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用于靶标富集、mRNA 合成、蛋白质和细胞捕获的的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠 |
Dynabeads 链霉亲和素产品
有许多的实验使用了 Dynabeads 链霉亲和素磁珠产品，超30,000多份文献引用了该产品，在无数的实验室货架上都能找到它。Dynabeads 链霉亲和素磁珠可用于细胞纯化、蛋白质分离、核酸捕获、mRNA 合成和 NGS 工作流程。
使用 Dynabeads 链霉亲和素磁珠进行用于 NGS 的靶标序列富集
二代测序 (NGS) 从核酸分离开始
二代测序 (NGS) 的第一步是进行核酸分离以制备文库。 二代测序的四个关键步骤通常包括文库制备、克隆扩增、文库测序、数据分析（按先后顺序）。
二代测序 (NGS) 是一种高通量、大规模平行测序技术，能够对 DNA 和 RNA 进行测序，从而研究与疾病和其他生物过程相关的遗传变异。应用包括全基因组测序、目标区域深度测序以及新病原体鉴定，从而推进传染病和微生物研究 。
NGS 彻底改变了基因分析，在基因组和临床研究、生殖健康以及环境、农业和法医科学领域实现了新的应用。
通过杂交捕获富集靶标用于 NGS
通过杂交富集法可以捕获样本中的靶标，因此可以充分覆盖已降解样本（无论使用的样本类型是来自于血液的 DNA、RNA 还是循环游离 DNA）中的各个基因组区域。
用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠是以磁珠的固体表面为基础的。杂交捕获使用合成的生物素化寡核苷酸探针（诱饵），该探针与感兴趣的靶标基因序列互补。生物素化探针与直径 1 μm 的链霉亲和素包被磁珠结合，将寡核苷酸固定到磁珠表面。随后扩增并制备已分离和纯化的靶标区域，用于测序。
图 1.NGS 工作流程中的靶标富集
图 2.使用链霉亲和素包被磁珠进行杂交捕获
用于 NGS 的基于磁珠的靶标富集解决方案
用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠具有以下优势：
- 高纯度—有助于尽可能减少非特异性结合
- 高重现性—获得一致的结果，且有助于降低失败风险
- 高灵敏度—确保 NGS 工作流程成功
- 自动化—支持高通量富集
链霉亲和素包被的 Dynabeads 产品是 NGS 工作流程中使用较多的磁珠产品，一些较大的 NGS 解决方案供应商也推荐使用该产品。
用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠在测序工作流程中的性能
图中显示了用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠（红条）、阳性对照以及来自其他4个供应商的链霉亲和素磁珠最终文库的实测浓度 [nM]（图3）。所有样本均一式三份 (n=3)。最终文库的浓度基于文库片段浓度和粒径分布进行计算。下游外显子组测序的可接受标准设置为 2.5 nM。
图3.终文库的浓度
用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠（图4，红条）、阳性对照以及来自2个供应商（这些供应商符合靶标富集浓度标准，如图3所列）的链霉亲和素磁珠的测序覆盖率。所有样本均一式三份 (n=3)，用三份平行样本的平均值来表示平均覆盖率。误差线为标准差。使用 Dynabeads 链霉亲和素磁珠进行靶标富集，得到的覆盖率较大（可构建共有序列的reads较多且准确度较高）。
图 4.平均覆盖率
用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠（图5，红条）、阳性对照以及来自2个供应商（这些供应商符合靶标富集浓度标准，如图3所列）的链霉亲和素磁珠的参考序列覆盖率 (%) 与覆盖深度。用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠在测序深度为 60x 时，97.53%的序列被至少60个reads覆盖 - 用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠的这种性能对于临床应用以及识别罕见变异（在深度覆盖 [例如 60x] 是基本要求的情况下）尤为重要。
图5.平均覆盖深度
用于 mRNA 合成的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠
mRNA 疫苗在对抗 SARS-CoV-2 方面的成功以及慢性病和传染性疾病的日益增多，使世界进入了疫苗开发的新时代。
用于体外转录的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠专为简单且可扩展的 mRNA 合成而设计，针对研究中的磁力分离进行了优化。
产品优势：
- 重复使用性—DNA 模板至少可重复使用6次，较大限度地减少了质粒制备工作
- 灵活性—选择合成或质粒 DNA 模板进行 mRNA IVT，使 mRNA 设计更加灵活
- 自动化—支持同时对许多样本进行高通量合成和纯化
图 6. 通过 体外 转录 (IVT) 进行 mRNA 合成
用于蛋白质和细胞捕获的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠
Dynabeads 链霉亲和素产品的优势
- 可重复性
- 低背景结合
- 高灵敏度
- 轻松实现自动化
- 无需离心、沉淀或过滤——您只需一个磁力架
- 稳健而温和，具有极佳的结合动力学
- 处理步骤少，无需样品稀释，样品损失非常小
可重复性
所有Dynabeads链霉亲和素磁珠产品均在完全控制参数的情况下生产，如磁珠粒径、表面积、铁含量和磁性能。不存在过量物理吸附的链霉亲和素，有助于确保不泄漏，以保证最小的批次差异。批次内 (CV <3%) 和批次间的统一特性和独特重现性有助于降低与质量控制测试相关的成本（ 图7 ）。无论用于研究项目还是 IVD 检测项目，您都可以信赖 Dynabeads链霉亲和素磁珠产品的一致性能。
图 7.粒径均一超顺磁性Dynabeads磁珠。每个磁珠均具有均匀分散的磁性材料，包裹在一个轻薄的聚合物外壳中。这为您对配体的结合提供了一个特定的表面。每个批次内的所有磁珠都完全一致（典型 CV <3%），因此具有一致的物理和化学性质。独特的批次间重现性（典型 CV <5%）保证了结果的重现性和质量。
快速且灵活
Dynabeads 链霉亲和素磁珠可通过快速液相动力学，即时高效地捕获生物素化分子。它的速度和灵敏度高于过滤器和基于滴定板的方法（图8）。Dynabeads产品为真正的球体，单位体积的表面积大。这实现了高效且稳定的结合能力。
图 8.Dynabeads 链霉亲和素磁珠的结合动力学优于传统的微量滴定板。该图显示了作为时间函数的肿瘤坏死因子 (TNF) 与固定化抗体的结合百分比。由位于挪威特隆赫姆的挪威科技大学的N-B Liabakk博士提供。
稳定且温和
Dynabeads链霉亲和素产品具有优异的机械与化学稳定性。不存在铁泄漏。酶活性不受抑制。单层的重组链霉亲和素有助于确保绝大多数生物素结合位点在空间上可用于结合。这项技术也非常温和，可以分离蛋白质以及大复合物或不稳定复合物。蛋白质的天然状态得以保留，而脆弱的细胞仍然存活。可采用灵活的体积，从而能够分离低丰度分子。高信噪比亦有助于提高灵敏度。
易于操作—手动或自动
磁性分离极其容易。无繁琐的离心、沉淀、过滤或柱。磁性处理可轻松洗涤、分离和浓缩目标。出色的分散能力以及无剩磁使得 Dynabeads 链霉亲和素产品成为手动和自动化实验方案（包括微流体系统）的理想选择。根据您的具体应用和目标分子，可采用直接或间接捕获方法。
使用链霉亲和素磁珠捕获分子和细胞的原理
当与生物素化的探针/配体结合使用时，任何靶分子均可由链霉亲和素偶联的Dynabeads捕获、分离和进一步操作。
直接或间接捕获？
根据您的目标分子和具体应用，可采用直接或间接捕获方法。
在某些应用中，使用预偶联配体进行直接捕获，允许您重复使用Dynabeads，从而进一步降低样品制备成本。
当目标物浓度较低、特异性亲和力较弱或结合动力学较慢时，间接方法可能会有所帮助。采用间接方法时，加入磁珠前，允许探针/配体在悬浮液中与靶标结合。
单层的链霉亲和素共价偶联到 Dynabeads 上，有助于确保可以忽略不计的泄漏，否则可能会干扰您的分析。
借助链霉亲和素磁珠以及与 KingFisher 仪器配合使用的能力，无需离心步骤或柱分离。
Dynabeads 磁珠支持更高通量的应用，可在 KingFisher 系列仪器上的24孔或96孔板中处理样本。
如要下载链霉亲和素方案，请访问 thermofisher.com/kingfisherprotocols 上的资料库，使用 BindIt 软件即可轻松定制方案。
如需了解 KingFisher 和 Dynabeads 如何使用，请查看应用指南匹配 FFPE 组织和液体活检样本中的突变检测灵敏度。
Dynabeads 链霉亲和素产品的优势
- 可重复性
- 低背景结合
- 高灵敏度
- 轻松实现自动化
- 无需离心、沉淀或过滤——您只需一个磁力架
- 稳健而温和，具有极佳的结合动力学
- 处理步骤少，无需样品稀释，样品损失非常小
可重复性
所有Dynabeads链霉亲和素磁珠产品均在完全控制参数的情况下生产，如磁珠粒径、表面积、铁含量和磁性能。不存在过量物理吸附的链霉亲和素，有助于确保不泄漏，以保证最小的批次差异。批次内 (CV <3%) 和批次间的统一特性和独特重现性有助于降低与质量控制测试相关的成本（ 图7 ）。无论用于研究项目还是 IVD 检测项目，您都可以信赖 Dynabeads链霉亲和素磁珠产品的一致性能。
图 7.粒径均一超顺磁性Dynabeads磁珠。每个磁珠均具有均匀分散的磁性材料，包裹在一个轻薄的聚合物外壳中。这为您对配体的结合提供了一个特定的表面。每个批次内的所有磁珠都完全一致（典型 CV <3%），因此具有一致的物理和化学性质。独特的批次间重现性（典型 CV <5%）保证了结果的重现性和质量。
快速且灵活
Dynabeads 链霉亲和素磁珠可通过快速液相动力学，即时高效地捕获生物素化分子。它的速度和灵敏度高于过滤器和基于滴定板的方法（图8）。Dynabeads产品为真正的球体，单位体积的表面积大。这实现了高效且稳定的结合能力。
图 8.Dynabeads 链霉亲和素磁珠的结合动力学优于传统的微量滴定板。该图显示了作为时间函数的肿瘤坏死因子 (TNF) 与固定化抗体的结合百分比。由位于挪威特隆赫姆的挪威科技大学的N-B Liabakk博士提供。
稳定且温和
Dynabeads链霉亲和素产品具有优异的机械与化学稳定性。不存在铁泄漏。酶活性不受抑制。单层的重组链霉亲和素有助于确保绝大多数生物素结合位点在空间上可用于结合。这项技术也非常温和，可以分离蛋白质以及大复合物或不稳定复合物。蛋白质的天然状态得以保留，而脆弱的细胞仍然存活。可采用灵活的体积，从而能够分离低丰度分子。高信噪比亦有助于提高灵敏度。
易于操作—手动或自动
磁性分离极其容易。无繁琐的离心、沉淀、过滤或柱。磁性处理可轻松洗涤、分离和浓缩目标。出色的分散能力以及无剩磁使得 Dynabeads 链霉亲和素产品成为手动和自动化实验方案（包括微流体系统）的理想选择。根据您的具体应用和目标分子，可采用直接或间接捕获方法。
使用链霉亲和素磁珠捕获分子和细胞的原理
当与生物素化的探针/配体结合使用时，任何靶分子均可由链霉亲和素偶联的Dynabeads捕获、分离和进一步操作。
直接或间接捕获？
根据您的目标分子和具体应用，可采用直接或间接捕获方法。
在某些应用中，使用预偶联配体进行直接捕获，允许您重复使用Dynabeads，从而进一步降低样品制备成本。
当目标物浓度较低、特异性亲和力较弱或结合动力学较慢时，间接方法可能会有所帮助。采用间接方法时，加入磁珠前，允许探针/配体在悬浮液中与靶标结合。
单层的链霉亲和素共价偶联到 Dynabeads 上，有助于确保可以忽略不计的泄漏，否则可能会干扰您的分析。
借助链霉亲和素磁珠以及与 KingFisher 仪器配合使用的能力，无需离心步骤或柱分离。
Dynabeads 磁珠支持更高通量的应用，可在 KingFisher 系列仪器上的24孔或96孔板中处理样本。
如要下载链霉亲和素方案，请访问 thermofisher.com/kingfisherprotocols 上的资料库，使用 BindIt 软件即可轻松定制方案。
如需了解 KingFisher 和 Dynabeads 如何使用，请查看应用指南匹配 FFPE 组织和液体活检样本中的突变检测灵敏度。
表1.Dynabeads 链霉亲和素产品。
| 产品 | 结合能力 | 特征和性质 | 适合 |
|---|---|---|---|
| 用于靶标富集的 Dynabeads 链霉亲和素磁珠 | 游离生物素： 950-1,500 pmol/mg 磁珠 dsDNA：~20 μg/mg 磁珠 ss 寡核苷酸： ~400 μg/mg 磁珠 |
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| Dynabeads M-280 链霉亲和素磁珠 | 游离生物素： 490-750 pmole/mg 磁珠 生物素化 Ig： 5-10 µg/mg 磁珠 |
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| Dynabeads MyOne 链霉亲和素 T1 磁珠 | 游离生物素： 950-1500 pmole/mg 磁珠 生物素化 Ig： 20 µg/mg 磁珠 |
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| Dynabeads M-270 链霉亲和素磁珠 | 游离生物素： >950 pmole/mg 磁珠 生物素化 Ig： 5-10 µg/mg 磁珠 |
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| Dynabeads MyOne 链霉亲和素 C1 磁珠 | 游离生物素： > 2,800 pmole/mg 磁珠 生物素化 Ig： 15-20 µg/mg 磁珠 |
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| Dynabeads kilobaseBINDER 试剂盒 | 4 kb 生物素化 DNA 片段：70 pmole/mg 磁珠；10 kb 生物素化 DNA 片段：80 pmole/mg 磁珠 >195 μg (6 pmol) 生物素化 50 kb DNA 片段 /mg 磁珠 |
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| Dynabeads 生物素结合剂 | 处理 2 x 109 个细胞 (PBMC) 或 200 mL 全血 |
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| CELLection 生物素结合剂试剂盒 | 处理 2 x 109 细胞 (PBMC) 或 200 mL 全血 |
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| Dynabeads FlowComp Flexi | 处理 2 x 109 个细胞 (MNC) 或 80 mL 全血/血沉棕黄层 |
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链霉亲和素磁珠应用
| 典型应用 | 首选产品 | |
|---|---|---|
核酸捕获 |
| |
蛋白质捕获 |
| |
细胞捕获 |
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订购信息
相关资源
仅供科研使用，不可用于诊断目的。