在微量滴定板范围内重建相关生物模型的固有困难往往导致早期发现工作仅限于使用纯化成分的简易检测系统。 此类模型无法在相应的复杂细胞环境中探查您的靶标。 尽管存在这一关键缺点，但鉴于复杂性、时间和成本方面的明显差异，相对于基于细胞的检测，通常优先选择生化检测。

我们的 LanthaScreen™ 细胞检测方案可用于检测翻译后修饰，例如在天然细胞环境中发生的特定靶蛋白的泛素化。 通过将靶蛋白表达为与 GFP 的融合物，在细胞裂解后可使用泛素的经 TR-FRET 供体伴侣铽标记的修饰特异性抗体定量检测这些修饰（图1），因而为 Western 印迹或 ELISA 等方法提供了一种更高通量的替代方案。

Figure 1. Schematic of the LanthaScreen™ GFP assay format.

图1. LanthaScreen™ 细胞检测形式的示意图。

细胞泛素化检测案例：NFkappaB 通路

NFkappaB 通路的激活可诱导信号转导级联反应，导致 IkappaBalpha 发生磷酸化、泛素化和蛋白酶体降解。IkappaBalpha 降解后，释放的 NFkappaB 转移到细胞核内从而激活靶基因表达。 使用表达 GFP–IkappaBalpha 的克隆细胞系，我们开发了一种细胞测定方案，能够用于测定内源表达的 IkappaBalpha 所发生的 TNFalpha 依赖性泛素化（图2）。该技术提供了一种非常有效的方法用于探查 NFkappaB 信号传导过程的中间步骤，而不会影响信号传导通路的内源生理复杂性。

Measuring ubiquitination of GFP–IkBalpha in response to agonist stimulation.  图2. 测量 GFP-IkBalpha 在激动剂刺激下发生的泛素化。 

A. 该 LanthaScreen™ 检测形式的基础是使用长效 Tb 螯合物作为供体物质并使用荧光素作为受体。当 Tb 和荧光素标记的分子靠近时，会发生能量转移，导致受体荧光增加和供体荧光减少。可采用时间分辨方式读取这些荧光信号，以减少检测干扰并提高数据质量。B. 时间分辨光谱表明了当 Tb 和荧光素通过生物分子相互作用靠近时发生的能量转移。将 TR-FRET 值确定为 FRET 特异性信号（使用 520 nm 滤光片测量）与铽特异性信号（使用 495 nm 滤光片测量）的比率。插图显示了无能量转移时的时间分辨光谱。

仅供科研使用，不可用于诊断目的。

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