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Cumple los requisitos de una amplia gama de aplicaciones
Los iBright Imaging Systems ofrecen hasta cinco modos de adquisición de imágenes compatibles con múltiples requisitos de aplicaciones. Recoja datos de forma eficaz y sencilla a partir de geles de proteínas, geles de ácido nucleico, Western blot por quimioluminiscencia, Western blot por fluorescencia, etc.
| Modo de adquisición de imágenes | ¿Qué tipo de señal se puede capturar? |
| Gel de proteínas | Tinción colorimétrica de geles (p. ej., Coomassie, plata) y membranas (p. ej., Ponceau S, tinción reversible de proteínas Thermo Scientific Pierce), tinción fluorescente de geles (p. ej., tinción Invitrogen SYPRO Ruby) |
| Gel de ácido nucleico | Tinciones de bromuro de etidio e Invitrogen SYBR |
| Blot quimioluminiscente | Quimioluminiscencia con todos los sustratos populares de HRP y AP (p. ej., sustratos Thermo Scientific SuperSignal e Invitrogen WesternBreeze) |
| Blot fluorescente | Fluorescencia con el RGB popular (rango visible) y fluoróforos de infrarrojo cercano (p. ej., conjugados Invitrogen Alexa Fluor y Alexa Fluor Plus) |
| Universal | Modo personalizado para muestras de imágenes que contienen varias señales, como quimioluminiscencia, fluorescencia, tinciones colorimétricas y/o imágenes visibles; la visualización de imágenes es similar al modo de blot fluorescente y permite asignar un color falso a cualquier muestra |
Aplicaciones principales de adquisición de imágenes
Aplicaciones de adquisición de imágenes basadas en placas especializadas
Aplicaciones de adquisición de imágenes visibles cualitativas*
Las imágenes capturadas para Western blots fluorescentes, geles de ácido nucleico teñidos, geles de proteínas con tinción colorimétrica, colonias de expresión de GFP, colonias con tinción visible y secciones de hojas se muestran en pseudocolor (se aplican colores falsos). Los datos se capturan en una escala de grises.* Tenga en cuenta que las aplicaciones de adquisición de imágenes visibles cualitativas proporcionan una visualización cualitativa del objeto o la confirmación de la presencia de señal, y no se recomiendan para cuantificación.
Optimización de la adquisición de imágenes y análisis de gel de agarosa prefabricado E-Gel
El aprovechamiento de los iBright Tray Adapters para geles de agarosa E-Gel ayuda a optimizar la captura de imágenes y el análisis de nuestras configuraciones de E-Gel de 11, 22, 48 y 96 pocillos mediante el centrado adecuado de los E-Gel en el transiluminador iBright y el bloqueo de la etiqueta o el código de barras de E-Gel para que no contribuyan con fluorescencia no específica.
Además, nuestro flujo de trabajo de deconvolución simplifica enormemente la interpretación de los resultados de E-Gel de 96 pocillos de alto rendimiento, ya que la deconvolución facilita la revisión de los datos de carril a carril para comprender mejor los resultados.
Interfaz con pantalla táctil
La interfaz con pantalla táctil LCD de 12,1 pulgadas cuenta con un diseño lógico y sencillo de las funciones y características, lo que facilita el uso de nuestros sistemas con una formación mínima. Los flujos de trabajo son similares entre los modos de adquisición de imágenes, lo que ofrece una experiencia de adquisición de imágenes sencilla, independientemente del tipo de muestra.
Potente tecnología de cámara
La cámara CCD con refrigeración de 9,1 megapíxeles captura imágenes nítidas, claras y con calidad para su publicación. La alta resolución permite más opciones de agrupamiento (combinación de píxeles), lo que proporciona flexibilidad para ajustar la resolución y la sensibilidad en función de las necesidades.
La tecnología Smart Exposure determina rápidamente el tiempo de exposición óptimo, y minimiza el potencial de imágenes sobreexpuestas o subexpuestas y la necesidad de repetir las exposiciones para obtener la señal deseada.
Para muestras de Western blot quimioluminiscentes con niveles de expresión muy variables, la tecnología de alto intervalo dinámico (HDR) Smart Range puede ayudar a maximizar el intervalo dinámico lineal. Esta característica aprovecha dos exposiciones diferentes de la misma muestra, una exposición corta para capturar proteínas de abundancia media a alta y una exposición larga para capturar proteínas de baja abundancia. Después de la captura, las dos imágenes diferentes se combinarán en una sola imagen de HDR de 16 bits que contiene las intensidades de señal de media a alta y baja abundancia para ampliar eficazmente el intervalo dinámico lineal más allá de lo que se puede lograr con un solo tiempo de exposición corto o largo.
La automatización agiliza el funcionamiento
Los sistemas de adquisición de imágenes iBright de la serie 1500 determinan automáticamente la posición de la muestra y pueden girar las muestras hacia la izquierda o hacia la derecha hasta 10° en una platina para muestras con rotación mecánica. Esta automatización elimina la necesidad de abrir repetidamente el cajón de muestras para cambiar la posición de la muestra y conseguir una alineación adecuada. Además, la rotación mecánica elimina la necesidad de girar digitalmente la muestra, lo que preserva la integridad de los datos.
Rotación digital frente a rotación mecánica. (A) Los píxeles giran con rotación digital, de modo que las bandas aparecen con picos. Con la rotación mecánica, gira la propia muestra, de manera que las bandas permanecen lisas en apariencia a medida que los píxeles se alinean. (B) Gráfico que representa la platina para muestras del sistema de iBright Imaging Systems antes y después de la rotación.
Además, los sistemas iBright ajustan automáticamente el enfoque para cada nivel de zoom, para utilizar al máximo el campo de visión de 22,5 cm x 18,0 cm. Si se adquiere una imagen de un solo blot, la cámara aumenta automáticamente hasta el zoom 2x (el zoom 1-2x es mecánico con los sistemas de adquisición de imágenes iBright de la serie 1500; el zoom 1-2x es digital con el sistema iBright CL750). El zoom mecánico maximiza la sensibilidad moviendo la cámara más cerca de la platina para muestras y, por tanto, reduce la longitud focal. Los sistema iBright Imaging Systems de la serie 1500 también proporcionan un zoom digital de 1-4x adicional para un nivel de zoom combinado de 1-8x.
Función de zoom. (A) Imagen sin zoom de un Western blot por fluorescencia. (B) Blot con zoom 2x. (C) Blot con zoom 4x. (D) Blot con zoom 8x. (No se vuelve a colocar el blot durante los zooms sucesivos)
Gran campo de visión en una superficie reducida
El gran campo de visión (22,5 x 18,0 cm) permite capturar hasta 4 miniblots o minigeles.
Acelere su trabajo con los Western blots por fluorescencia multiplex
Amplíe sus posibilidades: El modelo iBright FL1500 incorpora cinco canales de fluorescencia, lo que permite Western blots por fluorescencia multiplexados de hasta 4 colores y que amplían sus posibilidades de estudiar varias proteínas en un solo blot. Obtenga comparaciones significativas y representativas para mejorar sus experimentos. La tecnología Smart Exposure mejora aún más la adquisición de datos de Western blot por fluorescencia multiplex al garantizar que las relaciones señal-ruido se optimizan por separado en cada canal fluorescente.
En la tabla, se describen conjuntos de filtros preinstalados en los sistemas de adquisición de imágenes iBright FL1500 para aplicaciones de Western blot por fluorescencia de rangos de luz visibles (RGB) y rangos de infrarrojo cercano (NIR)
Canal de excitación | Rango de filtros (nm) | Canal de emisión | Rango de filtros (nm) | Ejemplo de fluoróforos compatibles |
EX1 | 455-485 | EM1 | 508-557 | Alexa Fluor Plus 488, Alexa Fluor 488 |
EX2 | 515-545 | EM2 | 568-617 | Alexa Fluor Plus 555, Alexa Fluor 546 |
EX3 | 608-632 | EM3 | 675-720 | Alexa Fluor Plus 647, Alexa Fluor 594 |
EX4 | 610-660 | EM4 | 710-730 | Alexa Fluor Plus 680, Alexa Fluor 680 |
EX5 | 745-765 | EM5 | 800-850 | Alexa Fluor Plus 800, Alexa Fluor 790 |
Transiluminador con LED verde
Los iBright Imaging Systems utilizan un transiluminador basado en LED verdes, que excitan eficazmente los colorantes de ADN populares, como el bromuro de etidio y el colorante SYBR Green, además de otros beneficios adicionales.
Sin rayos de UV dañinos: Si bien la luz UV excita eficazmente muchos colorantes y tinciones por fluorescencia, es un peligro para la salud. Además, la exposición prolongada a la luz UV puede dañar las muestras de ADN y poner en peligro la integridad de las muestras que se van a utilizar para aplicaciones posteriores, como la subclonación.
Sin residuos de mercurio: Las bombillas de transiluminadores UV pueden contener mercurio, una sustancia peligrosa y, por lo tanto, requieren un cuidado especial en su manipulación y eliminación.
Vida útil más larga: Las bombillas LED tienen una vida útil en tiempo real considerablemente mayor que las bombillas UV fluorescentes, lo que puede sumar un ahorro de costes considerable durante la vida útil del instrumento.
Flujo de trabajo de normalización de proteínas
Para tener en cuenta la variabilidad de las muestras debido a una concentración de muestras de proteínas desigual, una carga de muestras inconsistente en el gel y la transferencia desigual de proteínas del gel a la membrana, se efectúa a menudo un paso adicional llamado normalización en que se comparan proteínas de interés con controles internos de proteínas constitutivas, como GAPDH, β-tubulina, β-actina y muchas más. Aunque las proteínas constitutivas han sido la opción más popular históricamente para la normalización, las estrategias más recientes que implican la comparación de la proteína de interés con todas las proteínas han surgido como una alternativa potencialmente más exacta.
Para compatibilizar los métodos más adecuados para sus experimentos, los iBright Imaging Systems, y el iBright Analysis Software ofrecen diversas opciones de cuantificación y normalización para monitorizar o compensar matemáticamente la variabilidad experimental o de las muestras.
Normalización total de proteínas mediante el No-Stain Protein Labeling Reagent. Los geles Invitrogen™ Bolt™ 4-12 % Bis-Tris Plus se cargaron con lisado HeLa de 10 a 50 µg y se sometieron a electroforesis con tampón de corrida MES. Las proteínas de los geles se transfirieron a minimembranas de PVDF mediante el Invitrogen™ iBlot™ 2 Gel Transfer Device con los iBlot 2 Transfer Stacks (protocolo P0 durante 7 minutos). Las membranas de PVDF se lavaron dos veces durante 2 min con 20 mL de agua ultrapura en una plataforma giratoria, en la que se etiquetaron con 10 mL de una solución de trabajo de el No-Stain Protein Labeling Reagent en una plataforma giratoria durante 10 minutos. Las membranas se lavaron 3 veces durante 2 minutos con 20 mL de agua ultrapura en una plataforma giratoria, seguida de la adición de anticuerpos primarios Invitrogen™ contra la β-actina (N.º de cat. AM4302), GAPDH (N.º de cat. 398600), y α-tubulina (N.º de cat. 138000) y anticuerpo secundario Invitrogen™ caprino antimurino IgG Alexa Fluor™ Plus 680 (N.º de cat. A21058). Se adquirieron imágenes del blot con el Invitrogen™ iBright™ FL1500. El software iBright se utilizó para cuantificar la señal de proteína total en los carriles. El valor R² de los datos trazados para todo el intervalo de la señal de proteína total se determinó en 0,9990, mientras que los valores R² para β-actina, GAPDH y α-tubulina fueron 0,8851, 0,9438 y 0,8332, respectivamente.