Image of an AAV particle

CTS AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统

借助补充研究和按照 cGMP 生产的 AAV-MAX 解决方案,加快临床前进程。完善的 AAV 生产系统有助于实现从研究到临床和商业生产的无缝转化。

研究&开发 → 临床前 → 临床和商业生产

图标描绘了细胞培养、转染和生产以及 AAV-MAX 系统的 AAV 提取组件
图1.CTS AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统组件。

RUO 生产系统和 CTS AAV-MAX 生产系统的比较

AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统能够实现从发现到研究和商业开发生产的平稳过渡,它提供了一个经优化、可扩展的平台,并提供了研究级和 cGMP 标准级试剂选项。图2展示了 CTS 和 RUO 系统在两种血清型上的等效性。

Bar chart comparing titers obtained from CTS and RUO AAV-MAX systems

 

图2.研究级 (RUO) 与 CTS 试剂之间的 AAV 滴度比较。 AAV 血清型 AAV2 和 AAV6 是以 30 mL 的生产规模在 125 mL 摇瓶中生产的。病毒滴度测定结果表明,RUO 和 CTS AAV-MAX 系统试剂的性能等效。滴度通过 qPCR 测定。

属性AAV-MAX (RUO)CTS AAV-MAX
预期用途仅供研究使用供研究使用或生产基于细胞,基因或组织的产品
目录包装规格1-10 L 生产规模1–100 L 生产规模
配方相同(培养基需要添加 GlutaMAX)相同(培养基含有 GlutaMAX)
性能相同相同
生产者细胞系
  • 研究专用库
  • 检测支原体、活性和无菌性
  • 产品文档包括 COA
  • cGMP 库
  • 检测支原体、活性、无菌性和人类病原体(外源物)
  • 产品文档包括 COA 和 COO
  • 提供细胞系文档包
法规支持文档
  • DMF
  • 法规支持文件
GMP 生产规范在通过 ISO 90001 或 ISO 13485 认证的场所中生产生产符合 GMP 关于医疗器械的规定、21 CFR 第820部分、《美国药典》第<1043>条和《欧洲药典》第 5.2.12 条的有关规定。在通过 ISO 13485 认证的场所中生产

CTS AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统组件

CTS 病毒生产细胞 (VPC) 2.0

  • 克隆性 293F 来源的高产细胞系
  • 经过优化,可在化学成分明确的培养基中进行高密度悬浮培养(>12 x 106 个细胞/mL)
  • 无 SV40 大 T 抗原或基因工程
  • 强大的可扩展性和传代稳定性 
  • 按照 21 CFR 211 和 EudraLex 第4卷进行记录和基于 cGMP 库进行生产,并按照 ICH Q5A 和 ICH Q5D 指导原则进行表征
VPC 2.0 细胞系生长曲线图
图3. 病毒生产细胞2.0在多次传代过程中保持相似的生长曲线。 在病毒生产培养基中培养细胞,然后在接种后第4天至第7天测定培养活性和 VCD。

培养基

  • CTS 病毒生产培养基
    • 无动物源性成分
    • 化学成分明确
    • 无蛋白
    • 无酚红
    • 提供最大规格为 100 L 的现成包装
    • 高级制粒技术 (AGT) 规格
      • 颗粒状干燥培养基规格
      • 无动物源性成分
      • 化学成分明确
      • 无蛋白
      • 无酚红
      • 提供最大规格为 100 L 的现成包装
      • AGT 颗粒可快速溶解,并已针对 pH 和渗透压进行预调
    CTS AAV-MAX 活细胞密度和活性图
    图4.CTS 病毒生产培养基支持在多种规模的细胞培养中对 VPC 2.0 进行7天的高密度和稳定培养,而且无需额外的营养支持。VPC 2.0 在各种规模的培养中均以 0.5 x 106 个细胞/mL 的浓度开始培养,然后用 Vi-Cell XR 测定7天的生长情况。除了 5 L 摇瓶为 Corning 产品外,所用的其余摇瓶均为 Nalgene(赛默飞世尔科技)。

    转染和生产

    • CTS AAV-MAX 转染试剂和转染加强剂(AOF、CD)
    • CTS AAV-MAX 增强剂(AOF、CD)
    • CTS Viral-Plex™ 络合缓冲液(AOF、CD,无蛋白)

    图5.添加和未添加增强剂的 AAV 生产结果。在转染当天 (T=0),将增强剂添加到制备的 VPC 2.0(3 x 106 个细胞/mL)中。为进行转染,将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时,将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中,在 37℃ 下收获 AAV 2小时,然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加增强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。

    图6.转染期间添加和未添加加强剂的 AAV 生产结果。为进行转染,将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时,将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中,在 37℃ 下收获 AAV 2小时,然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加加强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。

    CTS 病毒生产细胞 (VPC) 2.0

    • 克隆性 293F 来源的高产细胞系
    • 经过优化,可在化学成分明确的培养基中进行高密度悬浮培养(>12 x 106 个细胞/mL)
    • 无 SV40 大 T 抗原或基因工程
    • 强大的可扩展性和传代稳定性 
    • 按照 21 CFR 211 和 EudraLex 第4卷进行记录和基于 cGMP 库进行生产,并按照 ICH Q5A 和 ICH Q5D 指导原则进行表征
    VPC 2.0 细胞系生长曲线图
    图3. 病毒生产细胞2.0在多次传代过程中保持相似的生长曲线。 在病毒生产培养基中培养细胞,然后在接种后第4天至第7天测定培养活性和 VCD。

    培养基

    • CTS 病毒生产培养基
      • 无动物源性成分
      • 化学成分明确
      • 无蛋白
      • 无酚红
      • 提供最大规格为 100 L 的现成包装
      • 高级制粒技术 (AGT) 规格
        • 颗粒状干燥培养基规格
        • 无动物源性成分
        • 化学成分明确
        • 无蛋白
        • 无酚红
        • 提供最大规格为 100 L 的现成包装
        • AGT 颗粒可快速溶解,并已针对 pH 和渗透压进行预调
      CTS AAV-MAX 活细胞密度和活性图
      图4.CTS 病毒生产培养基支持在多种规模的细胞培养中对 VPC 2.0 进行7天的高密度和稳定培养,而且无需额外的营养支持。VPC 2.0 在各种规模的培养中均以 0.5 x 106 个细胞/mL 的浓度开始培养,然后用 Vi-Cell XR 测定7天的生长情况。除了 5 L 摇瓶为 Corning 产品外,所用的其余摇瓶均为 Nalgene(赛默飞世尔科技)。

      转染和生产

      • CTS AAV-MAX 转染试剂和转染加强剂(AOF、CD)
      • CTS AAV-MAX 增强剂(AOF、CD)
      • CTS Viral-Plex™ 络合缓冲液(AOF、CD,无蛋白)

      图5.添加和未添加增强剂的 AAV 生产结果。在转染当天 (T=0),将增强剂添加到制备的 VPC 2.0(3 x 106 个细胞/mL)中。为进行转染,将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时,将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中,在 37℃ 下收获 AAV 2小时,然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加增强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。

      图6.转染期间添加和未添加加强剂的 AAV 生产结果。为进行转染,将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时,将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中,在 37℃ 下收获 AAV 2小时,然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加加强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。

      扩展 CTS AAV-MAX 系统

      现有 AAV 生产系统面临的相关挑战包括滴度低、cGMP 质粒 DNA 成本高、可扩展性较差,以及缺乏适用的 cGMP 标准生产试剂。借助 CTS AAV-MAX 系统,您可使用预先优化的试剂生产高滴度 AAV,从而克服这些挑战。该试剂获得产品特异性法规支持,专为在可扩展悬浮平台(可在扩大规模的同时保持体积病毒滴度)中生产 AAV 而开发。

      图7在 250 mL 摇瓶和 50 L 生物反应器中生产 AAV 的 AAV6 基因组滴度。AAV6 的生产是使用了完善的 CTS AAV-MAX 系统。粗提样本中的滴度通过 ddPCR 测定。

      用于 AAV-MAX 生产工作流程的细胞治疗系统 (CTS) 试剂

      Gibco 细胞治疗系统 (CTS) 试剂是按照 GMP 生产的产品,专为细胞和基因治疗设计,因此您可放心地从法疗法走向临床应用。

      cGMP 生产规范检测和文档记录经验证的使用
      生产符合 GMP 关于医疗器械的规定、21 CFR 第820部分、《美国药典》第<1043>条和《欧洲药典》第5.2.12条。生产场所已在 FDA 注册,通过了 ISO 13485 认证,并且定期接受稽查。

      可追溯性文档—包括药品主文件 (DMF) 和/或法规支持文件 (RSF)、原产地证书 (CoO)。

      产品安全检测—包括适用产品的无菌性、内毒素和支原体。

      应用于 FDA 批准及 EMA 批准的 CAR T 治疗和较先得到 FDA 批准的治疗性癌症疫苗。[1]

      应用于100多项临床试验。

      1. Madan RA and Gulley JL.(2011) Sipuleucel-T: harbinger of a new age of therapeutics for prostate cancer.Expert Rev Vaccines.
      相关资源
      支持中心

      本页上所述产品的预期用途各不相同。关于特定的预期用途声明,请参见产品标签。