特異性和高產量的擴增，而無需補充任何DNA解鏈添加劑。從50 ng人類基因組DNA中擴增出四個富含GC的片段（長度分別為0.74 kb、0.58 kb、0.71 kb和0.72kb；GC含量標示於上方）。根據製造商所推薦用於富含GC模板的PCR擴增方案，同時使用其他供應商的DNA聚合酶以擴增相同的目標物：A—PrimeSTAR GXL DNA聚合酶，B—KAPA HiFi HotStart PCR試劑盒（搭配專用於富含GC片段的特殊反應緩衝液），C—添加了10% DMSO的Merck KOD熱啟動DNA聚合酶。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

長片段PCR擴增

由於其高持續合成能力和極低的錯誤率，Platinum SuperFi II DNA聚合酶是準確擴增長片段（長達20 kb）的理想選擇，而且產量高、特異性極強。其還可以擴增更長的目標物片段（長達40 kb），但可能需要進行額外優化，如使用高品質模板（純淨、新鮮和完整）和新鮮的引子溶液。若是將引子濃度降低至0.2 μM也可以會改善PCR擴增結果。

PCR gels of two 20 kb targets amplified from 200 ng of human genomic DNA

圖12. 長片段的擴增。使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶（lane P）成功從200 ng人類基因組DNA中擴增出20 kb的目標物。使用相同的引子組，並測試其他供應商的DNA聚合酶：A—Q5 Hot Start High-Fidelity，B—KAPA HiFi HotStart PCR Kit，C—Merck KOD Hot Start、D—PrimeSTAR GXL，和E—PfuUltra II Fusion HotStart。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

PCR gels of long fragments (30 kb and 40 kb) amplified from 50 ng of E. coli genomic DNA

圖13. 擴增大於20 kb的目標片段。使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶（lane P）成功從50 ng大腸桿菌基因組DNA中擴增出30 kb和40 kb的目標物。使用相同的引子組，並測試其他供應商的DNA聚合酶：A—Q5 Hot Start High-Fidelity，B—KAPA HiFi HotStart PCR Kit，C—Merck KOD Hot Start，D—PrimeSTAR GXL，和E—PfuUltra II Fusion HotStart。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 1 Kb Plus DNA Ladder。

多重PCR

Platinum SuperFi II DNA聚合酶具有高特異性和高持續合成能力，可以在提供的緩衝液中對不同濃度的模板進行多重PCR分析，而無需進行顯著的反應優化。

PCR gel of 15 fragments ranging from 199 bp to 1.6 kbp amplified in the same reaction from from 2.5 ng, 25 ng, and 250 ng of human genomic DNA

圖14. 使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶在對不同濃度模板進行多重PCR擴增。從2.5 ng、25 ng和250 ng人類基因組DNA中（模板量標示於每個泳道上方），分別擴增出15個目標物（99 bp；131 bp；160 bp；199 bp；251 bp；300 bp；345 bp；400 bp；516 bp；613 bp；735 bp；908 bp；1,005 bp；1,190 bp和1,606 bp）。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 100 bp DNA Ladder。

FFPE DNA樣品的PCR擴增

由於具有高特異性和高抑制劑耐受性，Platinum SuperFi II DNA聚合酶能夠高效擴增品質不佳的DNA模板，如福爾馬林固定的石蠟包埋（formalin fixed paraffin-embedded，FFPE）樣品。

PCR gel of 0.2 kb, 0.3 kb, and 0.4 kb fragment amplified from 10 g of mouse DNA extracted from FFPE blocks

圖15. 對從FFPE提取DNA樣品的擴增。透過Invitrogen RecoverAll FFPE總核酸分離試劑盒Invitrogen RecoverAll FFPE總核酸分離試劑盒所提取的10 ng小鼠FFPE DNA，使用Platinum SuperFi II DNA聚合酶可成功擴增長達0.4 kb的片段。所使用的分子量標準參照物為TrackIt 100 bp DNA Ladder。

影片：具有超高保真度、可實現長片段擴增，且使用便利的校正PCR聚合酶

了解Invitrogen Platinum SuperFi II DNA聚合酶為您的PCR帶來的優勢，包括超高保真度、長片段增和通用的黏合擴增方案。

Platinum SuperFi II DNA聚合酶和Platinum SuperFi DNA聚合酶之間的差異

Platinum SuperFi II DNA聚合酶的反應緩衝液，其配方專門添加了共穩定組分。這種獨特的緩衝液成分具有多種優勢：無需對引子進行Tm計算、可對富含GC的目標物進行更穩健的擴增、增強對長序列的擴增能力，以及適用於高通量PCR的通用PCR擴增方案（表1）。

表1. Platinum SuperFi II和Platinum SuperFi DNA聚合酶之間的比較。

 Platinum SuperFi II DNA聚合酶Platinum SuperFi DNA聚合酶
保真度（與Taq相比）大於300x大於300x
熱啟動修飾技術是是
需要Tm 計算器否（引子的黏合溫度為60°C）是
通用PCR擴增方案是否
可擴增富含GC的模板是（無需GC enhancer）是（建議使用GC enhancer）
長片段擴增長達20 kb（性能更強）長達20 kb
室溫穩定性可長達24小時可長達24小時
對於抑制劑的耐受性高高
擴增子的 3′ 末端類型平末端平末端
經認證的低殘留DNA含量（每50 μL rxn）≤1個細菌 DNA拷貝
≤0.3個人類DNA拷貝		≤1個細菌DNA拷貝
≤0.2個人類DNA拷貝

 Platinum SuperFi II和Platinum SuperFi DNA聚合酶的基準測試數據

 

References

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UsageReference
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除非另有說明，所有商標均屬於Thermo Fisher Scientific及其子公司。Q5屬於New England BioLabs Inc.的商標。PrimeSTAR屬於Takara-Clontech Laboratories, Inc. 的商標。Merck屬於Merck KGaA的商標。KAPA HiFi HotStart屬於Roche Inc. 的商標。HotStar屬於Qiagen GmbH 的商標。Roche Expand屬於Roche Molecular Systems Inc. 的商標。PfuUltra屬於Agilent, Inc. 的商標。

僅供研究用途。不得用於診斷程序。