HPLC分析方法转移
梯度延迟
加热模式
额外体积
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HPLC分析方法转移是使分析方法适应不同的HPLC系统。两种仪器越相似，过程就越简单。

常见的分析方法转移类型包括将HPLC方法转换为UHPLC方法，以优化速度和通量。其他情况涉及到将经验证的方法从一个实验室转移到另一个实验室，例如从研发转移到运营或临床实验室。

无论系统相似性如何，仪器间转移通常会因硬件和软件技术的不同而产生差异，对不同制造商生产的系统来说尤其如此。

影响HPLC分析方法转移的硬件参数

梯度延迟体积、泵类型、色谱柱加热模式、检测器流通池体积、检测器设置和柱外体积等参数会影响HPLC已转移方法的重现性。 要在方法转移过程中克服挑战、在转移的两种仪器均获得相等结果，最好在转移过程中考虑系统的所有参数。

梯度延迟体积 (GDV)    

梯度延迟体积是指从洗脱液混合点到柱头的体积。

  • 仪器 GDV在成功的HPLC或UHPLC方法转移中发挥核心作用。 了解更多 ›
  • 不同仪器的GDV变更会改变分辨率和保留时间，因此，改变 GDV 是方法转移中的一种标准解决方案。了解更多 ›

由于所有仪器的GDV均不同，匹配体积差异并不总是一项简单的任务。

影响梯度延迟体积的因素

流动相混合点与柱头之间的所有体积都会影响GDV，但通常来说泵带来的影响最大。除混合器体积外，泵类型也至关重要，因为低压混合泵的GDV比高压混合泵高得多。

样本体积和周围流动相的混合效应也关系到新系统上的峰形重建。小尺寸管路有助于减少柱前和柱后的峰分散。较大的体积可改善样本塞的柱前混合，如果样本溶剂具有较高的洗脱强度，尤其会对早期洗脱峰产生积极影响。

转移方法时，检测器流通池体积值得注意，因为所有体积都会影响检测前的峰分散。流通池体积应比峰体积小，检测器设置必须一致且能够投射适当形状。    

加热模式的影响

在HPLC分析方法转移过程中，人们往往轻视了让HPLC色谱柱和流动相保持恒温或对其加热的作用。

由于径向或轴向温度梯度，不同的色谱柱加热模式（如静止空气和增压空气）搭配柱前加热会对分离选择性产生不同影响。在高于 400 bar 的压力下（此时色谱柱材料会摩擦生热）进行分离时，这种影响尤其明显。

柱外体积影响

若能确保新仪器的柱外体积(ECV)与原系统相符，您便能够成功进行HPLC分析方法转移，而无需重新验证。

柱前体积会拓宽样本塞并平滑梯度。柱后体积仅影响分析物条带变宽。柱前和柱后体积均会影响分析物保留时间。

值得注意的是，与HPLC方法相比，UHPLC方法的数据变异性更加明显。在HPLC分析方法转移过程中，务必考虑ECV的变化，特别是在不同型号和制造商的系统之间转移成熟方法时。

方法转移人员应重视方法转移的复杂性以及在转移过程中遇到保留时间重现性和其他问题的可能性。为避免转移过程受阻，您应该仔细分析方法参数、系统功能和兼容性。以下是一些专家资源，可助您做好方法转移准备并解决您的任何问题。

将HPLC或UHPLC分析方法从一台仪器转移到另一台仪器时，无需感到压力很大。本视频将向您介绍一些专家提示和较好做法，您可使用其顺利进行LC方法转移。

 
 
 
常见问题解答

HPLC中的分析方法转移是什么？

方法转移是使分析方法适应不同的LC系统。常见情形包括将HPLC方法转换为UHPLC方法，以优化速度和通量。其他情况涉及到将经验证的方法从研发转移到运营或临床实验室。

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