Search Thermo Fisher Scientific
细胞表观遗传学检测
研究表观遗传酶及其相应修饰时的一个挑战是，它们存在于多种蛋白质复合物中，而这些复合物会影响其活性。 因此，通过使用治疗相关细胞背景进行基于细胞的检测，可极大的促进对这些酶的研究，以及对可以在体内转化为有用药物的化合物识别的能力。
使用我们的 BacMam 组蛋白 H3 细胞检测试剂盒，您可在所选的细胞背景或多种细胞背景下选择与您感兴趣的酶相对应的修饰。
点击下列标签，了解更多信息。
检测原理
BacMam 试剂可用于转导您的细胞并在您的目标细胞背景中驱动 GFP-组蛋白 H3 融合蛋白的表达。GFP-组蛋白 H3 现已用作多种表观遗传酶（如甲基转移酶）的底物。 当存在铽 (Tb) 标记的修饰特异性抗体（例如抗组蛋白 H3K4me2）时，抗体与组蛋白 H3 底物的结合会导致 GFP 和 Tb 之间发生时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET)。
在存在经化合物处理的细胞的情况下监测 TR-FRET 读数，可识别针对该特定修饰的表观遗传酶的抑制剂。
图1. 检测概述。将细胞与编码 GFP 标记组蛋白 H3 蛋白的 BacMam 试剂混合，并接种到384孔检测板上。将未经处理或经化合物处理的细胞孵育20至24小时。在存在铽 (Tb) 标记的修饰特异性抗体的情况下裂解细胞，并使用具有标准 TR-FRET 设置的荧光微孔板读数仪检测 TR-FRET。
检测优势
BacMam 组蛋白 H3 细胞检测将 BacMam 的可转导性与 LanthaScreen® 技术相结合，可在天然细胞环境中检测组蛋白 H3 的表观遗传修饰。
| 对于表观遗传学研究人员而言，主要优势如下： |
|---|
|
|
|
|
|
|
了解更多信息：
- 基于 BacMam 的细胞检测
- LanthaScreen™ 细胞检测技术
各种细胞类型中的 H3K27me3 检测
图 1. 在各种细胞背景中检测组蛋白 H3 第27位赖氨酸三甲基化。BacMam 可将这些检测转导到相关细胞背景中。 在此，向一组不同类型的细胞中添加了 BacMam 组蛋白 H3 试剂，以达到所示的病毒浓度 (v/v)。随后通过添加 LanthaScreen® Tb-anti-Histone H3K27me3 抗体可检测 TR-FRET 信号，基于细胞背景显示一系列检测窗口。 检测窗口的差异可归因于组蛋白 H3 甲基化状态的变化和/或细胞背景的转导效率等因素。
EZH2 RNAi 能够降低 H3K27me3 水平
图 1. siRNA 敲低分析显示 EZH2 RNAi 能够降低 HeLa 细胞中的 H3K27me3 水平。使用 Stealth RNAi 寡核苷酸分析四种不同的甲基转移酶对 HeLa 细胞中组蛋白 H3 第27位赖氨酸三甲基化的贡献。使用 15% BacMam 组蛋白 H3 试剂，在 EZH2 中对 H3K27me3 的 RNAi 敲低最显著，这与预期一致。
| 组蛋白甲基转移酶 | 组蛋白 H3 赖氨酸修饰 |
|---|---|
| SETD7 (SET7/9) | H3K4me1 |
| SMYD3 | H3K4me2 和 H3K4me3 |
| EHMT2 (G9a) | H3K9me1 和 H3K9me2 |
| EZH2 | H3K27me1、K27me2、K27me3 |
检测原理
BacMam 试剂可用于转导您的细胞并在您的目标细胞背景中驱动 GFP-组蛋白 H3 融合蛋白的表达。GFP-组蛋白 H3 现已用作多种表观遗传酶（如甲基转移酶）的底物。 当存在铽 (Tb) 标记的修饰特异性抗体（例如抗组蛋白 H3K4me2）时，抗体与组蛋白 H3 底物的结合会导致 GFP 和 Tb 之间发生时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET)。
在存在经化合物处理的细胞的情况下监测 TR-FRET 读数，可识别针对该特定修饰的表观遗传酶的抑制剂。
图1. 检测概述。将细胞与编码 GFP 标记组蛋白 H3 蛋白的 BacMam 试剂混合，并接种到384孔检测板上。将未经处理或经化合物处理的细胞孵育20至24小时。在存在铽 (Tb) 标记的修饰特异性抗体的情况下裂解细胞，并使用具有标准 TR-FRET 设置的荧光微孔板读数仪检测 TR-FRET。
检测优势
BacMam 组蛋白 H3 细胞检测将 BacMam 的可转导性与 LanthaScreen® 技术相结合，可在天然细胞环境中检测组蛋白 H3 的表观遗传修饰。
| 对于表观遗传学研究人员而言，主要优势如下： |
|---|
|
|
|
|
|
|
了解更多信息：
- 基于 BacMam 的细胞检测
- LanthaScreen™ 细胞检测技术
各种细胞类型中的 H3K27me3 检测
图 1. 在各种细胞背景中检测组蛋白 H3 第27位赖氨酸三甲基化。BacMam 可将这些检测转导到相关细胞背景中。 在此，向一组不同类型的细胞中添加了 BacMam 组蛋白 H3 试剂，以达到所示的病毒浓度 (v/v)。随后通过添加 LanthaScreen® Tb-anti-Histone H3K27me3 抗体可检测 TR-FRET 信号，基于细胞背景显示一系列检测窗口。 检测窗口的差异可归因于组蛋白 H3 甲基化状态的变化和/或细胞背景的转导效率等因素。
EZH2 RNAi 能够降低 H3K27me3 水平
图 1. siRNA 敲低分析显示 EZH2 RNAi 能够降低 HeLa 细胞中的 H3K27me3 水平。使用 Stealth RNAi 寡核苷酸分析四种不同的甲基转移酶对 HeLa 细胞中组蛋白 H3 第27位赖氨酸三甲基化的贡献。使用 15% BacMam 组蛋白 H3 试剂，在 EZH2 中对 H3K27me3 的 RNAi 敲低最显著，这与预期一致。
| 组蛋白甲基转移酶 | 组蛋白 H3 赖氨酸修饰 |
|---|---|
| SETD7 (SET7/9) | H3K4me1 |
| SMYD3 | H3K4me2 和 H3K4me3 |
| EHMT2 (G9a) | H3K9me1 和 H3K9me2 |
| EZH2 | H3K27me1、K27me2、K27me3 |
仅供科研使用，不可用于诊断目的。
CMD SchemaApp code